李文彬+劉義飛+彭明+
摘要:為明確‘紅陽(yáng)獼猴桃果肉中花青素含量在季節(jié)性溫度下的合成變化情況及花青素合成酶基因AdANS表達(dá)的變化,以‘紅陽(yáng)主產(chǎn)區(qū)四川蒲江和湖北武漢的‘紅陽(yáng)獼猴桃為研究對(duì)象,測(cè)定其花青素的含量并克隆花青素合成基因AdANS,并對(duì)其轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,較高的季節(jié)性溫度對(duì)果肉花青素的含量有抑制作用,在溫度適宜的蒲江,AdANS基因的表達(dá)水平與花青素積累變化相一致,而在高溫的武漢其表達(dá)水平受到明顯的抑制。
關(guān)鍵詞:‘紅陽(yáng)獼猴桃;花青素;溫度波動(dòng);AdANS基因
中圖分類(lèi)號(hào):S663.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):0439-8114(2014)09-2070-05
Effects of Temperature on Anthocyanin Content and Anthocyanin Synthase (AdANS)
of ‘Hongyang Kiwifruit
LI Wen-bin1,2,3,LIU Yi-fei4,PENG Ming1
(1.Institute of Bioscience and Biotechnology, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou 571101, China;
2.Key Laboratory of Plant Germplasm Enhancement and Specialty Agriculture, Wuhan Botanical Garden, Chinese Academy of Scienes, Wuhan 430074, China; 3.University of Chinese of Academy of Sciences, Beijing 100039, China; 4.Key Laboratory of Plant Resources Conservation and Sustainable Utilization, South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China)
Abstract:To illustrate the changes of anthocyanin concentration and anthocyanin synthase under seasonal fluctuated temperature, the concentration of anthocyanin of ‘Hongyang kiwifruit from Pujiang, Sichuan and Wuhan, Hubei was measured under different seasonal temperatures. Anthocyanin synthase (AdANS) was cloned. Quantitative real time PCR (RT-PCR) was used to detect the expression of AdANS during fruit development. Result showed that seasonal high temperature had negative regulation on anthocyanin concentration in flesh. The expression level of AdANS was positively cor related with anthocyanin synthesis in Pujiang with suitable temperature and was inhibited greatly in Wuhan with high temperature.
Key words: ‘Hongyang kiwifruit; anthocyanin; temperature fluctuation; AdANS
獼猴桃(Actinidia chinensis Planch)馴化栽培至今已有100余年的歷史[1],因其具有獨(dú)特的風(fēng)味和豐富的營(yíng)養(yǎng)而受到廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)。尤其是‘紅陽(yáng)獼猴桃以其果實(shí)中心有放射狀紅色條紋,富含花青素而成為近年來(lái)消費(fèi)者的新寵。但該品種不耐夏季高溫干旱,特別是果肉紅色易受夏季溫度和濕度的影響,田間觀察發(fā)現(xiàn),在夏季溫度較高的武漢種植的‘紅陽(yáng)獼猴桃果肉的顏色非常淡,嚴(yán)重影響果實(shí)的商品價(jià)值[2]。
溫度是影響植物組織中花青素積累的一個(gè)非常重要的環(huán)境因子,研究表明低溫會(huì)誘導(dǎo)花青素的合成,而高溫(30~40 ℃)下果實(shí)中的花青素很難形成[3,4]。溫度對(duì)花青素合成的影響發(fā)生在其合成途徑的多步反應(yīng)中,在上游途徑中,溫度主要對(duì)苯丙氨酸解氨酶(PAL)、查耳酮合成酶(CHS)、查耳酮異構(gòu)酶(CHI)和黃烷酮-3-羥化酶(F3H)等的基因進(jìn)行調(diào)控,而對(duì)下游的調(diào)控主要通過(guò)對(duì)二氫黃酮還原酶(DFR)、花青素合成酶(ANS)和類(lèi)黃酮糖苷轉(zhuǎn)移酶(UFGT)等的基因進(jìn)行調(diào)控[5]。然而,目前為止,在‘紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)發(fā)育期間,即季節(jié)性溫度變化下果實(shí)中花青素含量的變化及與花青素合成基因的關(guān)系還未見(jiàn)報(bào)道。為此,試驗(yàn)對(duì)四川(‘紅陽(yáng)主產(chǎn)區(qū))和武漢‘紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)發(fā)育期間花青素含量及花青素合成酶基因(AdANS)的變化情況進(jìn)行研究,以期為溫度對(duì)花青素含量的影響及為提高‘紅陽(yáng)獼猴桃果肉的花青素含量提供科學(xué)依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)材料
試驗(yàn)所用材料為2012年四川蒲江(中興農(nóng)業(yè)科技有限公司提供)和湖北武漢(武漢植物園獼猴桃園)種植的有相同遺傳背景的‘紅陽(yáng)獼猴桃植株,各3株。從坐果到果實(shí)收獲整個(gè)果實(shí)發(fā)育期均不施用任何植物激素及肥料。
每次每株?。硞€(gè)果實(shí)取樣后用冰浴保溫箱帶回實(shí)驗(yàn)室,取有花青素積累的靠近種子的果肉,在液氮中速凍,-70 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1‘紅陽(yáng)獼猴桃發(fā)育過(guò)程中溫度的測(cè)定以當(dāng)?shù)貧庀缶痔峁┑漠?dāng)日天氣條件為準(zhǔn),分別記錄武漢及四川蒲江‘紅陽(yáng)獼猴桃種植區(qū)從花后60 d到成熟收獲(花后136 d)的日最高和最低溫度,考察‘紅陽(yáng)獼猴桃生長(zhǎng)期間溫度的變化。
1.2.2‘紅陽(yáng)獼猴桃果肉花青素的提取及測(cè)定果肉在液氮中研磨至粉末,然后用5倍體積的甲醇/水/乙酸(體積比80∶20∶1)提取,以錫箔紙包裹遮光,在搖床中28 ℃、200 r/min提?。常?min,于4 ℃冰箱中放置24 h,以0.45 μm的濾紙過(guò)濾留上清液,50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮備用[6]。
以美國(guó)Waters公司的Alliance2695液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定,C18柱(Nova-pak)規(guī)格為150 mm×3.9 mm,顆粒度4 μm。流動(dòng)相A為1%的甲酸,B相為乙腈,流速0.8 mL/min,530 nm處檢測(cè)。
花青素標(biāo)準(zhǔn)品為cyaniding 3-O-galactoside(Chromadex USA,CAS No.27661-36-5)和cyaniding 3-O-glucoside(WAKO,Japan,CAS No.7084-24-4)。
1.2.3‘紅陽(yáng)獼猴桃RNA的提取及檢測(cè)采用改良的CTAB法提?。遥危粒郏罚荨T囼?yàn)所用到的研缽、研杵、鑷子、藥匙等均于180 ℃滅菌4 h,離心管及槍頭均采用無(wú)RNA和DNA酶的一次性耗材。
RNA提取后,以1%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)所提取的RNA進(jìn)行完整性檢測(cè),以Nanodrop2000分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度及A260nm/A280nm。
1.2.4AdANS基因的克隆、驗(yàn)證及序列分析根據(jù)已有獼猴桃EST序列及獼猴桃基因組測(cè)序結(jié)果,以cDNA為模板克隆得到一個(gè)花青素合成基因AdANS,將PCR產(chǎn)物純化回收后連接pEASY載體由北京全式金生物技術(shù)有限公司測(cè)序,與已報(bào)道的其他物種中的同源基因序列利用進(jìn)化樹(shù)分析軟件MEGA (V5.02)進(jìn)行分析。
根據(jù)cDNA序列設(shè)計(jì)特異性引物,將每個(gè)果實(shí)單獨(dú)提?。遥危梁笤俚攘炕旌?,反轉(zhuǎn)錄成cDNA后進(jìn)行RT-PCR。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR條件:1.5 μg總RNA以FastQuant RT kit(with gDNase)(TIANGEN Biotech) (北京)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA。1 μL cDNA模板,10 μL SYBR?誖 Premix ExTaqTM (DRR041A,Tak
ara),0.2 μmol/L正反向引物,RT-PCR在Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR (Applied Biosystem, Foster City, CA, USA)儀上進(jìn)行,每個(gè)基因3次重復(fù),以基因AdActin(GI∶149938963)在70DAA處的值作為標(biāo)準(zhǔn)。
擴(kuò)增程序?yàn)椋梗?℃ 30 s;95 ℃ 5 s,55~60 ℃20 s,40 個(gè)循環(huán);72 ℃ 20 s。溶解曲線程序?yàn)椋梗?℃15 s,55~95 ℃在1 min內(nèi)以0.3 ℃遞增,再95 ℃15 s。
2結(jié)果與分析
2.1‘紅陽(yáng)獼猴桃生長(zhǎng)期間四川蒲江和湖北武漢的溫度變化
在整個(gè)獼猴桃果實(shí)發(fā)育期,四川蒲江與湖北武漢溫度測(cè)定結(jié)果(圖1)顯示,花后60~136 d,武漢日最高溫平均為33 ℃,而四川蒲江為29 ℃;溫度高于34 ℃的累積天數(shù)武漢為27 d,而蒲江只有9 d。在武漢日最高溫平均高于34 ℃的生長(zhǎng)階段有三段,第一階段為花后67~72 d,日最高溫平均34.5 ℃;第二階段為花后88~99 d,其中有5 d(95~99 d)連續(xù)溫度高于36 ℃;第三階段為花后114~118 d,日最高溫平均為35.2 ℃,而蒲江只在花后102~104 d出現(xiàn)了3 d的高溫(>35 ℃)。
2.2‘紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)發(fā)育期間花青素變化趨勢(shì)
在溫度適宜的四川蒲江,‘紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)花青素的變化(圖2)顯示,果實(shí)剛開(kāi)始形成時(shí)子房中有紅色,而后經(jīng)歷了消失—開(kāi)始累積—高峰—部分降解的變化過(guò)程?;ê螅常啊叮?d,原來(lái)子房中的花青素全部消失退凈,直到花后60 d在果實(shí)中隱約出現(xiàn)紅色絲狀花青素的累積,而后花青素積累呈增加趨勢(shì),到花后100 d果實(shí)中花青素的濃度達(dá)到最高,為56.9 μg/g(以鮮重計(jì),下同),此后,花青素的含量呈下降趨勢(shì)。而湖北武漢‘紅陽(yáng)獼猴桃果實(shí)中花青素的含量只是在剛剛坐果時(shí)比較高,發(fā)育后期花青素含量不太高且沒(méi)有明顯的積累期,這可能與其生長(zhǎng)期間的3次高溫有關(guān),最終花青素含量(5.9 μg/g)只有蒲江花青素含量(31.3 μg/g)的1/5不到, 表明花青素含量可能對(duì)溫度的變化比較敏感。
2.3RNA質(zhì)量及濃度檢測(cè)
以1%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)所提取的RNA進(jìn)行完整性檢測(cè)(圖3),發(fā)現(xiàn)提取的總RNA均呈現(xiàn)兩條清晰、無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象的條帶,說(shuō)明獲得的總RNA樣品完整性較好。
其中RNA濃度都比較高,且其吸光度要求達(dá)到:1.8≤A260nm/A280nm≤2.2,A260nm/A230nm≥1.8(表1)。高質(zhì)量的RNA為下一步cDNA反轉(zhuǎn)錄、基因克隆及實(shí)時(shí)熒光定量PCR提供了保證。
2.4基因克隆及測(cè)序結(jié)果
AdANS基因的cDNA序列全長(zhǎng)為1 220 bp(圖4), 其開(kāi)放閱讀框?yàn)椋?068 bp (142~1 209 bp),5′端非編碼區(qū)為141 bp,編碼一個(gè)由355個(gè)氨基酸組成的多肽(圖5),利用MEGA軟件,將‘紅陽(yáng)AdANS編碼的氨基酸序列與已發(fā)表的模式植物擬南芥、葡萄等的氨基酸全長(zhǎng)序列進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)與紅山茶(Camellia chekiangoleosa)和葡萄(Vitis vinifera)中的ANS進(jìn)化關(guān)系最近,氨基酸序列相似性最高(圖6)。
2.5AdANS在‘紅陽(yáng)果實(shí)發(fā)育期間的表達(dá)模式
以AdANS的5′端設(shè)計(jì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR,序列特異性引物如下:
Forward primer(5′→3′):AAATGGTGGCAACA
GTGGTCGGAA
Reverse Primer(5′→3′):GGGCCATTCTCCTTC
TTCTCTTCCT
獼猴桃AdActin(GI:149938963)基因序列特異性引物如下:
Forward primer(5′→3′):TGAGAGATTCCGTT
GCCCAGAAGT
Reverse primer(5′→3′):TTCCTTACTCATGCGGTCTGCGAT)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明(圖7),AdANS基因擴(kuò)增曲線的Ct值為22~26,而溶解曲線呈現(xiàn)單峰,表明擴(kuò)增的特異性好。從圖8可以看出,在蒲江70~100 d,AdANS的表達(dá)量增加了9倍左右,而后表達(dá)量逐漸降低,但是花青素的凈積累仍在增加,花后110 d花青素的凈積累停止?;ㄇ嗨氐膬舴e累停止后可能又有降解發(fā)生,可能和溫度及果實(shí)發(fā)育均有關(guān)。AdANS隨后也保持較低的水平。而在武漢,總體來(lái)說(shuō)與花青素積累量變化較小,與其相一致的是AdANS的表達(dá)水平變化也非常?。ㄐ∮冢保当叮??;ê?10 d時(shí),AdANS的表達(dá)是花后100 d時(shí)的1.4倍,而后迅速下降,花后90~110 d,AdANS的表達(dá)趨勢(shì)與花青素積累增加變化趨勢(shì)相一致。而110~136 d,花青素的積累量呈先減少再小幅增加的趨勢(shì),而AdANS的表達(dá)也與花青素的積累變化相一致,先減小后增加。結(jié)果表明,無(wú)論在何種溫度狀態(tài)下,花青素合成基因AdANS的表達(dá)變化都與花青素的積累變化相一致。
3小結(jié)與討論
試驗(yàn)結(jié)果表明,‘紅陽(yáng)獼猴桃果肉中花青素的含量在不同的季節(jié)性溫度下呈現(xiàn)出明顯的不同,尤其在季節(jié)性高溫條件下,花青素的含量非常低,表明可能花青素的合成受到溫度的強(qiáng)烈調(diào)控,尤其當(dāng)蒲江在花后102~104 d出現(xiàn)了3 d的高溫(>35 ℃)后,花青素的積累也從花后100 d的最高含量56.9 μg/g開(kāi)始下降?;ㄇ嗨氐暮铣捎绕涫腔ㄇ嗨睾铣芍械年P(guān)鍵酶花青素合成酶受花青素合成途徑中結(jié)構(gòu)基因的直接調(diào)控[8],研究結(jié)果也表明,在溫度適宜的蒲江,花青素合成基因AdANS的表達(dá)趨勢(shì)與果肉中花青素的積累規(guī)律相一致,即在花青素積累速度最快的花后90~100 d,AdANS表達(dá)水平的變化也最大。而在整個(gè)發(fā)育期間溫度都較高的武漢,雖然AdANS的轉(zhuǎn)錄水平變化比較小,但是其表達(dá)水平的變化與花青素的積累變化規(guī)律相一致。研究結(jié)果也表明AdANS較低的表達(dá)水平可能與武漢的高溫密切相關(guān),進(jìn)而導(dǎo)致花青素的合成下降,果實(shí)花青素的含量降低。
花青素含量是果實(shí)品質(zhì)的一個(gè)重要方面,因此也是許多遺傳育種工作的重點(diǎn)。果肉中花青素的形成是由遺傳、發(fā)育和環(huán)境共同調(diào)控的復(fù)雜的代謝過(guò)程[9]。在許多果實(shí)中,當(dāng)果實(shí)成熟時(shí)類(lèi)黃酮途徑中原本產(chǎn)生原花青素和黃酮醇的途徑會(huì)轉(zhuǎn)為花青素的合成。但是‘紅陽(yáng)獼猴桃不是在果實(shí)成熟時(shí)才合成花青素,而是在果實(shí)發(fā)育中期就開(kāi)始合成,一直保持到果實(shí)成熟,可能與果皮中花青素合成的機(jī)制不同。另外草莓中花青素的研究表明類(lèi)黃酮的水平、相關(guān)基因的表達(dá)及酶的活性明顯受到果實(shí)發(fā)育的影響[10]。‘紅陽(yáng)獼猴桃中花青素的水平除受到類(lèi)黃酮相關(guān)基因的調(diào)控外,環(huán)境因子也會(huì)通過(guò)調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄及相關(guān)酶的活性間接影響花青素的合成。
參考文獻(xiàn):
[1] CABALLERO B,TRUGO L,FINGLAS P.Encyclopedia of food sciences and nutrition[M]. 2nd ed. London: Academic press, 2003.
[2] 黃宏文.獼猴桃屬 分類(lèi) 資源 馴化 栽培[M].北京:科學(xué)出版社,2013.
[3] LIN-WANG K,MICHELETTI D,PALMER J,et al.High temperature reduces apple furit colour via modulation of the anthocyanin regulatory complex[J]. Plant, Cell & Environment, 2011,34(7):1176-1190.
[4] YAMANE T, JEONG S T, GOTO-YAMAMOTO N, et al. Effects of temperature on anthocyanin biosynthesis in grape berry skins[J]. American Journal of Enology And Viticulture,2006, 57: 54-59.
[5] WEI Y Z, HU F C, HU G B, et al. Differential expression of anthocyanin biosynthetic genes in relation to anthocyanin accumulation in the pericarp of Litchi chinensis Sonn[J]. PLoS One,2011,6,e19455.
[6] MONTEFIORI M, MCGHIE T K, COSTA G, et al. Pigments in the fruit of red-fleshed kiwifruit (Actinidia chinensis and Actinidia deliciosa)[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2005,53:9526-9530.
[7] 阮孟斌,李文彬,于曉玲,等.一種適用于多糖多酚植物的高質(zhì)量RNA快速提取方法[J].熱帶作物學(xué)報(bào),2011,32(9):1704-1707.
[8] MARTENS S,PREUSS A,MATERN U.Multifunctional flavonoid dioxygenases: flavonol and anthocyanin biosynthesis in Arabidopsis thaliana L.[J].Phytochemistry,2010,71:1040-1049.
[9] JAAKOLA L. New insights into the regulation of anthocyanin biosynthesis in fruits[J].Trends in Plant Science,2013,18(9):477-483.
[10] CARBONE F, PREUSS A, D E VOS R C, et al. Developmental, genetic and environmental factors affect the expression of flavonoid genes, enzymes and metabolites in strawberry fruits[J]. Plant Cell & Environment,2009,32:1117-1131.
花青素含量是果實(shí)品質(zhì)的一個(gè)重要方面,因此也是許多遺傳育種工作的重點(diǎn)。果肉中花青素的形成是由遺傳、發(fā)育和環(huán)境共同調(diào)控的復(fù)雜的代謝過(guò)程[9]。在許多果實(shí)中,當(dāng)果實(shí)成熟時(shí)類(lèi)黃酮途徑中原本產(chǎn)生原花青素和黃酮醇的途徑會(huì)轉(zhuǎn)為花青素的合成。但是‘紅陽(yáng)獼猴桃不是在果實(shí)成熟時(shí)才合成花青素,而是在果實(shí)發(fā)育中期就開(kāi)始合成,一直保持到果實(shí)成熟,可能與果皮中花青素合成的機(jī)制不同。另外草莓中花青素的研究表明類(lèi)黃酮的水平、相關(guān)基因的表達(dá)及酶的活性明顯受到果實(shí)發(fā)育的影響[10]。‘紅陽(yáng)獼猴桃中花青素的水平除受到類(lèi)黃酮相關(guān)基因的調(diào)控外,環(huán)境因子也會(huì)通過(guò)調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄及相關(guān)酶的活性間接影響花青素的合成。
參考文獻(xiàn):
[1] CABALLERO B,TRUGO L,FINGLAS P.Encyclopedia of food sciences and nutrition[M]. 2nd ed. London: Academic press, 2003.
[2] 黃宏文.獼猴桃屬 分類(lèi) 資源 馴化 栽培[M].北京:科學(xué)出版社,2013.
[3] LIN-WANG K,MICHELETTI D,PALMER J,et al.High temperature reduces apple furit colour via modulation of the anthocyanin regulatory complex[J]. Plant, Cell & Environment, 2011,34(7):1176-1190.
[4] YAMANE T, JEONG S T, GOTO-YAMAMOTO N, et al. Effects of temperature on anthocyanin biosynthesis in grape berry skins[J]. American Journal of Enology And Viticulture,2006, 57: 54-59.
[5] WEI Y Z, HU F C, HU G B, et al. Differential expression of anthocyanin biosynthetic genes in relation to anthocyanin accumulation in the pericarp of Litchi chinensis Sonn[J]. PLoS One,2011,6,e19455.
[6] MONTEFIORI M, MCGHIE T K, COSTA G, et al. Pigments in the fruit of red-fleshed kiwifruit (Actinidia chinensis and Actinidia deliciosa)[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2005,53:9526-9530.
[7] 阮孟斌,李文彬,于曉玲,等.一種適用于多糖多酚植物的高質(zhì)量RNA快速提取方法[J].熱帶作物學(xué)報(bào),2011,32(9):1704-1707.
[8] MARTENS S,PREUSS A,MATERN U.Multifunctional flavonoid dioxygenases: flavonol and anthocyanin biosynthesis in Arabidopsis thaliana L.[J].Phytochemistry,2010,71:1040-1049.
[9] JAAKOLA L. New insights into the regulation of anthocyanin biosynthesis in fruits[J].Trends in Plant Science,2013,18(9):477-483.
[10] CARBONE F, PREUSS A, D E VOS R C, et al. Developmental, genetic and environmental factors affect the expression of flavonoid genes, enzymes and metabolites in strawberry fruits[J]. Plant Cell & Environment,2009,32:1117-1131.
花青素含量是果實(shí)品質(zhì)的一個(gè)重要方面,因此也是許多遺傳育種工作的重點(diǎn)。果肉中花青素的形成是由遺傳、發(fā)育和環(huán)境共同調(diào)控的復(fù)雜的代謝過(guò)程[9]。在許多果實(shí)中,當(dāng)果實(shí)成熟時(shí)類(lèi)黃酮途徑中原本產(chǎn)生原花青素和黃酮醇的途徑會(huì)轉(zhuǎn)為花青素的合成。但是‘紅陽(yáng)獼猴桃不是在果實(shí)成熟時(shí)才合成花青素,而是在果實(shí)發(fā)育中期就開(kāi)始合成,一直保持到果實(shí)成熟,可能與果皮中花青素合成的機(jī)制不同。另外草莓中花青素的研究表明類(lèi)黃酮的水平、相關(guān)基因的表達(dá)及酶的活性明顯受到果實(shí)發(fā)育的影響[10]。‘紅陽(yáng)獼猴桃中花青素的水平除受到類(lèi)黃酮相關(guān)基因的調(diào)控外,環(huán)境因子也會(huì)通過(guò)調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄及相關(guān)酶的活性間接影響花青素的合成。
參考文獻(xiàn):
[1] CABALLERO B,TRUGO L,FINGLAS P.Encyclopedia of food sciences and nutrition[M]. 2nd ed. London: Academic press, 2003.
[2] 黃宏文.獼猴桃屬 分類(lèi) 資源 馴化 栽培[M].北京:科學(xué)出版社,2013.
[3] LIN-WANG K,MICHELETTI D,PALMER J,et al.High temperature reduces apple furit colour via modulation of the anthocyanin regulatory complex[J]. Plant, Cell & Environment, 2011,34(7):1176-1190.
[4] YAMANE T, JEONG S T, GOTO-YAMAMOTO N, et al. Effects of temperature on anthocyanin biosynthesis in grape berry skins[J]. American Journal of Enology And Viticulture,2006, 57: 54-59.
[5] WEI Y Z, HU F C, HU G B, et al. Differential expression of anthocyanin biosynthetic genes in relation to anthocyanin accumulation in the pericarp of Litchi chinensis Sonn[J]. PLoS One,2011,6,e19455.
[6] MONTEFIORI M, MCGHIE T K, COSTA G, et al. Pigments in the fruit of red-fleshed kiwifruit (Actinidia chinensis and Actinidia deliciosa)[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2005,53:9526-9530.
[7] 阮孟斌,李文彬,于曉玲,等.一種適用于多糖多酚植物的高質(zhì)量RNA快速提取方法[J].熱帶作物學(xué)報(bào),2011,32(9):1704-1707.
[8] MARTENS S,PREUSS A,MATERN U.Multifunctional flavonoid dioxygenases: flavonol and anthocyanin biosynthesis in Arabidopsis thaliana L.[J].Phytochemistry,2010,71:1040-1049.
[9] JAAKOLA L. New insights into the regulation of anthocyanin biosynthesis in fruits[J].Trends in Plant Science,2013,18(9):477-483.
[10] CARBONE F, PREUSS A, D E VOS R C, et al. Developmental, genetic and environmental factors affect the expression of flavonoid genes, enzymes and metabolites in strawberry fruits[J]. Plant Cell & Environment,2009,32:1117-1131.