膀胱尿路上皮癌中Fascin和Ezrin的表達及相關(guān)性

孟淑娟，陳小君，尹 豐，于永利，王玉華，鄭素琴

(1. 唐山鋼鐵集團有限責(zé)任公司醫(yī)院，河北 唐山 063000；2. 河北省唐山市曹妃甸區(qū)工人醫(yī)院，河北 唐山 063120；3. 河北聯(lián)合大學(xué)，河北 唐山 063000)

膀胱尿路上皮癌中Fascin和Ezrin的表達及相關(guān)性

孟淑娟1，陳小君2，尹 豐1，于永利1，王玉華1，鄭素琴3

(1. 唐山鋼鐵集團有限責(zé)任公司醫(yī)院，河北 唐山 063000；2. 河北省唐山市曹妃甸區(qū)工人醫(yī)院，河北 唐山 063120；3. 河北聯(lián)合大學(xué)，河北 唐山 063000)

目的 對Fascin和Ezrin在膀胱尿路上皮癌的表達及二者的表達的相關(guān)性進行研究。方法 采用免疫組化S-P法檢測Fascin和Ezrin在10例膀胱癌旁黏膜及109例膀胱尿路上皮癌中的表達情況，探討二者與膀胱尿路上皮癌的組織學(xué)分級及臨床分期等臨床病理特征的關(guān)系，統(tǒng)計分析二者在膀胱尿路上皮癌的表達的相關(guān)性。結(jié)果 Fascin在10例癌旁黏膜組織中均不表達，Ezrin在10例癌旁黏膜組織的表達陽性率為10%，二者在109例膀胱尿路上皮癌中的表達陽性率分別為84%，77%。二者的表達均與膀胱尿路上皮癌的組織學(xué)分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P均<0.05)，與患者的性別及腫瘤是否多發(fā)無關(guān)(P均>0.05)。二者在膀胱尿路上皮癌的表達具有相關(guān)性，為正相關(guān)(r=0.912 4,P<0.05)。結(jié)論推測在膀胱尿路上皮癌中Fascin與Ezrin具有協(xié)同作用，聯(lián)合檢測Fascin和Ezrin有助于判斷膀胱尿路上皮癌的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后。

膀胱尿路上皮癌；Fascin；Ezrin；免疫組化

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其中絕大多數(shù)為尿路上皮癌，以浸潤的方式生長，復(fù)發(fā)率為50%～70%，超過30%的復(fù)發(fā)病例伴有惡性程度增高或浸潤能力增強[1]。復(fù)發(fā)和浸潤能力增強是膀胱癌治療失敗的主要原因。腫瘤細胞侵襲能力的增高是實現(xiàn)浸潤和轉(zhuǎn)移的前提。侵襲的腫瘤細胞常表現(xiàn)出特殊的形態(tài)特征，如出現(xiàn)細胞膜突起、細胞間黏著及連接喪失[2]。這些變化被認為是幾種actin交聯(lián)蛋白導(dǎo)致細胞骨架重排的結(jié)果。Fascin蛋白、Ezrin蛋白同為細胞骨架蛋白，在腫瘤的這一過程中扮演了重要的角色，與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[3]。本研究探討了膀胱尿路上皮癌中Fascin和Ezrin的表達及二者的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集2009年9月—2012年10月在唐鋼醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除并保存完好的膀胱尿路上皮癌石蠟標(biāo)本109例，患者均為初發(fā)病例，術(shù)前均未接受放、化療；其中男78例，女31例；年齡55～85歲，中位年齡68歲。根據(jù)1973年WHO公布的膀胱惡性腫瘤病理分級方法：G1 28例，G2 45例，G3 36例；臨床分期根據(jù)UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn)：淺表型(Tis～T1)63例，浸潤型(T2～T4)46例；腫瘤單發(fā)35例，多發(fā)74例；術(shù)后證實18例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，91例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。另取癌旁黏膜組織標(biāo)本10例，均取自開放性手術(shù)斷端，距腫瘤邊緣>5 cm，經(jīng)病理確診無癌組織浸潤。所有病例的臨床病理資料完整，經(jīng)高年資病理醫(yī)師復(fù)查HE切片，證實病理診斷，并確定組織學(xué)分級及臨床分期。

1.2 實驗試劑 鼠抗人Fascin單克隆抗體(工作液，克隆號FCN01)，鼠抗人Ezrin單克隆抗體(工作液，克隆號3C12)，S-P通用二抗試劑盒，DAB顯色劑均購自上海太陽生物科技有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 免疫組化S-P法染色 組織經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，切成厚度4 μm組織切片；將組織切片貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上，并經(jīng)60 ℃烤2 h。實驗步驟嚴格按試劑說明書進行。陽性對照Fascin用脾組織切片，Ezrin用結(jié)腸癌組織切片，BPS代替一抗作陰性對照。

1.3.2 免疫組化結(jié)果判定 所有組織切片的評分由2名病理醫(yī)師在不知情的前提下各自獨立進行，遇到結(jié)果不一致時，2名醫(yī)師討論，得出綜合分析意見。Fascin和Ezrin表達陽性信號為棕黃色至棕褐色顆粒，均定位于細胞胞漿和/或胞膜，依據(jù)染色強度和陽性細胞計數(shù)得分相乘評分。①染色強度計分標(biāo)準(zhǔn)：用以確定為陽性的乳腺癌標(biāo)本的反應(yīng)強度作為對照，無色為0分,表達強度弱于它為1分,與其相同為2分,比之強為3分。②陽性細胞計數(shù)：普通光鏡相同放大倍數(shù)下計數(shù)陽性細胞數(shù)，少于25%為1分,25%～50%為2分,51%～75%為3分,75%以上為4分。兩項得分相乘分為4個級別：0分(-),1～4分(+，弱陽性),5～8分(，中度陽性),9～12分(，強陽性)。統(tǒng)計學(xué)分析時，(+)以上視為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)處理采用2檢驗和Spearman相關(guān)性檢驗，小樣本資料采用Fisher精確概率檢驗法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Fascin的表達 Fascin在109例膀胱尿路上皮癌中的陽性表達率為83.5%(91/109),癌旁黏膜中無表達。癌旁黏膜組與膀胱尿路上皮癌組Fascin陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Fascin的表達隨著膀胱尿路上皮癌的臨床分期及組織學(xué)分級的升高而增強(P<0.05)，并與淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達與患者的性別及腫瘤數(shù)目無關(guān)(P>0.05)。見表1、圖1及圖2。

2.2 Ezrin的表達 Ezrin表達陽性率在109例膀胱尿路上皮癌中為77.1%(84/109)、在10例癌旁黏膜中為20%(2/10)；癌旁黏膜組與膀胱尿路上皮癌組Ezrin陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。Ezrin的表達隨著膀胱尿路上皮癌臨床分期及組織學(xué)分級的升高而增強(P<0.05)，并與淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。Ezrin在膀胱尿路上皮癌中的表達與患者的性別及腫瘤數(shù)目無關(guān)(P>0.05)。見表1、圖3和圖4。

表1 Fascin和Ezrin的表達及與膀胱尿路上皮癌臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

圖1 Fascin在浸潤性尿路上皮癌中陽性表達(IHC SP法)

圖2 Fascin在非浸潤性尿路上皮癌中陽性表達(IHC SP法)

2.3 Fascin和Ezrin在膀胱尿路上皮癌中表達的相關(guān)性 Fascin與Ezrin在膀胱尿路上皮癌中的表達均呈正相關(guān)，二者的高表達代表高級別和高臨床分期的膀胱尿路上皮癌，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達強于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的。見表2。

3 討 論

細胞骨架及其附屬結(jié)構(gòu)是細胞活動和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)。正常細胞在向惡性腫瘤細胞轉(zhuǎn)變的過程中，會喪失細胞極性，其異型性和運動性增加，同時細胞膜流動性及黏附性也會隨之下降，并出現(xiàn)生長調(diào)控機制的喪失[3]。腫瘤細胞的運動能力增強，突破基底膜侵入周圍組織，發(fā)生局部浸潤，是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移播散的前提。細胞形態(tài)、極性、黏附性和運動能力是由細胞骨架排列所決定的。通常細胞侵襲性增強時會發(fā)生一些特殊變化，主要表現(xiàn)為細胞突觸增多、細胞間黏附減弱以及通訊連接喪失等[4-5]。這是由于一些肌動蛋白結(jié)合蛋白及相關(guān)的連接蛋白導(dǎo)致細胞骨架重組所致。

表2 Fascin、Ezrin在膀胱尿路上皮癌表達的相關(guān)性 例

圖3 Ezrin在浸潤性尿路上皮癌中陽性表達(IHC SP法)

圖4 Ezrin在非浸潤性尿路上皮癌中陽性表達(IHC SP法)

Fascin蛋白即聚束蛋白，是細胞骨架蛋白的一種，因其可以和F-肌動蛋白結(jié)合成束狀結(jié)構(gòu)得名，屬于β三葉草家族，分子量為55 kD，定位于細胞質(zhì)張力纖維、細胞膜的絲狀偽足及微棘的核心肌動蛋白束中[6]。實驗證實Fascin作為細胞膜突起具有重要作用的結(jié)合蛋白，參與細胞運動能力以及細胞膜突起，協(xié)助細胞完成細胞附著、細胞間相互作用和細胞移動[7]。已有研究表明，在多種上皮性來源的腫瘤中Fascin蛋白高表達，并與腫瘤的高病理分級及高臨床分期和侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。研究證實Fascin的過表達會導(dǎo)致腫瘤細胞增殖周期變短，細胞膜突起增多，細胞間連接消失，黏附力下降，細胞運動能力增強[8]。本實驗中可以看出Fascin在癌旁黏膜中沒有表達，但在膀胱尿路上皮癌中表達明顯升高，與癌旁黏膜組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。另外本研究結(jié)果也顯示，F(xiàn)ascin的表達與患者的性別、腫瘤數(shù)目無關(guān)，但是與膀胱尿路上皮癌的臨床分期、組織學(xué)分級呈正相關(guān)，隨著膀胱尿路上皮癌臨床分期和組織學(xué)分級的升高，腫瘤細胞中Fascin蛋白表達增強，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的表達陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的。說明Fascin的表達可能對膀胱癌的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的促進作用，F(xiàn)ascin的高表達使患者更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，膀胱癌分級越高，患者預(yù)后越差。這與以往Fascin蛋白在上皮性腫瘤組織中的研究結(jié)果一致[9-11]。

Ezrin蛋白是細胞骨架結(jié)合蛋白，具有結(jié)合細胞骨架到細胞膜蛋白的能力，屬于Ezrin/Radix/Moesin緊密連接蛋白家族(ERM)中重要成員之一。Ezrin蛋白分子量為81kD，編碼基因為villin2，由585個氨基酸組成[12]。Ezrin主要分布于肌動蛋白集中的微絨毛、細胞皺褶、絲足等膜表面結(jié)構(gòu)中[13]。在細胞中Ezrin有休眠和激活2種狀態(tài)，當(dāng)自身的N端和C端發(fā)生作用，使蛋白形成頭尾相連的折疊狀態(tài)，造成Ezrin失活，即Ezrin的休眠狀態(tài)；當(dāng)N端和C端分離，使蛋白展開而同胞膜和細胞骨架發(fā)生作用，即Ezrin的激活狀態(tài)[14]。

Ezrin蛋白在體內(nèi)的表達和分布因組織器官不同而不同，在肺、胃、小腸、腎臟及胰腺等組織器官中高表達，胸腺、骨髓、脾臟和淋巴結(jié)等處中度表達，而腦、肌肉、睪丸和心臟等表達較弱[15]。研究發(fā)現(xiàn)Ezrin蛋白的表達與多種腫瘤有關(guān)。Ohtani等[16]發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌和不典型增生子宮內(nèi)膜組織中Ezrin蛋白的表達顯著高于良性子宮內(nèi)膜病變和正常子宮內(nèi)膜組織，轉(zhuǎn)移灶的表達比原發(fā)灶亦有增強。Kobel等[17]發(fā)現(xiàn)在卵巢癌中也存在Ezrin蛋白的高表達，并與卵巢癌患者的低生存率相關(guān)。在對食管癌[18]、胰腺癌等[19]的研究也表明Ezrin存在高表達。本實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ezrin在癌旁黏膜組織有表達，但是陽性率較低且表達較弱，但在膀胱尿路上皮癌中表達增強，陽性率比癌旁黏膜明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，提示Ezrin高表達可能參與膀胱尿路上皮癌的發(fā)生過程。同時Ezrin與膀胱尿路上皮癌的臨床分期、組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但與患者的性別及腫瘤的數(shù)目無關(guān)。說明Ezrin蛋白表達與膀胱尿路上皮癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，其高表達的患者更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，預(yù)后差。

細胞骨架的排列與細胞的形態(tài)密切相關(guān)，而細胞形態(tài)的改變將影響腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。Fascin蛋白是一種捆綁細胞骨架肌動蛋白微絲的細胞骨架蛋白，而Ezrin蛋白是一種連接細胞骨架肌動蛋白微絲與細胞膜的細胞骨架結(jié)合蛋白，二者在維持細胞形態(tài)中發(fā)揮著重要作用。目前的研究證實，F(xiàn)ascin、Ezrin均與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)[17-18]。一項對血管瘤的研究發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白與Ezrin蛋白在增生期血管瘤組織中呈高表達，研究者認為Fascin蛋白與Ezrin蛋白的表達破壞了細胞信號的平衡，促使血管內(nèi)皮細胞過度增生導(dǎo)致血管瘤的形成，可見Fascin與Ezrin在血管瘤的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同效應(yīng)[20]。李恩民[21]在食管癌的研究中，運用免疫組化、免疫熒光、組織芯片、cDNA基因表達譜芯片、Westernblotting、RT-PCR、RNA干擾和真核基因表達等系列實驗技術(shù)檢測Fascin與Ezrin在食管癌中的表達，證實Ezrin與Fascin在食管癌中的表達均顯著異常，且與患者的預(yù)后相關(guān)。其機制可能是Fascin與Ezrin在食管癌中的過表達激活了TGF-β等細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，影響靶基因CTGF、CYR61和ATF3等的表達，使食管癌細胞的生物學(xué)行為發(fā)生改變。本研究也顯示Fascin蛋白與Ezrin蛋白作為細胞骨架蛋白，在膀胱尿路上皮癌中表達均顯著增強，并與膀胱尿路上皮癌的病理分級、臨床分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)，二者在膀胱尿路上皮癌中具有相關(guān)性(P<0.05，r=0.912 4)。提示二者在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤過程中具有相互協(xié)同作用。聯(lián)合檢測Fascin及Ezrin可能有助于判斷膀胱尿路上皮癌的侵襲轉(zhuǎn)移及預(yù)后。

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Expressions of Fascin and Ezrin in bladder urothelial carcinoma and correlations between them

Meng Shujuan1, Chen Xiaojun2, Yin Feng1, Yu Yongli1, Wang Yuhua1, Zheng Suqin3

(1. Hospital of Tangshan Iron and Steel Group, Tangshan 063000, Hebei, China; 2. Work’s Hospital of Caofeidian District, Tangshan 063120, Hebei, China; 3. Hebei United University, Tangshan 063000, Hebei, China)

Objective It is to study the expressions of Fascin and Ezrin in bladder urothelial carcinoma and the correlations between them. Methods The expression of Fascin and Ezrin in 10 cases of mucous membrane beside bladder cancer and 109 cases of bladder urothelial carcinoma was detected by immunohistochemical S-P method, to explore their relationship with clinical pathological characteristics such as histological grading and clinical staging of bladder urothelial carcinoma, and statistical analysis about the correlation of the expression in bladder urothelial carcinoma was performed. Results Fascin was not expressed in 10 case of mucosa tissue adjacent to carcinoma, positive rate about the expression of Ezrin in 10 cases of mucosa tissue adjacent to carcinoma was 10%, the expression positive rates about Fascin and Ezrin in 109 cases of bladder urothelial carcinoma were respectively 84%, 77%. The expressions of the two were related with histological grading, clinical stage and lymph node metastasis of bladder urothelial carcinoma (P<0.05), but had nothing to do with patients’ gender and whether the tumor was multiple or not (P>0.05). Both Fascin and Ezrin had some correlation expressed in bladder urothelial carcinoma, and the correlation was positive(r=0.912 4,P<0.05). Conclusion Fascin and Ezrin in bladder urothelial carcinoma have synergy, detection both Fascin and Ezrin is helpful for the diagnosis of invasion, metastasis and prognosis of bladder urothelial carcinoma.

bladder urothelial carcinoma;Fascin;Ezrin;immunohistochemical

孟淑娟，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事病理診斷工作。

鄭素琴，E-mail：suqinzheng@163.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2014.35.008

R737.1

A

1008-8849(2014)35-3901-04

2014-04-20