氟苯尼考注射液在大鼠體內代謝及生物利用度研究

董宏偉,李忠杰,呂淑榮,劉萬卉

(1.煙臺大學藥學院,山東 煙臺 264005;2.煙臺綠葉動物保健品有限公司,山東 煙臺 264003)

氟苯尼考(florfenicol,簡稱F)是一種新型的廣譜抗生素．作用機理和抗菌譜與甲砜霉素、氯霉素相似,但抗菌活性要優(yōu),且無再生障礙性貧血等不良作用,不易被耐氯霉素和甲砜霉素耐藥菌株產(chǎn)生的乙酰轉移酶破壞,現(xiàn)已成為獸用抗菌藥物之一[1-4].氟苯尼考胺(florfenicol amine,簡稱FFa)是F的主要代謝產(chǎn)物,我國[5]和歐盟[6]對動物源性食品中的F殘留限MRLs值作了規(guī)定,并以F與FFa作為檢出物．F在畜禽體內藥代動力學的研究已有不少[7-10],但對其在大鼠體內吸收代謝產(chǎn)物鮮有報道.本試驗研究了氟苯尼考注射液在大鼠體內的藥動學行為,為臨床制定給藥方案提供依據(jù)．

1 材料與方法

1.1 實驗動物

清潔級SD大鼠18 只,雌雄各半(平均體重200±20 g)隨機分為A、B、C 3 組,預飼1周后試驗,給藥前禁飼12 h,給藥后禁飼4 h,自由飲水．

1.2 藥品和試劑

試驗品:氟苯尼考注射液(F含量30%),批號為120725,由煙臺綠葉動物保健品有限公司提供．

對照品:紐弗羅注射液(F含量30%,)批號為RKPB1586,美國先靈葆雅制藥有限公司．

標準品:氟苯尼考(含量99.9%),批號為CDCT-C13665000,德國Dr．鹽酸氟苯尼考胺(TRC,含量99.9%),批號為CDDM-F405770,多倫多研究院．氯霉素(含量99.6%),中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供．

其他:冰醋酸為分析純,乙腈為色譜純．

1.3 主要儀器

Agilent1200 高效液相色譜儀,VWD 檢測器,自動進樣器,XW-80 A渦旋混合器,HSC-24 A氮吹儀,pH計,十萬分之一電子天平,微量移液器,Thermo微量高速離心機等．

1.4 試驗方法

1.4.1 給藥和血樣采集 試驗A組尾靜脈注射氟苯尼考注射液,B、C兩組分別腿部肌肉注射氟苯尼考注射液和紐弗羅注射液,給藥劑量均為30 mg/kg,A組于給藥前及給藥后0.083、0.25、0.5、1.5、2、4、6、8、12、24 h眼眶靜脈叢采血0.4 mL;B組、C組于給藥前及給藥后0.25、0.5、1.5、2、4、6、8、12、24 h眼眶靜脈叢采血0.4 mL,置含肝素鈉抗凝劑的離心管中,混勻,3 600 r/min離心 10 min,吸取上層血漿,置-20 ℃保存．

1.4.2 血漿樣品的處理 取血漿200 μL置10 mL玻璃離心管中,加入300 μg/mL的氯霉素10 μL作為內標物,再加入pH 7.0的磷酸鹽緩沖液 1 mL渦旋1 min,加入3 mL乙酸乙酯,渦旋混合3 min,離心分離上層有機相于另一離心管內,重復提取一次,合并乙酸乙酯層提取液, 45 ℃下氮氣吹干．用100 μL流動相復溶殘渣,以13 000 r/min離心10 min,取上清液進樣．

1.4.3 色譜條件 色譜柱:Phenomenex luna-C18(5μm,4.6×250 mm);流動相為乙腈-水-冰醋酸(100:197:3,V/V/V),VWD檢測器,檢測波長223 nm,流速1.0 mL/min,柱溫35 ℃[6]．

1.4.4 方法學研究 取空白血漿200 μL置10 mL離心管中,以標準品氟苯尼考與氟苯尼考胺配制濃度均為0.05～16.0 μg/mL的含藥血漿,按1.4.2項下操作,以F與內標峰面積比對F濃度做權重系數(shù)為1/c2的加權回歸,得F、FFa的標準曲線分別為:y=0.176 1x+0.055 4,r=0.991 2;y=0.163 1x+0.051 3,r=0.993 5,結果表明F及FFa在0.05～16 μg/mL范圍內線性關系良好,定量下限均為0.05 μg/mL,最低檢測限按信噪比S/N=3計算均為0.025 μg/mL．

另取空白血漿200 μL置10 mL離心管中,配制濃度為 0.125、1、8 μg/mL 的含藥血漿,按1.4.2項下操作,考察得血漿中F與FFa的日內和日間精密度分別在1.29%～3.12%和3.89%～5.01%范圍內;回收率分別為(103.1±5.27)%～(96.15±3.40)%及(105.2±3.76)%～(94.31±2.67)%,符合生物樣品分析要求．

2 數(shù)據(jù)處理

用DAS2.1.1軟件計算A、B、C 3組大鼠血漿中F及FFa的藥物動力學參數(shù),結果見表1、表2,藥時曲線見圖1．

表1 A 組大鼠F的藥動參數(shù)

注:t1/2α藥物分布半衰期;t1/2β藥物消除半衰期;AUC藥時曲線下總面積;tmax最高血藥濃度時間;CLz/F清除率;Cmax最高血藥濃度．

表2 B、C兩組大鼠F及FFa的藥動參數(shù)

注:Ka吸收速率常數(shù);t1/2Ka藥物吸收半衰期;其余參數(shù)同表1．

圖1 各實驗組大鼠的血藥濃度-時間曲線

3 討 論

3.1 靜注給藥的藥動學特征

健康大鼠靜注氟苯尼考注射液(30 mg/kg)后,F的藥動學行為符合二室開放模型,與F在牛體內的藥代動力學研究相符[11-12].大鼠靜注后,深室分布較快,分布半衰期為t1/2α為0.84 h, AUC為 51.75 mg/L·h,Cmax為36.51 μg/mL．

據(jù)相關報道,F在牛[11-12]、奶山羊[13]、豬[9,14]體內消除半衰期分別為2.3～4.1 h、2.3 h和6.72 h,本試驗中F在大鼠體內的消除緩慢,t1/2β為12.85 h;F在牛[11-12]、奶山羊[13]、馬[15]和豬[9,14]體內的全身清除率分別為0.15～0.26、0.47、0.40和0.23 L/(h·kg),與試驗確定的F在大鼠體內的CLz/F為0.58 L/(h·kg)相近．AfifiNA等認為,F在動物體內清除率低,消除緩慢是由于F化學結構中-OH被-F取代,阻遏葡萄糖醛酸的結合,從而延緩了動物體內F的排泄所致[16]．

3.2 肌注給藥的藥動學特征

大鼠肌注氟苯尼考注射液及對照品紐弗羅注射液(30 mg/kg,按氟苯尼考載藥量計算)后,藥動學行為均符合一室模型,與文獻報道其在牛[11-12]、馬[15]、雞[16]的研究結果一致．吸收較快且完全,吸收半衰期分別為0.72、0.58 h,在1 h均達到最大吸收,分別為6.70、6.57 μg/mL;在大鼠體內消除緩慢,消除半衰期分別為12.63、11.37 h;肌注氟苯尼考注射液與對照品紐弗羅注射液后藥動學參數(shù)無顯著差異,F的相對生物利用度為99.32%,絕對生物利用度為87.38%,比牛[11-12](78.5%)、鴨[17](73.03%)、馬[15](81%)和山羊[18](65.72%)高,比雞[16](96.6%)和豬[9,14](96.86%)低．

3.3 肌注后代謝產(chǎn)物的藥動學特征

F的代謝物主要是FFa[19],目前沒有報道顯示其有抗菌活性,但是F用于可食性動物源時,FFa是殘留檢測的重要指標之一[5-6].B組大鼠肌注氟苯尼考注射液后代謝產(chǎn)物FFa在給藥后0.5 h濃度即達到0.1 μg/mL以上,8 h達到最高峰,與C組大鼠肌注對照品紐弗羅注射液后代謝物FFa藥動學參數(shù)無顯著差異．

4 結 論

本試驗研究了靜注及肌注氟苯尼考注射液與對照品紐弗羅注射液后F在大鼠體內的藥代動力學特征,結果表明F吸收迅速,消除緩慢(12 h仍能維持0.5 μg/mL),據(jù)報道F對其敏感菌的MIC均為0.5 μg/mL左右[20],本品(氟苯尼考注射液)能在較長時間內維持藥效濃度．

肌注氟苯尼考注射液后代謝物FFa在大鼠體內消除緩慢,分布均勻,氟苯尼考注射液的相對生物利用度為99.32%,絕對生物利用度為87.38%,試驗品氟苯尼考注射液與對照品紐弗羅注射液在大鼠體內的藥動學參數(shù)無顯著差異,為氟苯尼考注射液進一步臨床試驗提供了參考依據(jù)．

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