色素上皮衍生因子對(duì)高糖刺激下大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞凋亡的影響

李夢(mèng)云 李艷 劉宏波 畢歡麗 張杰

色素上皮衍生因子對(duì)高糖刺激下大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞凋亡的影響

李夢(mèng)云 李艷 劉宏波 畢歡麗 張杰

色素上皮衍生因子；高糖刺激；Müller細(xì)胞；bcl-2基因；bax基因；細(xì)胞凋亡

目的探討色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)對(duì)高糖刺激下視網(wǎng)膜Müller 細(xì)胞凋亡的影響，為PEDF治療糖尿病視網(wǎng)膜病變提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法實(shí)驗(yàn)分3組，分別是正常對(duì)照組、高糖模型(HG)組(培養(yǎng)基內(nèi)含有25 mmol·L-1的葡萄糖)和PEDF處理高糖模型(HG+ PEDF)組(在高糖培養(yǎng)基礎(chǔ)上加入25 mg·L-1的PEDF)。反復(fù)胰蛋白酶消化法培養(yǎng)純化SD大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞，免疫熒光雙標(biāo)鑒定純度；應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察Müller 細(xì)胞形態(tài)，AnnexinV-FITC、PI染色流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)Müller 細(xì)胞的凋亡率，RT-PCR測(cè)定Müller細(xì)胞bcl-2、bax mRNA的表達(dá)變化。結(jié)果原代培養(yǎng)的Müller細(xì)胞傳至3代時(shí)純度為95%以上。正常對(duì)照組、HG組、HG+PEDF組Müller細(xì)胞早期凋亡率分別為(1.223±0.106)%、(2.657±0.120)%、(1.907±0.117)%，bax mRNA相對(duì)灰度值分別為0.269±0.041、0.804±0.052、0.528±0.018，bcl-2 mRNA相對(duì)灰度值分別為0.904±0.021、0.413±0.015、0.521±0.010。HG組與正常對(duì)照組相比，Müller細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，細(xì)胞凋亡率顯著增加(P<0.001)，bax mRNA表達(dá)顯著升高，bcl-2 mRNA表達(dá)顯著降低(均為P<0.01)；HG+PEDF組Müller細(xì)胞凋亡率較HG組顯著降低(P<0.001)，bax mRNA表達(dá)顯著降低，bcl-2 mRNA表達(dá)顯著升高(均為P<0.01)，但仍有別于正常對(duì)照組(均為P<0.05)。結(jié)論外源給予PEDF可以顯著減少高糖刺激引起的Müller細(xì)胞的凋亡，對(duì)視網(wǎng)膜Müller 細(xì)胞具有顯著的保護(hù)作用。

[眼科新進(jìn)展，2014，34(6)：526-529]

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病致盲的主要原因之一。研究表明，DR不僅有微血管病變，而且視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞亦發(fā)生了性狀及功能的改變[1]。Müller細(xì)胞是視網(wǎng)膜中主要的膠質(zhì)細(xì)胞，貫穿整個(gè)視網(wǎng)膜，包繞著幾乎所有神經(jīng)元的胞體及突觸，具有星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的共同功能，在維持視網(wǎng)膜正常結(jié)構(gòu)、代謝及調(diào)節(jié)血-視網(wǎng)膜屏障等方面發(fā)揮重要作用。糖尿病時(shí)Müller細(xì)胞形態(tài)、功能均發(fā)生異常[2]。色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor，PEDF)是絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族的一員，不僅是一種天然的新生血管抑制劑，還是一種重要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)因子[3]。本實(shí)驗(yàn)探討PEDF對(duì)高糖狀態(tài)下的Müller 細(xì)胞是否具有保護(hù)作用，為其在治療DR時(shí)作為一種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)因子提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑、儀器出生3 d SPF級(jí)SD乳鼠10只，由青島市動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。重組人PEDF(美國(guó)PeproTech公司)；胎牛血清(杭州四季青)；DMEM、D-Hank平衡鹽溶液(美國(guó)HyClone公司)；胰蛋白酶-EDTA消化液、TritonX-100溶液、牛血清白蛋白(BSA)(北京Solarbio公司)；兔抗大鼠谷氨酰胺合成酶(GS)單克隆抗體(北京博奧森)；小鼠抗大鼠波形蛋白(Vimentin)單克隆抗體、DAPI染色液(武漢博士德)；山羊抗小鼠Ig/FITC熒光二抗、山羊抗兔Ig/TRITC熒光二抗(美國(guó)Jackson公司)；AnnexinV-FITC、PI凋亡試劑盒(杭州寶賽)；Trizol、M-MuLV第一鏈cDNA合成試劑盒(上海生工生物)；Premix Taq、Marker、上下游引物(TaKaRa)。核酸蛋白定量?jī)x、梯度PCR儀(德國(guó)Eppendorf公司)；相差顯微鏡(德國(guó)Leica公司)；凝膠電泳成像分析系統(tǒng)(美國(guó)Alpha innotech公司)；流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)。

1.2方法

1.2.1SD乳鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞的純化培養(yǎng)及傳代出生3 d SPF級(jí)SD乳鼠10只，體積分?jǐn)?shù)75%酒精消毒并將其浸溺5 min，無(wú)菌條件下取出眼球，D-Hank液沖洗數(shù)遍，DMEM/F-12培養(yǎng)基中放置6 h，取出眼球，D-Hank液漂洗數(shù)遍，置于解剖顯微鏡下取出視網(wǎng)膜神經(jīng)上皮層，置入含3 mL D-Hank液的培養(yǎng)皿中，將其剪成小于1 mm×1 mm的碎塊，加入胰蛋白酶-EDTA消化液3 mL，37 ℃消化30 min，銅網(wǎng)過(guò)濾，濾液移入離心管中，1200 r·min-1離心5 min，棄上清液，用含體積分?jǐn)?shù)13%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)液重懸，1200 r·min-1離心5 min，反復(fù)2次。加入含體積分?jǐn)?shù)13%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)液(含青、鏈霉素混合液1 mL)，吸管吹打混勻后細(xì)胞懸浮5 min，細(xì)胞計(jì)數(shù)，按(2～5)×105個(gè)·mL-1接種于培養(yǎng)瓶中。每4 d換液，換液3～5 d后細(xì)胞融合，加入胰蛋白酶-EDTA消化液1 mL，相差顯微鏡下觀察，待細(xì)胞收縮變圓，加入含體積分?jǐn)?shù)13%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)液終止消化，反復(fù)吹打，12傳代分瓶。

1.2.2免疫熒光雙標(biāo)法鑒定Müller細(xì)胞純度傳至第3代的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Müller細(xì)胞按105個(gè)·mL-1接種至多聚賴(lài)氨酸包被的蓋玻片上，待細(xì)胞融合達(dá)80%時(shí)取出蓋玻片，40 g·L-1多聚甲醛室溫固定15 min，10 mmol·L-1PBS洗滌 5 min×3次，TritonX-100室溫透化10 min，10 mmol·L-1PBS洗滌5 min×3次，30 g·L-1牛血清白蛋白37 ℃封閉30 min，加入一抗：兔抗大鼠GS(1200)及小鼠抗大鼠Vimentin(1200)，10 mmol·L-1PBS作陰性對(duì)照，4 ℃過(guò)夜。10 mmol·L-1PBS洗滌5 min×3次，加相應(yīng)的二抗：山羊抗小鼠Ig/FITC(150)、山羊抗兔Ig/TRITC(150)，37 ℃孵育30 min，10 mmol·L-1PBS洗滌5 min×3次，DAPI染核，室溫孵育10 min，10 mmol·L-1PBS洗滌5 min×3次，抗熒光淬滅封片劑封片，熒光顯微鏡下觀察并采集圖片。

1.2.3實(shí)驗(yàn)分組及顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)實(shí)驗(yàn)分3組，分別為正常對(duì)照組、高糖模型(HG)組和PEDF處理高糖模型(HG+ PEDF)組。傳至第3代的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Müller細(xì)胞按2×105個(gè)·mL-1接種于培養(yǎng)瓶或6孔板中，待細(xì)胞達(dá)80%融合時(shí)，棄培養(yǎng)液，正常對(duì)照組更換為DMEM/F-12培養(yǎng)基，HG組、HG+PEDF組更換為DMEM/高糖培養(yǎng)基(葡萄糖濃度為25 μmol·L-1；體外培養(yǎng)時(shí)25 mmol·L-1的高糖濃度，可近似等同于糖尿病時(shí)體內(nèi)高糖狀態(tài)[4])，培養(yǎng)24 h，之后HG+PEDF組中加入25 μg·L-1PEDF，3組繼續(xù)培養(yǎng)24 h，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)改變。

1.2.4流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組Müller細(xì)胞凋亡率各實(shí)驗(yàn)組處理同上，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷PBS沖洗2次，胰蛋白酶適度消化，培養(yǎng)液終止消化，收集后離心，入1.5 mL離心管。預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞2次，棄上清，加入1×Binding buffer 300 μL，振蕩細(xì)胞至完全混勻，調(diào)整樣本細(xì)胞數(shù)至(1～5)×106個(gè)·mL-1，加5 μL Annexin V-FITC，混勻后室溫避光孵育15 min，加5 μL PI，混勻后室溫避光孵育5 min，加入1×Binding buffer 200 μL，吹打混勻，流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組的凋亡率，每組重復(fù)6次。

1.2.5RT-PCR分析各組Müller細(xì)胞bcl-2、baxmRNA的表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組處理同上，棄培養(yǎng)液，預(yù)冷PBS沖洗2次，用Trizol試劑提取各組總RNA，核酸蛋白定量?jī)x檢測(cè)RNA純度及含量，各實(shí)驗(yàn)組取RNA 1 μg，加入Oligo(dT)1 μL，RNase free ddH2O至12 μL，65 ℃溫浴5 min，冰浴30 s，加5×Reaction Buffer 4 μL、RNase Inhibitor 1 μL、dNTP Mix 2 μL、M-MuLV RT 1 μL，在PCR儀上逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，條件：42 ℃ 45 min，70 ℃ 10 min。擴(kuò)增條件：β-actin：上游引物為5’-AGCCATGTACGTAGCCATCC-3’，下游引物為5’-TCTCAGCTGTGGTGGTGAAG-3’，退火溫度為55 ℃，產(chǎn)物長(zhǎng)度為227 bp；bcl-2：上游引物為5’-CGGGAGAACAGGGTATGAT-3’，下游引物為5’-CCCACCGAACTCAAAGAAG-3’，退火溫度為58 ℃，產(chǎn)物長(zhǎng)度為445 bp；bax：上游引物為5’-GCAGAGGATGATTGCTGATG-3’，下游引物為5’-AGCCACAAAGATGGTCACTG-3’，退火溫度56 ℃，產(chǎn)物長(zhǎng)度為307 bp。

1.3數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析采用IMAGEJ軟件進(jìn)行PCR結(jié)果灰度值測(cè)定，SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間差異采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1Müller細(xì)胞的形態(tài)觀察及純度鑒定原代細(xì)胞接種3 d即有細(xì)胞貼壁，10 d完全融合，多種形態(tài)的細(xì)胞混雜，傳至第3代，細(xì)胞形態(tài)基本一致，胞體肥大、扁平、不規(guī)則，向四周伸出突起，胞漿豐富，胞核呈卵圓形，相鄰細(xì)胞交織成網(wǎng)狀。用Müller細(xì)胞標(biāo)記物GS和Vimentin染色鑒定Müller細(xì)胞的純度，結(jié)果表明原代培養(yǎng)的Müller細(xì)胞傳至3代時(shí)純度為95%以上。

顯微鏡下觀察，HG組的Müller細(xì)胞數(shù)量明顯減少，胞體收縮，突起變短，細(xì)胞核縮小、不規(guī)則。HG+PEDF組與HG組相比，Müller細(xì)胞數(shù)量增加，胞體增大，突起變長(zhǎng)，細(xì)胞核形態(tài)較規(guī)則。

2.2高糖作用及PEDF干預(yù)后Müller細(xì)胞凋亡率的變化流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果(圖1)：正常對(duì)照組、HG組、HG+PEDF組Müller細(xì)胞早期凋亡率分別為(1.223±0.106)%、(2.657±0.120)%、(1.907±0.117)%。HG組較正常對(duì)照組Müller細(xì)胞凋亡率顯著升高(P<0.001)，提示高糖狀態(tài)加劇了Müller細(xì)胞的早期凋亡；HG+PEDF組較HG組Müller細(xì)胞凋亡率顯著降低(P<0.001)，但仍高于正常對(duì)照組(P<0.05)，提示外源給予PEDF可以減弱高糖導(dǎo)致的Müller細(xì)胞的早期凋亡，對(duì)高糖導(dǎo)致的Müller細(xì)胞的損傷具有保護(hù)作用，但不能完全挽救。

Figure 1 Effects of high glucose and PEDF on Müller cells apoptosis 高糖、PEDF對(duì)Müller細(xì)胞凋亡的影響

2.3高糖作用及PEDF干預(yù)后Müller細(xì)胞bcl-2、baxmRNA表達(dá)的變化RT-PCR結(jié)果(圖2、表1)顯示：HG組較正常對(duì)照組bax mRNA表達(dá)顯著升高，bcl-2 mRNA表達(dá)顯著降低(均為P<0.01)；HG+PEDF組較HG組bax mRNA表達(dá)顯著降低，bcl-2 mRNA表達(dá)顯著升高(均為P<0.01)，但各項(xiàng)指標(biāo)仍有別于正常對(duì)照組(均為P<0.05)。該結(jié)果和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果相一致，高糖可引起Müller細(xì)胞凋亡，而PEDF對(duì)Müller細(xì)胞的損傷具有一定的保護(hù)作用。

Figure 2 Agarose gel electrophoresis of bax，bcl-2 mRNA bax、bcl-2 PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖

表1 各組bax、bcl-2 mRNA的相對(duì)灰度值Table 1 Relative gray values of bax，bcl-2 mRNA in each group(±s)

3 討論

隨著對(duì)DR發(fā)病機(jī)制的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)在糖尿病早期，視網(wǎng)膜神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞已經(jīng)在結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生了改變[1，5]，因此，預(yù)防和控制慢性神經(jīng)元退行性改變成為治療DR的新靶點(diǎn)。早期研究證實(shí)，PEDF可以有效抑制新生血管形成，與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子等一起控制了新生血管的發(fā)生。隨著研究的逐漸深入，人們發(fā)現(xiàn)PEDF還具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用[6]。因此，目前PEDF在眼科領(lǐng)域的研究非常廣泛。實(shí)驗(yàn)證明，玻璃體內(nèi)注射PEDF 有助于減輕視網(wǎng)膜缺血-再灌注損傷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cell，RGC)的變性、死亡[7]及青光眼動(dòng)物模型時(shí)RGC 和神經(jīng)纖維層的丟失，PEDF 還具有保護(hù)體外培養(yǎng)的 RGC 免受谷氨酸鹽的細(xì)胞毒性和去除營(yíng)養(yǎng)因子所致的損傷[8]等作用。細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染 PEDF 后，可以減輕高眼壓對(duì) RGC 產(chǎn)生的損傷，挽救青光眼時(shí)RGC的凋亡[9]。但是，目前關(guān)于PEDF對(duì)DR發(fā)揮視神經(jīng)保護(hù)作用的研究甚少。

Müller細(xì)胞是視網(wǎng)膜中的主要神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，它不僅起到視網(wǎng)膜支架及填充作用，還直接參與視網(wǎng)膜微環(huán)境的調(diào)節(jié)、供給神經(jīng)元代謝的能量，與神經(jīng)元之間有雙向信號(hào)傳遞[10]。PEDF可能通過(guò)釋放某些可溶性因子，發(fā)揮誘導(dǎo)視網(wǎng)膜前體細(xì)胞向RGC分化的作用[11]。鑒于Müller細(xì)胞功能的多樣性，本研究將其作為靶細(xì)胞，采用反復(fù)胰蛋白酶消化法成功培養(yǎng)純化SD大鼠視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞，傳至3代后，免疫熒光雙染法鑒定，95%以上細(xì)胞為視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞。應(yīng)用含25 mmol ·L-1葡萄糖的 DMEM培養(yǎng)液在細(xì)胞水平上模擬高糖環(huán)境，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，高糖引起Müller細(xì)胞凋亡顯著增加，PEDF干預(yù)后細(xì)胞凋亡顯著減少。有研究表明，糖尿病可導(dǎo)致視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞Glu轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙[12]，細(xì)胞外積聚的Glu不僅過(guò)度激活相應(yīng)受體，引起一系列級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致神經(jīng)元的損傷或死亡[13]，而且還可能造成視網(wǎng)膜繼發(fā)性損害，加重視網(wǎng)膜的缺血缺氧，PEDF可上調(diào)視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞谷氨酰胺合成酶的表達(dá)，改善谷氨酸循環(huán)，抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[14-16]。

bcl-2基因家族是研究最早的，也是目前最受重視的調(diào)控細(xì)胞凋亡的基因家族之一，分為主要包括bcl-2、bcl-XL、bcl-W、mcl-1、CED9等的抗凋亡基因及主要包括bax、bak、bcl-XS、bad、bik、bid等的促凋亡基因，bcl-2在細(xì)胞受到外界刺激時(shí)可以保護(hù)細(xì)胞免于凋亡，bax具有加速細(xì)胞凋亡的作用[17-19]。當(dāng) bax蛋白形成 bax/bax同源二聚體時(shí)可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，隨著bcl-2蛋白的表達(dá)量上升，bax/bax二聚體分開(kāi)，與bcl-2蛋白形成比 bax/bax二聚體更穩(wěn)定的 bax/bcl-2異源二聚體，故bax/bcl-2比值更能反映細(xì)胞凋亡的程度[20]。我們使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)應(yīng)用PEDF后bcl-2表達(dá)升高，而bax表達(dá)降低，因此我們推測(cè) DR 早期 PEDF通過(guò)調(diào)節(jié)bcl-2基因家族的表達(dá)發(fā)揮降低視網(wǎng)膜神經(jīng)退行性改變的重要作用。

PEDF不僅是一種內(nèi)源性眼部新生血管抑制劑，還是一種重要的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)因子[3]，通過(guò)局部用藥或基因轉(zhuǎn)染等途徑增加PEDF在DR中的表達(dá)，不僅可以抑制DR新生血管生長(zhǎng)，還有助于減少DR神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，達(dá)到早期治療的目的，這將為臨床 DR 的預(yù)防及治療提供新的方案，但是PEDF對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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date：Dec 5，2013

Effects of PEDF on rat retinal Müller cells apoptosis stimulated by high glucose

LI Meng-Yun，LI Yan，LIU Hong-Bo，BI Huan-Li，ZHANG Jie

PEDF;high glucose stimulation;Müller cell;bcl-2;bax;cell apoptosis

Objective To investigate the effects of pigment epithelium-derived factor(PEDF)on high glucose-stimulated rat retinal Müller cells apoptosis，and provide experimental basis for the treatment of diabetic retinopathy with PEDF.Methods The cells were divided into normal control group，high glucose model(HG)group(containing 25 mmol·L-1glucose in medium)and high glucose plus PEDF(HG+PEDF)group(containing 25 mmol·L-1glucose and 25 mg·L-1PEDF in medium).Repeated pancreatic enzyme-degisting method was used to culture and purify the retinal Müller cells of SD rats.The purity was indentified by double-labeled immunofluorescence.The morphology was observed by confocalmicroscopy.The changes of Müller cells morphology and apoptosis were assayed with inverted phase contrast microscope，AnnexinV-FITC﹠PI staining and flow cytometric，the expression of bcl-2 and bax mRNA were detected by RT-PCR.Results The purity of passage 3 retinal Müller cells was above 95%.The apoptotic rate of Müller cells in normal control group，HG group，HG+PEDF group were(1.223±0.106)%，(2.657±0.120)%，(1.907±0.117)%，respectively，the relative gray values of bax mRNA were 0.269±0.041，0.804±0.052，0.528±0.018，respectively，the relative gray values of bcl-2 mRNA were 0.904±0.021，0.413±0.015，0.521±0.010，respectively.Compared with normal control group，the morphology of retinal Müller cells in HG group were changed，and the apoptotic rate was obviously increased(P<0.001);The expression of bax mRNA in Müller cells was obviously increased，while bcl-2 mRNA was obviously decreased(allP<0.01);Compared with HG group，the apoptotic rate in HG+PEDF group was obviously decreased(P<0.001)，the expression of bcl-2 mRNA was significantly decreased，while bax mRNA was significantly increased(allP<0.01)，but still had statistical difference compared with normal control group(allP<0.05).Conclusion Giving exogenous PEDF can significantly reduce the high glucose-stimulated retinal Müller cells apoptosis，so PEDF has a significant protective effect on retinal Müller cells.

李夢(mèng)云，女，1986年1月出生，山東安丘人，碩士。聯(lián)系電話:13406697581；E-mail:limengyun 1986@126.com

AboutLIMeng-Yun:Female，born in January，1986.Master degree.Tel:13406697581;E-mail:limengyun1986@126.com

2013-12-05

261031 山東省濰坊市，濰坊醫(yī)學(xué)院眼科教研室(李夢(mèng)云，李 艷，畢歡麗，張 杰)；276000 山東省臨沂市，臨沂市人民醫(yī)院(劉宏波)

李艷，E-mail:liyanmails@126.com

李夢(mèng)云，李艷，劉宏波，畢歡麗，張杰.色素上皮衍生因子對(duì)高糖刺激下大鼠視網(wǎng)膜Müller 細(xì)胞凋亡的影響[J].眼科新進(jìn)展，2014，34(6)：526-529.

10.13389/j.cnki.rao.2014.0144

【實(shí)驗(yàn)研究】

修回日期：2014-02-12

本文編輯：盛麗娜

Accepteddate:Feb 12，2014

From theDepartmentofOphthalmology，WeifangMedicalCollege(LI Meng-Yun，LI Yan，BI Huan-Li，ZHANG Jie)，Weifang261031，ShandongProvince，China;LinyiPeople’sHospital(LIU Hong-Bo)，Linyi276000，ShandongProvince，China

Responsibleauthor:LI Yan，E-mail:liyanmails@126.com

[RecAdvOphthalmol，2014，34(6):526-529]