不同廠家川芎配方顆粒中阿魏酸含量比較*

周瀅，楊軍宣

(重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶 400016)

川芎為傘形科植物川芎(Ligusticum chuanxiongHort.)的干燥根莖，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，主要用于胸痹心痛、胸脅刺痛、跌撲腫痛、月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、癥瘕腹痛、頭痛、風(fēng)濕痹痛等［1-2］。目前，國(guó)內(nèi)已有6家企業(yè)生產(chǎn)川芎配方顆粒，但筆者未見(jiàn)對(duì)不同廠家生產(chǎn)的川芎配方顆粒進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)的研究，為評(píng)價(jià)不同廠家川芎配方顆粒的質(zhì)量，筆者在本實(shí)驗(yàn)中以阿魏酸的含量為指標(biāo)，參考文獻(xiàn)［3-4］，采用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)對(duì)6個(gè)廠家川芎配方顆粒進(jìn)行了比較研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫 1200B型高效液相色譜儀(G1312B型二元泵，G1315C型 DAD檢測(cè)器，ChemStation化學(xué)工作站);電子天平:BP211D(Sautoris，德國(guó))d=0.1/0.01 mg，max=210/80 g;超聲波清洗器:KQ5200DB型，昆山市儀器有限公司。

1.2 試藥 阿魏酸對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，含量:99.8%，批號(hào):110773-200611)，6 批川芎配方顆粒分別為:A，批號(hào):A091181-01;B，批號(hào):0906160;C，批號(hào):0912002;D，批號(hào):0902021;E，批號(hào):0908008;F，批號(hào):090401。甲醇(迪馬公司，色譜純)，水為雙蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 稱取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每毫升含0.035 mg溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率100 W，頻率40 kHz)30min，靜置，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備 取本品缺川芎藥材的配方顆粒1.0 g，照供試品的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.1.4 色譜條件 色譜柱:C18柱(250mm×4.6mm，5 μm，Phenomenex公司);流動(dòng)相:甲醇-1%醋酸溶液(30∶70);檢測(cè)波長(zhǎng):321 nm;流速:1.0mL·min－1，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000［5］。在此條件下，川芎配方顆粒中阿魏酸的分離度好，理論板數(shù)較高，峰形對(duì)稱性好。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.1.5 方法學(xué)考察

圖1 川芎配方顆粒HPLC圖

2.1.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液(0.035 mg·mL－1)1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以阿魏酸的峰面積值(Y)為縱坐標(biāo)，以阿魏酸的進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程為Y=2 744.5X－0.652 7，R2=0.999 9，結(jié)果表明，阿魏酸進(jìn)樣量在0.035～0.70 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量與峰面積值呈良好的線性關(guān)系。

2.1.5.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(0.035 mg·mL－1)10 μL，連續(xù)進(jìn)樣 6 次，測(cè)定峰面積。計(jì)算得RSD為0.85%(n=6)，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.1.5.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 稱取同一批樣品(批號(hào):0912002)，精密稱定，按上述測(cè)定方法制備樣品供試品溶液，共6份，測(cè)定峰面積，RSD 為0.89%(n=6)，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.5.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液(0.035 mg·mL－1)和供試品溶液各 10 μL，室溫下放置，分別于0，2，4，6，8，10 h 進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定阿魏酸的峰面積，計(jì)算得對(duì)照品RSD為1.17%(n=6)，供試品RSD為1.08%(n=6)，表明對(duì)照品溶液和供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.5.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的樣品(批號(hào):0912002，含量為 1.36 mg·g－1)0.25 g，精密稱定，共 6份，精密稱定，分別精密加入阿魏酸對(duì)照品溶液(0.035 mg·mL－1)10mL，按供試品溶液制備方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算回收率，平均加樣回收率為99.47%，RSD為1.23%(n=6)，樣品回收率良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 樣品含量測(cè)定結(jié)果 分別取不同批號(hào)的川芎配方顆粒約0.5 g，精密稱定，按上述方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，按上述色譜條件測(cè)定阿魏酸峰面積，計(jì)算阿魏酸含量，所測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 超聲提取時(shí)間的確定 在供試品溶液的制備中，本研究對(duì)樣品的提取方法進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)超聲提取與加熱回流的阿魏酸提取率相等，因超聲提取方法相對(duì)簡(jiǎn)便且易于操作，為此采用60℃時(shí)超聲處理作為提取方法。同時(shí)考察了超聲時(shí)間對(duì)提取率的影響，發(fā)現(xiàn)隨著超聲時(shí)間由10，20min至30min時(shí)，阿魏酸的提取率不斷增加，而超聲提取40，60min，阿魏酸的含量不再增加，因此確定超聲提取時(shí)間為30min。

表1 阿魏酸加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果 mg

表2 不同廠家川芎配方顆粒中阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果

3.2 川芎配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需要盡早制定 由于不同廠家的每克配方顆粒劑相當(dāng)于原藥材飲片的當(dāng)量并不相同，因此在對(duì)不同廠家川芎配方顆粒中阿魏酸含量進(jìn)行比較時(shí)，按每克原藥材飲片所提取的阿魏酸含量進(jìn)行換算，結(jié)果表明，6個(gè)廠家樣品的阿魏酸含量差異顯著，含量最低與最高廠家的差異可達(dá)8倍多(見(jiàn)表2)。這可能與兩個(gè)主要因素有關(guān)，一是與不同廠家投料的川芎飲片質(zhì)量差異有關(guān)，因?yàn)榘⑽核岷恳部赡苁艽ㄜ寒a(chǎn)地、采收季節(jié)、儲(chǔ)存時(shí)間等因素影響;二是與廠家采用的生產(chǎn)工藝不同有關(guān)，這也可能是造成阿魏酸含量差異顯著的重要原因。因此，生產(chǎn)廠家還應(yīng)采用合理的生產(chǎn)工藝，相關(guān)管理部門也應(yīng)制定統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行控制，以減少?gòu)S家之間川芎質(zhì)量的差異，提高臨床用藥的均一性。

3.3 阿魏酸轉(zhuǎn)移率低，有待考察醇提工藝 2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定川芎飲片含阿魏酸不得低于 0.10% ，相當(dāng)于不得少于 1 mg·g-1［5］，若按 1 g川芎飲片含1 mg阿魏酸計(jì)算，6個(gè)廠家中含量最高的廠家D，其配方顆粒中阿魏酸的轉(zhuǎn)移率也僅有57.7%，傳統(tǒng)中藥多為煎劑，因此目前廠家多采用水提取、濃縮的工藝制備配方顆粒。但在傳統(tǒng)中醫(yī)實(shí)踐中，也有相當(dāng)一部分中藥在臨床中采用酒浸或黃酒煎煮使用。因此，若阿魏酸采用醇提方法制備配方顆?；蛘叽ㄜ猴嬈谳^低溫下煎煮提取，可能會(huì)大大提高有效成分的溶出和減少阿魏酸的損失，可能對(duì)減少原料藥的投入、節(jié)省中藥資源和降低成本有積極的意義。下一步可考慮在藥效、毒理、臨床療效研究的支持下，對(duì)川芎醇提工藝的可行性進(jìn)行探討。

［1］張紅梅，宋景政，譚紅勝，等.從湯劑到顆粒劑:中藥配方顆粒20年回顧與展望［J］.世界科學(xué)技術(shù)——中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2012，14(4):1741－1743.

［2］高學(xué)敏.中藥學(xué)［M］.北京:中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007:312.

［3］張昕瑩，郭淑云，張文娟，等.不同提取方法對(duì)川芎和香附有效成分溶出度的比較［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32(3):350－353.

［4］宋金春，楊鶴，胡傳芹，等.反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定血清中阿魏酸和川芎嗪濃度［J］.醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，23(1):45－46.

［5］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:38.