改良高效液相色譜法測定元胡止痛滴丸和膠囊中延胡索乙素含量

楊 帆

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)所·重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

元胡止痛系列品種由醋延胡索、白芷兩味藥組方，具有理氣、活血、止痛之功效，用于氣滯血瘀的胃痛、脅痛、頭痛及痛經(jīng)等癥[1-2]。元胡止痛滴丸收載于2010 年版《中國藥典第二增補(bǔ)本》，元胡止痛膠囊收載于2010 年版《中國藥典(一部)》，兩者均采用高效液相色譜(HPLC)法測定延胡索中延胡索乙素的含量，但方法僅采用氨試液-甲醇(1 ∶20)混合溶液超聲提取，未進(jìn)一步除雜，致使樣品中延胡索乙素色譜峰分離不佳，影響含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確度。本試驗(yàn)中僅對供試品溶液制備方法進(jìn)行改進(jìn)，即采用甲醇對樣品進(jìn)行提取，并采用中性氧化鋁對提取液進(jìn)行純化，使樣品中延胡索乙素峰達(dá)到了基線分離，含量測定結(jié)果更為可靠。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司);HPChmestation 色譜工作站。延胡索乙素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為110736-201035，含量為99.6%);元胡止痛滴丸(甘肅隴神戎發(fā)制藥有限公司，批號為20101202，20101110，20090903);元胡止痛膠囊(濟(jì)南利蒙制藥有限公司，批號為11100601，12020603;四川泰樂制藥有限公司，批號為120803);乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:迪馬Dialmonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:0.1%磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH 至6.0)-乙腈(65 ∶35);流速:1.5 mL/min;檢測波長:280 nm;柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。

2.2 溶液制備

精密稱取延胡索乙素對照品0.013 80 g，置50 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精密量取1 mL，置10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。分別取滴丸或膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，混勻，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，取出，放冷，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，通過中性氧化鋁柱(100 ～200 目，8 g，內(nèi)徑1.5 cm)，用甲醇30 mL 洗脫，收集流出液和甲醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ萦? mL 容量瓶中，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另取缺醋延胡索的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取2.2 項(xiàng)下4 種溶液各10 μL，按擬訂色譜條件依法進(jìn)樣測定。結(jié)果陰性對照品溶液與對照品溶液在相同保留時(shí)間處未見色譜峰，故認(rèn)為陰性對照品溶液對測定無干擾，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:取2.2 項(xiàng)下對照品貯備液，精密量取0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10 μL，測定峰面積。以進(jìn)樣量(C，μg)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程A=9 279.1 C-1.184 5，r=0.999 8( n=6)。結(jié)果表明，延胡索乙素進(jìn)樣量在0.054 98 ～0.549 8 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5 次，測定峰面積。結(jié)果的RSD=0.88%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):分別取新制備的元胡止痛滴丸和膠囊的同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12 h 時(shí)進(jìn)樣測定延胡索乙素峰面積。結(jié)果滴丸的RSD=1.3%，膠囊的RSD=1.8% ( n=5)，表明滴丸和膠囊供試品溶液在12 h 內(nèi)穩(wěn)定性。

重復(fù)性試驗(yàn):分別取同一批元胡止痛滴丸和膠囊，依法制備供試品溶液各5 份，測定延胡索乙素的含量。結(jié)果滴丸的RSD=1.8%，膠囊的RSD=1.6% ( n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已測定含量的同一批樣品(同重復(fù)性試驗(yàn)樣品，滴丸含量為0.320 0 mg/g，膠囊含量為0.409 9 mg/g)約1.0 g，各5 份，分置具塞錐形瓶中，分別精密加入延胡索乙素對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法操作，測定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 元胡止痛滴丸和膠囊加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.4 樣品含量測定

分別取元胡止痛滴丸、膠囊各3 批，依法制成供試品溶液，分別進(jìn)樣，測得峰面積，計(jì)算延胡索乙素的含量。結(jié)果見表2。

表2 元胡止痛滴丸和膠囊含量測定結(jié)果

3 討論

本研究中元胡止痛滴丸、膠囊供試品溶液制備方法參考了元胡止痛片含量測定方法[1]，采用甲醇作為提取溶劑，提取液通過中性氧化鋁柱純化。試驗(yàn)中，比較了甲醇和氨試液-甲醇(1 ∶20)混合溶液作為提取溶劑，結(jié)果兩者提取效果無明顯差異，故選擇甲醇為提取溶劑;同時(shí)對提取液通過中性氧化鋁柱后洗脫劑甲醇的用量進(jìn)行了考察，結(jié)果用甲醇30 mL 即可將氧化鋁柱吸附的延胡索乙素洗脫完全。

改良后的方法除了使元胡止痛滴丸和膠囊延胡索乙素色譜峰分離更佳、含量測定結(jié)果更準(zhǔn)確外，同時(shí)也使得滴丸和膠囊與元胡止痛片的含量測定方法一致，為系列品種通用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究提供了參考依據(jù)。

[1] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:525 -526.

[2] 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典第二增補(bǔ)本[M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2013:15.