豬繁殖與呼吸綜合征的臨床診斷措施

郁星星　邢濤　李小華

摘要：介紹了豬繁殖與呼吸綜合征的病毒生物學(xué)特性、流行病學(xué)、癥狀與病理變化，并對其診斷方法進(jìn)行了總結(jié)。

關(guān)鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；臨床癥狀；病理變化；診斷

中圖分類號：S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：1007-273X（2014）03-0028-02

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的豬的繁殖障礙和呼吸系統(tǒng)的傳染病。該病可以感染任何年齡的豬，以母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀為特征，造成懷孕母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和仔豬高死亡率。豬繁殖與呼吸綜合征已成為全球性豬病，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，它也成為世界獸醫(yī)學(xué)界異常關(guān)注的疾病之一。

1生物學(xué)特性

豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）屬動脈炎病毒科，動脈炎病毒屬，有囊膜的單股RNA病毒，具有高度的變異性，根據(jù)其差異可將PRRSV分為兩種基因型：即歐洲型（代表株Lelystadvirus）和美洲型（代表株VR 2332）[1]。PRRSV對有機溶劑敏感，對pH要求高，在pH6.5～7.5間相對穩(wěn)定，pH高于7.5或低于5時，感染力很快消失，這顯示了很強的pH依賴性。從自然發(fā)病豬中分離到的PRRSV不具有血凝活性，不能凝集雞、鵝、豚鼠、牛、馬、豬、綿羊和人的紅細(xì)胞。

2流行病學(xué)

20世紀(jì)80年代末，美國暴發(fā)了一種從未見過的毀滅性疾病，隨后歐洲和亞洲于90年代初也相繼暴發(fā)。1991年，歐洲研究人員指出導(dǎo)致這種疾病暴發(fā)的病原是一種從未見過的動脈炎病毒，并采用豬繁殖與呼吸綜合征的名稱命名該病[2]。

我國于1996年首次報道該病并分離到PRRSV[3]，隨后該病在我國呈蔓延趨勢。目前PRRS已遍及全球主要養(yǎng)豬國家和地區(qū)，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。

3癥狀與病理變化

3.1經(jīng)典的PRRSV感染

PRRS的臨床癥狀表現(xiàn)多樣，并受很多因素影響。PRRSV主要引起妊娠母豬的流產(chǎn)和仔豬的呼吸道癥狀，臨床上伴有高熱、部分豬耳部及四肢末端發(fā)紺等癥狀，剖檢病變主要為間質(zhì)性肺炎，多數(shù)仔豬肺尖葉、心葉呈暗紅色或黃、紅病灶相間，全身淋巴結(jié)有不同程度的淤血、出血、腫脹。但是僅憑臨床癥狀很難做出準(zhǔn)確診斷，為此荷蘭制定的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)為死產(chǎn)率達(dá)到20%，母豬流產(chǎn)率達(dá)到8%，斷奶仔豬死亡率達(dá)到26%。

3.2高致病性PRRSV感染

與經(jīng)典豬藍(lán)耳病相比，高致病性豬藍(lán)耳病的主要特征是發(fā)病豬出現(xiàn)41 ℃以上持續(xù)高熱、發(fā)病豬不分年齡段均出現(xiàn)急性死亡、仔豬出現(xiàn)高發(fā)病率和高死亡率，發(fā)病率可達(dá)100%，死亡可達(dá)50%，母豬流產(chǎn)率可達(dá)30%。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、厭食或不食；耳部、口鼻部、后軀及股內(nèi)側(cè)皮膚發(fā)紅、淤血、出血斑、丘疹；眼結(jié)膜炎；咳嗽、哮喘等呼吸道癥狀；后軀無力、不能站立或搖擺、轉(zhuǎn)圈運動、抽搐等神經(jīng)癥狀；部分發(fā)病豬呈頑固性腹瀉。

剖檢變化為肺出血、淤血以及以心葉、尖葉為主的灶性暗紅色實變；扁桃體出血、化膿；腦出血、淤血、軟化灶及膠凍樣物質(zhì)滲出；心衰、心肌出血、壞死；脾、淋巴結(jié)新鮮或陳舊性出血、梗死；腎表面和切面部分可見出血點、出血斑等；部分豬肝可見黃白色壞死灶或出血灶；腎表面凹凸不平；腸出血等[4]。

4診斷

4.1病毒的分離

病毒分離被認(rèn)為是最為確切的方法，但費時費力。需采用病毒適應(yīng)性好的細(xì)胞，主要有豬肺巨噬細(xì)胞（PAMs）、MA104細(xì)胞系的克隆株Marc 145及HS2H細(xì)胞、CL2621細(xì)胞等。MA104細(xì)胞系的克隆株Marc 145及HS2H細(xì)胞、CL2621細(xì)胞等是傳代細(xì)胞系，培養(yǎng)和傳代過程相對簡單。以Marc 145為例，在接毒后72 h，細(xì)胞折光性增強，少數(shù)細(xì)胞集聚成叢，細(xì)胞先膨脹后圓縮，集聚增多，最后崩解脫落。傳代細(xì)胞的病變相對明顯，但敏感性上不如豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAMs），但因其操作和制備簡單、經(jīng)濟而被廣泛應(yīng)用[5]。

4.2免疫學(xué)方法

PRRSV特異性抗體的診斷方法主要有間接免疫熒光（IFA）、免疫過氧化物酶單層細(xì)胞試驗（IPMA）、血清中和試驗（SN）和酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。其中IFA、SN和ELISA在美洲診斷實驗室應(yīng)用較多，而歐洲主要用IPMA檢測PRRSV抗體。血清學(xué)試驗的結(jié)果受到檢測用分離病毒與感染豬病毒相關(guān)性的影響。

4.2.1間接免疫熒光抗體技術(shù)（IFA） IFA是由美國農(nóng)業(yè)部國家獸醫(yī)實驗室研究建立的一種檢測PRRSV抗體的方法，感染后8 d就能檢測出抗體，目前廣泛應(yīng)用于北美。但是本法需做細(xì)胞培養(yǎng)和熒光顯微鏡觀察，因此對儀器設(shè)備要求比較高，并且主觀性較強，所以在一些實驗室應(yīng)用受到一定的局限。

4.2.2免疫過氧化物酶單層細(xì)胞實驗（IMPA） 這是荷蘭中央獸醫(yī)研究院最早建立的一種檢測PRRSV抗體的方法，目前仍然廣泛應(yīng)用于歐洲。但是此種方法需要特殊的實驗條件，在操作和判斷過程中存在較多的人為因素干擾，需要較強的實踐經(jīng)驗，容易出現(xiàn)假陽性等現(xiàn)象，因此我國尚未廣泛采用此方法。

4.2.3血清中和實驗（SN） 該方法主要用于檢測PRRSV抗體。使用Marc 145細(xì)胞，在96孔微量板上進(jìn)行傳統(tǒng)的SN試驗不能檢測急性感染期的抗體，需用雙份血清。Jusa和akikawa等在血清和病毒混合液中加補體，提高了反應(yīng)的敏感性，可在PRRSV感染早期作出診斷。這種改良的方法最早在接種后8 d即能檢出PRRSV抗體。該方法在微量細(xì)胞培養(yǎng)上存在較大困難，并且技術(shù)性較強，不適宜大規(guī)模推廣應(yīng)用。

4.2.4酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA） 該方法主要用于檢測PRRSV抗體。ELISA具有很好的特異性和敏感性，對于早期抗體的檢測比用IPMA更為敏感。ELISA檢測方法有多種：間接ELISA、捕捉ELISA、阻斷ELISA、夾心ELISA等。美國某公司的商品化ELISA試劑盒檢測的特異性能達(dá)到98%～99%，現(xiàn)在又推出檢測性能更好的第2代產(chǎn)品。商品化的試劑盒具有高度的一致性，自動化程度高等特點，現(xiàn)已成為國際上血清學(xué)檢測的主要標(biāo)準(zhǔn)，許多新建血清學(xué)檢測方法都以此為標(biāo)準(zhǔn)檢測符合率。有的可以同時檢測出美洲型和歐洲型，而且快速簡便。

4.3分子生物學(xué)方法

4.3.1反轉(zhuǎn)錄 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT PCR） 該方法特異性強，能夠鑒別診斷其他易混淆的病毒性傳染病，如細(xì)小病毒病、偽狂犬病、豬瘟、傳染性胃腸炎和豬流感等。該方法的敏感性和特異性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過IFA，是目前普遍使用的實驗室檢測方法。

目前應(yīng)用RT PCR技術(shù)診斷PRRSV已取得了很大進(jìn)展，國內(nèi)婁高明等[5]根據(jù)PRRSV的ORF7序列，設(shè)計一套引物并建立了RT PCR方法，試驗結(jié)果證明其效果較好，且可從基因水平上區(qū)分PRRSV美洲型和歐洲型，而且對國內(nèi)疑似為PRRS送檢樣進(jìn)行檢測，確定其毒株為美洲型?？傊?，RT PCR方法是一種快速、準(zhǔn)確、靈敏的診斷方法。

4.3.2基因探針 國外學(xué)者用地高辛標(biāo)記的核酸探針檢測細(xì)胞培養(yǎng)和福爾馬林固定組織中的PRRSV獲得成功。該探針174bp，主要針對PRRSV的核衣殼蛋白基因，能特異地檢測組織或細(xì)胞中PRRSV的RNA。但由于標(biāo)記探針的價格高、技術(shù)操作復(fù)雜等問題，普遍使用尚存在一定困難。

5結(jié)論

綜上所述，PRRS給當(dāng)前養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴(yán)重的危害，通過不同檢測技術(shù)對PRRS進(jìn)行確診及監(jiān)測是防控該病的重要環(huán)節(jié)。在臨床應(yīng)用過程中，有必要充分考慮每種診斷方法的優(yōu)點及局限性，根據(jù)實際生產(chǎn)需要以及試驗條件等綜合情況來選擇確定檢測方法，這樣才能更好地發(fā)揮各種診斷技術(shù)自身的特點，準(zhǔn)確地診斷疾病并制定出合理的預(yù)防控制措施。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉書亮，王紅寧.PRRS的病原學(xué)和免疫學(xué)研究進(jìn)展[J].四川畜牧獸醫(yī)，2000，27（7）：79 83.

[2] 郭傳鳳.PRRS的病毒簡介[J].豬與禽，2012（6）：9.

[3]郭寶清，陳章水，劉文興.從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J].中國畜禽傳染病，1996，2（2）：l 4.

[4]劉光清，蔡雪暉，仇華吉，等.豬繁殖與呼吸綜合征的研究進(jìn)展[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2001，23（1）：72 76.

[5]婁高明，杜偉賢，謝明權(quán)，等.豬繁殖與呼吸綜合征病毒RT PCR診斷方法的建立[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2000，20（2）：141 144.