夏天膠囊對硝酸甘油偏頭痛模型大鼠行為及5-羥色胺含量的影響

田 濤，王紅宇

(中國人民解放軍成都軍區(qū)成都藥材倉庫，四川 成都 610017)

偏頭痛是反復(fù)發(fā)作的一側(cè)或雙側(cè)頭部搏動性疼痛，并伴有惡心嘔吐等植物神經(jīng)癥狀，是臨床常見的原發(fā)性頭痛，也是常見病、多發(fā)病之一。針對偏頭痛的防治手段也各有利弊，其發(fā)病率仍居高不下。經(jīng)多年的臨床實踐發(fā)現(xiàn)，以夏天無、天麻等組方的夏天膠囊治療偏頭痛，臨床療效較好。本試驗中通過研究夏天膠囊對實驗性偏頭痛大鼠的血清和腦組織5-羥色胺(5 -HT)含量和行為學(xué)的影響，探討其對偏頭痛的作用及其作用機制，為臨床辨證施治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器、材料及動物

Agilent 1100 型高效液相色譜儀(Agilent 公司);LGR16-W 型高速冷凍離心機(北京醫(yī)用離心機廠)。夏天膠囊(自制，規(guī)格為每粒0.5 g，由夏天無18 g、天麻10 g、川芎15 g、川牛膝15 g 組方);氟桂利嗪膠囊(天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司);5 -羥色胺對照品(Sigma 公司，AR 級);乙酸鈉、檸檬酸、辛烷基磺酸鈉、正二丁胺、乙二胺四乙酸(美國Amresco 公司)。雄性SD 大鼠60 只，由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，動物合格證號為SCXK(滬)2007 -0005，9 周齡，體重(260±20)g，均適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。

1.2 方法

分組與造模:取60 只大鼠，隨機分為6 組，即正常對照組(A 組)、模型組(B 組)、氟桂利嗪陰性對照組(C 組)及夏天膠囊高、中、低3 個劑量組(D1，D2，D3 組)。A 組和B 組予蒸餾水灌胃，用藥組(C，D1，D2，D3 組)分別給予氟桂利嗪(0.5 mg/10 g)和高、中、低劑量夏天膠囊(相當(dāng)于每1 kg 體重20，10，5 g 生藥)灌胃，每日1次，連續(xù)給藥7 d。按照Tassorelli 等[1]報道的方法復(fù)制實驗性偏頭痛模型。各組動物末次給藥后，除A 組皮下注射等體積生理鹽水外，其余各組立即皮下注射硝酸甘油(GTN)10 mg/kg。

模型大鼠行為學(xué)觀察:大鼠注射GTN 2 h 后，以出現(xiàn)雙耳發(fā)紅、前肢頻繁撓頭、爬籠次數(shù)為指標(biāo)，觀察4 h 內(nèi)大鼠撓頭次數(shù)。

血清和腦組織中5-HT 含量檢測:在觀察完行為學(xué)指標(biāo)后，斷頭處死各組大鼠，收集頸部動靜脈混合血3 mL，冷凍離心，取血清，置-20 ℃冰箱待處理。同時，冰盤上迅速分離出下丘腦，去除腦膜和血管，精確稱重后置液氮缺保存，24 h 后將液氮罐中的組織置勻漿器中，用5%高氯酸勻漿，于溫度4 ℃、轉(zhuǎn)速10 000 r/min離心20 min，取上清液，置-20 ℃冰箱保存。測樣時，室溫下解凍，0.22 μm 微孔濾膜過濾;取上述血清200 μL 置1.5 mL EP 管內(nèi)，再加入等體積的5%高氯酸溶液，加蓋搖勻，室溫放置20 min，10 000 r/min 離心15 min，取上清液，0.22 μm 微孔濾膜過濾。分別取微孔濾膜過濾的腦組織及血液樣品20 μL，用高效液相色譜儀測定5 -HT 含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 對模型大鼠行為學(xué)的影響

結(jié)果見表1?？梢姡珺 組大鼠在造模2 h 后的4 h 內(nèi)撓頭次數(shù)較A 組顯著增多，高、中劑量夏天膠囊能明顯減少大鼠的撓頭次數(shù)(P ＜0.01 或P ＜0.05)，低劑量有減少撓頭次數(shù)的趨勢但無顯顯著性差異。

表1 夏天膠囊對偏頭痛模型大鼠行為學(xué)及5 -HT 含量的影響(± s，n=10)

表1 夏天膠囊對偏頭痛模型大鼠行為學(xué)及5 -HT 含量的影響(± s，n=10)

注:與A 組比較，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。

組別A 組B 組C 組D1 組D2 組D3 組劑量--0.5 mg/kg 20 g/kg 10 g/kg 5 g/kg 4 h 內(nèi)撓頭次數(shù)(次)34.42±17.65▲86.87±30.40 58.65±27.34△47.35±26.25▲54.20±28.19△62.19±30.12腦組織(ng/g)425.58±92.33▲229.40±53.93 357.42±61.32▲333.57±57.28▲302.19±65.08△248.21±54.53血清(ng/mL)570.50±141.39▲378.22±98.38 508.69±89.28▲464.03±83.41△427.59±97.65 398.42±86.21

2.2 對模型大鼠腦組織及血清5 -HT 含量的影響

結(jié)果見表1。可見，與A 組比較，B 組腦組織和血清的5 -HT含量非常顯著地降低(P ＜0.01);與B 組比較，D1 組及D2 組腦組織的5 -HT 含量顯著升高(P ＜0.01 和P ＜0.05)，D3 組有升高趨勢但無顯著性差異;與B 組比較，D1 組血清的5 -HT含量顯著升高(P ＜0.05)，D2 及D3 組有升高趨勢但無顯著性差異。

3 討論

偏頭痛病因復(fù)雜，確切的發(fā)病機制至今尚未完全闡明，最早闡述的為血管神經(jīng)性學(xué)說，后來發(fā)現(xiàn)5-HT 和β-內(nèi)啡呔為發(fā)病的主要因素，近年來認為與血漿中肽類活性物質(zhì)有關(guān)[2]。GTN 可直接或間接地引起血管和神經(jīng)兩方面的變化:GTN 在局部的生成物，如NO 及cGMP，可直接對血管或神經(jīng)元起作用;GTN 的間接作用較復(fù)雜，包括iNOS 的作用、炎癥的生成、三叉神經(jīng)血管系統(tǒng)的激活，還可能和痛覺過敏狀態(tài)的形成和持續(xù)有關(guān)[3]。GTN 靜脈注射大鼠模型的癥狀表現(xiàn)及病理變化與人類的偏頭痛發(fā)作有高度的相似性，且動物易獲得、經(jīng)濟、簡便、相似性好。因此，選用GTN 靜脈注射致大鼠偏頭痛模型進行試驗。結(jié)果表明，模型組動物在2 h 潛伏期后的4 h 內(nèi)撓頭次數(shù)、腦組織和血清的5 -HT 含量均顯著增加，表明模型成功。

夏天膠囊由夏天無、天麻、川芎、川牛膝組方。夏天無具有降壓鎮(zhèn)痙、行氣止痛、活血去瘀之功效，用于治療高血壓、偏癱、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、小兒麻痹后遺癥等[4]。研究表明，夏天無具有抑制血栓形成、減少腦微循環(huán)障礙、抗老年性癡呆、抗心律失常、降壓、鎮(zhèn)痛、抗炎作用及抑制乙酰膽堿酯酶活性等作用[5]。天麻性平、味甘，有平肝熄風(fēng)止痙的功效，主治頭痛眩暈、肢體麻木、小兒驚風(fēng)、癲癇抽搐、破傷風(fēng)?，F(xiàn)代研究表明，天麻可使血壓下降、心率減慢、心輸出量增加、心肌耗氧量下降，可降低頭部的血管阻力，對抗血栓形成，還具有鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛抗炎及延緩衰老作用[6]。川芎為治療頭痛的圣藥，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，其主要成分有川芎嗪、阿魏酸、川芎酚、川芎內(nèi)酯、藁本內(nèi)酯等，其中川芎嗪不僅能抗血栓形成，改善腦和外周微循環(huán)，還具有抗炎作用[7]。川牛膝性平，味甘、微苦，具有逐瘀通經(jīng)、通利關(guān)節(jié)、利尿通淋、催產(chǎn)下胎之效。川牛膝的化學(xué)成分主要為生物堿、甾酮類和阿魏酸?，F(xiàn)代研究表明，川牛膝則能通過增強紅細胞變形能力而改善微循環(huán)，具有延緩衰老、抗血小板聚集、抗炎作用、促進蛋白質(zhì)合成等作用[8]。本試驗結(jié)果表明，夏天膠囊可有效減少偏頭痛模型大鼠的撓頭次數(shù)，提示其能有效緩解偏頭痛的臨床癥狀;同時，還可有效升高模型大鼠腦組織和血清5 -HT 的含量，提示其治療偏頭痛的作用機制可能與升高腦組織和血清中5 -HT的含量有關(guān)。這為夏天膠囊臨床用于治療偏頭痛提供了理論依據(jù)。偏頭痛的病因復(fù)雜，要徹底弄清夏天膠囊的作用機理，還需要更深入細致的研究。

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