GC法測定十四味連黃燒傷軟膏中龍腦和異龍腦的含量

周秀紅 李成網(wǎng) 劉增輝 白娟 朱倩云

GC法測定十四味連黃燒傷軟膏中龍腦和異龍腦的含量

周秀紅 李成網(wǎng) 劉增輝 白娟 朱倩云

目的 建立十四味連黃燒傷軟膏中龍腦和異龍腦的含量測定方法。方法 采用聚乙二醇(PEG)-毛細(xì)血管柱(30 m×320 μm×0.25 μm), 以萘為內(nèi)標(biāo)物, 流速：0.8 ml/min, 柱溫：140℃,進(jìn)樣口溫度210 ℃, FID檢測器, 檢測器溫度為250 ℃。結(jié)果 龍腦和異龍腦分別在19.22~192.2、15.19~151.90 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9994、r=0.9993, n=6)；平均加樣回收率分別為98.42%和97.80% (RSD為0.80%、1.21%, n=9)。結(jié)論 本法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好, 可用于測定十四味連黃燒傷軟膏的質(zhì)量控制。

十四味連黃燒傷軟膏；龍腦；異龍腦；萘；氣相色譜法

十四味連黃燒傷軟膏由冰片、黃連、紫草等十四味藥制成, 具有清熱解毒、收斂、生肌、止痛之功, 用于各種燒、燙、灼傷。其中冰片來源于龍腦香科植物龍腦香的樹脂, 味辛、苦、微寒, 具有開竅醒神、清熱散毒的功效［1］, 為方中使藥。冰片中含有龍腦和異龍腦, 為更好的控制制劑的質(zhì)量, 采用氣相色譜法測定十四味燒傷軟膏中龍腦和異龍腦的含量［2,3］。結(jié)果表明：本法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1儀器 HP-6890氣相色譜儀(美國惠普公司)。

1.2試藥 龍腦、異龍腦對(duì)照品(中國生物制品檢定所, 批號(hào)：110881-201107、110881-200802, 供含量測定用)；萘(Aladdin Chemistry Co.Ltd, 批號(hào):14328)；十四味連黃燒傷軟膏和陰性制劑(安慶市石化醫(yī)院提供)；試劑：均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 色譜柱：聚乙二醇(PEG)-毛細(xì)管柱(30 m×320 μm×0.25 μm)；柱溫：140℃；載氣流量(N2)：0.8 ml/min (不分流模式)；進(jìn)樣口溫度：210℃；檢測器溫度：250℃；氫氣流速： 40 ml/min；空氣流速： 400 ml/min；符合藥典規(guī)定。供試品中異龍腦、龍腦所對(duì)應(yīng)的峰保留時(shí)間與對(duì)照品峰保留時(shí)間一致, 而陰性空白無干擾。見圖1~3。

2.2內(nèi)標(biāo)溶液的制備 稱取萘約0.003 g, 精密稱定, 置100 ml容量瓶中, 加環(huán)己烷定容至刻度, 得每1 ml含0.03 mg的內(nèi)標(biāo)溶液。

圖1 對(duì)照品溶液(A異龍腦 ；B 龍腦；C 萘)

圖2 樣品溶液(A異龍腦 ；B 龍腦；C 萘)

圖3 陰性空白溶液（C 萘）

2.3對(duì)照品溶液的制備 稱取干燥至恒重的龍腦和異龍腦對(duì)照品各約2 mg, 精密稱定, 置10 ml量瓶中, 加內(nèi)標(biāo)溶液定容至刻度, 得每1 ml含龍腦0.192 2 mg和異龍腦0.151 9 mg的混合對(duì)照品溶液。

2.4供試品溶液的制備 取樣品約2 g, 精密稱定, 置具塞錐形瓶中。精密加入萘內(nèi)標(biāo)溶液20 ml, 密塞, 稱定重量, 超聲處理10 min, 放冷, 再稱定重量, 用內(nèi)標(biāo)溶液補(bǔ)足減失的重量,濾過, 取續(xù)濾液, 即得。

2.5陰性樣品的制備 按“2.4供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.6校正因子的測定 精密吸取混合對(duì)照品溶液0.6 ml置于1 ml量瓶中, 加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度, 搖勻。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各2 μl, 依次注入氣相色譜儀中, 按上述色譜條件測定。計(jì)算龍腦校正因子為f=1.422 2(n=6), RSD=0.57%；異龍腦校正因子為f=1.399 6, RSD=1.33%。

2.7線性范圍的考察 精密吸取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml, 分別置1 ml量瓶中, 加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度, 搖勻。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各2 μl, 依次注入氣相色譜儀中, 按上述色譜條件測定, 以對(duì)照品的濃度(X)為橫坐標(biāo), 對(duì)照品的峰面積值與內(nèi)標(biāo)峰面積之比(Y)為縱坐標(biāo), 求得龍腦線性回歸方程為：Y=24.715 4X+0.016 4, r=0.999 4(n=6), 異龍腦線性回歸方程為：Y=25.133 1X+0.007 8, r=0.999 3(n=9)。結(jié)果表明, 龍腦和異龍腦分別在19.22~192.2 μg/ml和 15.19~151.90 μg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.8精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液0.6 ml置于1 ml量瓶中, 加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度, 搖勻。連續(xù)6次進(jìn)樣,每次2 μl, 得龍腦和異龍腦與內(nèi)標(biāo)萘峰面積比值的RSD分別為0.78%和0.95%。結(jié)果表明, 該方法測定精密度良好。

2.9穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試項(xiàng)下的溶液2 μl, 分別在0、2、4、6、8 h時(shí)進(jìn)行測定, 得對(duì)照品峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值RSD, 龍腦為2.95%, 異龍腦為2.06%。結(jié)果表明, 該方法條件下樣品中龍腦和異龍腦的含量在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.10重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)：20131214)的十四味連黃燒傷軟膏樣品6份, 按“2.4供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試液, 精密吸取該溶液2 μl, 依法進(jìn)樣, 得龍腦和異龍腦含量值的RSD分別為2.0%和1.05%。結(jié)果表明,該法重復(fù)性良好。

2.11加樣回收率試驗(yàn) 取重復(fù)性項(xiàng)下已知含量的十四味連黃燒傷軟膏樣品約1.0 g, 精密稱取9份, 分別加入龍腦和異龍腦混合對(duì)照品溶液適量, 按“2.4”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備, 按上述色譜條件, 依法進(jìn)樣, 計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1, 2。

表1 龍腦加樣回收率測定結(jié)果(mg, %)

表2 異龍腦加樣回收率測定結(jié)果(mg, %)

2.12樣品的含量測定 再取3份不同批號(hào)(批號(hào)為20131218、20131226和20140110)的樣品, 按含量測定項(xiàng)下供試品溶液的制備方法及色譜條件測定, 計(jì)算3批樣品的龍腦和異龍腦含量, 龍腦為0.435 2 mg/g、0.461 2 mg/g和0.477 6 mg/g, 異龍腦為0.359 8 mg/g、0.350 7 mg/g和0.317 1 mg/g。

3 討論

采用聚乙二醇-毛細(xì)管柱內(nèi)標(biāo)法測定十四味連黃燒傷軟膏中龍腦和異龍腦的含量并對(duì)色譜條件進(jìn)行了優(yōu)選, 結(jié)果表明：FID檢測器、柱溫140℃, 進(jìn)樣口溫度為210℃、檢測器溫度250 ℃時(shí)分離效果最佳, 靈敏度高。

試驗(yàn)中分別考察了水蒸氣蒸餾法提取、超聲提取、冷浸等方法, 結(jié)果表明, 超聲提取方法效果較好, 因此采用較為簡便的超聲提取方法, 且提取時(shí)間為10 min時(shí)已充分溶解。同時(shí)對(duì)提取溶劑也進(jìn)行了選擇, 結(jié)果環(huán)己烷的提取效率大于無水乙醇, 且制劑基質(zhì)略溶于環(huán)己烷, 過濾后溶液澄清, 易于操作。

在參考的文獻(xiàn)中大多只是對(duì)冰片中的龍腦進(jìn)行了定量分析, 即以龍腦的量來代表冰片的含量。本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)冰片中的2個(gè)主要成分進(jìn)行了分析, 結(jié)果表明本方法方便、快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好, 可作為十四味連黃燒傷軟膏制劑中冰片含量的質(zhì)量控制方法。

［1］ 國家藥典委員會(huì).中國藥典(一部).北京：中國醫(yī)藥科技出版社, 2010:136.

［2］ 和海龍, 暴梅佳, 梁海春, 等.GC法測定喉疾靈膠囊中龍腦的含量.中國新藥與臨床藥理, 2010, 21(6):649-651.

［3］ 劉吉金, 王曉煒, 黃服喜, 等.氣相色譜法測定菊花揮發(fā)油中桉油精、樟腦、龍腦、醋酸龍腦酯.中草藥, 2006, 37(9):1352-1353.

2014-06-25］

230061 安徽省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院