石榴葉提取物的抑菌殺蟲(chóng)活性

王東方等

摘要：以75%乙醇為溶劑，采用索氏提取法提取石榴（Punica granatun L.）葉的有效成分，并對(duì)該提取物的抑菌作用進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，石榴葉提取物對(duì)白色葡萄球菌抑菌活性明顯，對(duì)黑腹果蠅成蟲(chóng)有明顯的毒害作用，且毒性效果與濃度呈正相關(guān)。石榴葉提取物對(duì)槐蚜防治效果明顯，當(dāng)石榴葉提取物濃度為60 mg/mL時(shí)，24 h后槐蚜校正死亡率達(dá)9672%。石榴葉提取物具有廣譜抑菌殺蟲(chóng)活性。

關(guān)鍵詞：石榴葉；提取物；生物活性

中圖分類(lèi)號(hào)：S482.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0095-02

石榴葉是石榴科植物石榴（Punica granatun L.）的葉，具有收斂止瀉、解毒殺蟲(chóng)等功效。石榴葉中含有20多種化合物，其中鞣質(zhì)能凝固微生物的原生質(zhì)及多種酶，因而對(duì)各種細(xì)菌、真菌有抑制作用[1]。石榴皮對(duì)淋球菌有明顯的抑制作用[2]。關(guān)于石榴葉提取物的抑菌殺蟲(chóng)活性目前尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者采用75%乙醇提取石榴葉的有效成分，并對(duì)其生物活性進(jìn)行研究，旨在為開(kāi)發(fā)利用石榴資源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

石榴葉與槐蚜采自濰坊學(xué)院校園內(nèi)。大腸桿菌（Escherichia coli）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）取自濰坊學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 儀器

儀器：800A型中藥粉碎機(jī)（山東省青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司），re-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-ⅢA型循環(huán)水真空泵（上海一凱儀器設(shè)備有限公司），CJ-1680型超凈工作臺(tái)等。乙醇（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）、二甲基亞砜（DMSO）（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）等。

1.3 方法

1.3.1 石榴葉提取物的制備 清洗并晾干石榴葉，將石榴葉置于烘箱中65 ℃烘干，用中藥粉碎機(jī)粉碎15～30 s。稱(chēng)取100 g粉末置于燒瓶中，加入75%乙醇500 mL，在電磁恒溫?cái)嚢杵魃蠑嚢柚蠓?，回流萃? h。將萃取液真空抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮至干并稱(chēng)重，用10%DMSO溶液將石榴葉提取物配制成濃度為60 mg/mL的溶液備用[3]。

1.3.2 石榴葉提取物的抑菌活性測(cè)定 用無(wú)菌生理鹽水把菌種稀釋成密度為106～107個(gè)/L的懸液，吸取0.2 mL菌懸液均勻涂布于滅菌平板上[4]。用10% DMSO溶液將石榴葉提取物配制成濃度分別為10、20、30、40、50、60 mg/mL的溶液。將直徑約0.4 cm的濾紙圓片置于各濃度溶液中，風(fēng)干后放到涂有菌液的平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h，測(cè)定抑菌圈直徑大小，直徑大于1.00 cm表示有抑菌效果[5]。

1.3.3 石榴葉提取物對(duì)果蠅的毒理活性 采用棉球飼喂法研究石榴葉提取物對(duì)果蠅的影響[6]。將黑腹果蠅成蟲(chóng)用乙醚麻醉，果蠅饑餓5～6 h后飼以不同濃度的供試溶液，每指形管中放1個(gè)0.2 g的脫脂棉球，棉球上蘸有約 2.5 mL 的飼養(yǎng)液，將指形管置于25 ℃、相對(duì)濕度為50%～60%、光照周期為12 h/d的培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)4 d，每12～13 h記錄1次各處理的死亡果蠅數(shù)，4 d后統(tǒng)計(jì)各處理的死亡果蠅數(shù)[7]。

1.3.4 石榴葉提取物對(duì)槐蚜的殺蟲(chóng)活性 采用室內(nèi)葉片法測(cè)定石榴葉提取物的殺蚜活性[8]。以大小適中的健康無(wú)翅成蚜為試蟲(chóng)，將帶蟲(chóng)的葉片修剪成約25頭蟲(chóng)/每片葉，將葉片置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中。用10%DMSO溶液梯度稀釋石榴葉提取物儲(chǔ)存液，并噴灑于各個(gè)試驗(yàn)皿中，以10% DMSO溶液作為對(duì)照，置于溫度為25 ℃、濕度為80%的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計(jì)蚜蟲(chóng)死亡率。死亡率及校正死亡率計(jì)算方法分別見(jiàn)公式（1）與公式（2）。

3 結(jié)論與討論

本研究表明，石榴葉提取物對(duì)白色葡萄球菌抑菌活性明顯，對(duì)黑腹果蠅成蟲(chóng)有明顯的毒害作用，且毒性效果與濃度呈正相關(guān)。石榴葉提取物對(duì)槐蚜防治效果明顯，當(dāng)石榴葉提取物濃度為60 mg/mL時(shí)，24 h后槐蚜校正死亡率達(dá)9672%，與目前使用的化學(xué)農(nóng)藥吡蟲(chóng)啉的防治效果差異不顯著[9]。石榴葉提取物具有廣譜抑菌殺蟲(chóng)活性。

參考文獻(xiàn)：

[1]周建華，胡建平. 石榴生物活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)釀造，2008（14）：20-22.

[2]趙彥超，師寶君，胡兆農(nóng). 杠柳毒素NW的殺蟲(chóng)活性[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí)，2008，45（6）：950-952.

[3]張羽飛，于春麗，張春枝. 乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件[J]. 大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，23（3）：190-193.

[4]周德慶. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986：121-123.

[5]付良臣，孟昭禮，李玉群. 柳樹(shù)中農(nóng)用抑菌活性物的初步研究[J]. 當(dāng)代生態(tài)農(nóng)業(yè)，2005，14（增刊1）：113-114.

[6]王菊鳳，李鵠鳴. 蛹蟲(chóng)草多糖對(duì)果蠅壽命影響的研究[J]. 中國(guó)野生植物資源，2008，27（3）：38-41，48.

[7]楊冬梅，陳 玲，龍 燦，等. 北冬蟲(chóng)夏草提取液對(duì)果蠅繁殖力及壽命的影響[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（11）：87-89.

[8]劉 月，霍 清，張盛宇，等. 臭椿葉提取液對(duì)蚜蟲(chóng)防治效果的研究[J]. 北方園藝，2009（9）：94-95.

[9]王慶忠，王東方，王漢海，等. 番茄莖葉乙醇水提取物對(duì)槐蚜的生物活性研究[J]. 北方園藝，2012（24）：147-149.endprint

摘要：以75%乙醇為溶劑，采用索氏提取法提取石榴（Punica granatun L.）葉的有效成分，并對(duì)該提取物的抑菌作用進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，石榴葉提取物對(duì)白色葡萄球菌抑菌活性明顯，對(duì)黑腹果蠅成蟲(chóng)有明顯的毒害作用，且毒性效果與濃度呈正相關(guān)。石榴葉提取物對(duì)槐蚜防治效果明顯，當(dāng)石榴葉提取物濃度為60 mg/mL時(shí)，24 h后槐蚜校正死亡率達(dá)9672%。石榴葉提取物具有廣譜抑菌殺蟲(chóng)活性。

關(guān)鍵詞：石榴葉；提取物；生物活性

中圖分類(lèi)號(hào)：S482.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0095-02

石榴葉是石榴科植物石榴（Punica granatun L.）的葉，具有收斂止瀉、解毒殺蟲(chóng)等功效。石榴葉中含有20多種化合物，其中鞣質(zhì)能凝固微生物的原生質(zhì)及多種酶，因而對(duì)各種細(xì)菌、真菌有抑制作用[1]。石榴皮對(duì)淋球菌有明顯的抑制作用[2]。關(guān)于石榴葉提取物的抑菌殺蟲(chóng)活性目前尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者采用75%乙醇提取石榴葉的有效成分，并對(duì)其生物活性進(jìn)行研究，旨在為開(kāi)發(fā)利用石榴資源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

石榴葉與槐蚜采自濰坊學(xué)院校園內(nèi)。大腸桿菌（Escherichia coli）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）取自濰坊學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 儀器

儀器：800A型中藥粉碎機(jī)（山東省青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司），re-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-ⅢA型循環(huán)水真空泵（上海一凱儀器設(shè)備有限公司），CJ-1680型超凈工作臺(tái)等。乙醇（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）、二甲基亞砜（DMSO）（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）等。

1.3 方法

1.3.1 石榴葉提取物的制備 清洗并晾干石榴葉，將石榴葉置于烘箱中65 ℃烘干，用中藥粉碎機(jī)粉碎15～30 s。稱(chēng)取100 g粉末置于燒瓶中，加入75%乙醇500 mL，在電磁恒溫?cái)嚢杵魃蠑嚢柚蠓校亓鬏腿? h。將萃取液真空抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮至干并稱(chēng)重，用10%DMSO溶液將石榴葉提取物配制成濃度為60 mg/mL的溶液備用[3]。

1.3.2 石榴葉提取物的抑菌活性測(cè)定 用無(wú)菌生理鹽水把菌種稀釋成密度為106～107個(gè)/L的懸液，吸取0.2 mL菌懸液均勻涂布于滅菌平板上[4]。用10% DMSO溶液將石榴葉提取物配制成濃度分別為10、20、30、40、50、60 mg/mL的溶液。將直徑約0.4 cm的濾紙圓片置于各濃度溶液中，風(fēng)干后放到涂有菌液的平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h，測(cè)定抑菌圈直徑大小，直徑大于1.00 cm表示有抑菌效果[5]。

1.3.3 石榴葉提取物對(duì)果蠅的毒理活性 采用棉球飼喂法研究石榴葉提取物對(duì)果蠅的影響[6]。將黑腹果蠅成蟲(chóng)用乙醚麻醉，果蠅饑餓5～6 h后飼以不同濃度的供試溶液，每指形管中放1個(gè)0.2 g的脫脂棉球，棉球上蘸有約 2.5 mL 的飼養(yǎng)液，將指形管置于25 ℃、相對(duì)濕度為50%～60%、光照周期為12 h/d的培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)4 d，每12～13 h記錄1次各處理的死亡果蠅數(shù)，4 d后統(tǒng)計(jì)各處理的死亡果蠅數(shù)[7]。

1.3.4 石榴葉提取物對(duì)槐蚜的殺蟲(chóng)活性 采用室內(nèi)葉片法測(cè)定石榴葉提取物的殺蚜活性[8]。以大小適中的健康無(wú)翅成蚜為試蟲(chóng)，將帶蟲(chóng)的葉片修剪成約25頭蟲(chóng)/每片葉，將葉片置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中。用10%DMSO溶液梯度稀釋石榴葉提取物儲(chǔ)存液，并噴灑于各個(gè)試驗(yàn)皿中，以10% DMSO溶液作為對(duì)照，置于溫度為25 ℃、濕度為80%的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計(jì)蚜蟲(chóng)死亡率。死亡率及校正死亡率計(jì)算方法分別見(jiàn)公式（1）與公式（2）。

3 結(jié)論與討論

本研究表明，石榴葉提取物對(duì)白色葡萄球菌抑菌活性明顯，對(duì)黑腹果蠅成蟲(chóng)有明顯的毒害作用，且毒性效果與濃度呈正相關(guān)。石榴葉提取物對(duì)槐蚜防治效果明顯，當(dāng)石榴葉提取物濃度為60 mg/mL時(shí)，24 h后槐蚜校正死亡率達(dá)9672%，與目前使用的化學(xué)農(nóng)藥吡蟲(chóng)啉的防治效果差異不顯著[9]。石榴葉提取物具有廣譜抑菌殺蟲(chóng)活性。

參考文獻(xiàn)：

[1]周建華，胡建平. 石榴生物活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)釀造，2008（14）：20-22.

[2]趙彥超，師寶君，胡兆農(nóng). 杠柳毒素NW的殺蟲(chóng)活性[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí)，2008，45（6）：950-952.

[3]張羽飛，于春麗，張春枝. 乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件[J]. 大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，23（3）：190-193.

[4]周德慶. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986：121-123.

[5]付良臣，孟昭禮，李玉群. 柳樹(shù)中農(nóng)用抑菌活性物的初步研究[J]. 當(dāng)代生態(tài)農(nóng)業(yè)，2005，14（增刊1）：113-114.

[6]王菊鳳，李鵠鳴. 蛹蟲(chóng)草多糖對(duì)果蠅壽命影響的研究[J]. 中國(guó)野生植物資源，2008，27（3）：38-41，48.

[7]楊冬梅，陳 玲，龍 燦，等. 北冬蟲(chóng)夏草提取液對(duì)果蠅繁殖力及壽命的影響[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（11）：87-89.

[8]劉 月，霍 清，張盛宇，等. 臭椿葉提取液對(duì)蚜蟲(chóng)防治效果的研究[J]. 北方園藝，2009（9）：94-95.

[9]王慶忠，王東方，王漢海，等. 番茄莖葉乙醇水提取物對(duì)槐蚜的生物活性研究[J]. 北方園藝，2012（24）：147-149.endprint

摘要：以75%乙醇為溶劑，采用索氏提取法提取石榴（Punica granatun L.）葉的有效成分，并對(duì)該提取物的抑菌作用進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，石榴葉提取物對(duì)白色葡萄球菌抑菌活性明顯，對(duì)黑腹果蠅成蟲(chóng)有明顯的毒害作用，且毒性效果與濃度呈正相關(guān)。石榴葉提取物對(duì)槐蚜防治效果明顯，當(dāng)石榴葉提取物濃度為60 mg/mL時(shí)，24 h后槐蚜校正死亡率達(dá)9672%。石榴葉提取物具有廣譜抑菌殺蟲(chóng)活性。

關(guān)鍵詞：石榴葉；提取物；生物活性

中圖分類(lèi)號(hào)：S482.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）03-0095-02

石榴葉是石榴科植物石榴（Punica granatun L.）的葉，具有收斂止瀉、解毒殺蟲(chóng)等功效。石榴葉中含有20多種化合物，其中鞣質(zhì)能凝固微生物的原生質(zhì)及多種酶，因而對(duì)各種細(xì)菌、真菌有抑制作用[1]。石榴皮對(duì)淋球菌有明顯的抑制作用[2]。關(guān)于石榴葉提取物的抑菌殺蟲(chóng)活性目前尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者采用75%乙醇提取石榴葉的有效成分，并對(duì)其生物活性進(jìn)行研究，旨在為開(kāi)發(fā)利用石榴資源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

石榴葉與槐蚜采自濰坊學(xué)院校園內(nèi)。大腸桿菌（Escherichia coli）、白色葡萄球菌（Staphylococcus albus）取自濰坊學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 儀器

儀器：800A型中藥粉碎機(jī)（山東省青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備制造有限公司），re-5299旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-ⅢA型循環(huán)水真空泵（上海一凱儀器設(shè)備有限公司），CJ-1680型超凈工作臺(tái)等。乙醇（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）、二甲基亞砜（DMSO）（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）等。

1.3 方法

1.3.1 石榴葉提取物的制備 清洗并晾干石榴葉，將石榴葉置于烘箱中65 ℃烘干，用中藥粉碎機(jī)粉碎15～30 s。稱(chēng)取100 g粉末置于燒瓶中，加入75%乙醇500 mL，在電磁恒溫?cái)嚢杵魃蠑嚢柚蠓?，回流萃? h。將萃取液真空抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40 ℃濃縮至干并稱(chēng)重，用10%DMSO溶液將石榴葉提取物配制成濃度為60 mg/mL的溶液備用[3]。

1.3.2 石榴葉提取物的抑菌活性測(cè)定 用無(wú)菌生理鹽水把菌種稀釋成密度為106～107個(gè)/L的懸液，吸取0.2 mL菌懸液均勻涂布于滅菌平板上[4]。用10% DMSO溶液將石榴葉提取物配制成濃度分別為10、20、30、40、50、60 mg/mL的溶液。將直徑約0.4 cm的濾紙圓片置于各濃度溶液中，風(fēng)干后放到涂有菌液的平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h，測(cè)定抑菌圈直徑大小，直徑大于1.00 cm表示有抑菌效果[5]。

1.3.3 石榴葉提取物對(duì)果蠅的毒理活性 采用棉球飼喂法研究石榴葉提取物對(duì)果蠅的影響[6]。將黑腹果蠅成蟲(chóng)用乙醚麻醉，果蠅饑餓5～6 h后飼以不同濃度的供試溶液，每指形管中放1個(gè)0.2 g的脫脂棉球，棉球上蘸有約 2.5 mL 的飼養(yǎng)液，將指形管置于25 ℃、相對(duì)濕度為50%～60%、光照周期為12 h/d的培養(yǎng)箱中飼養(yǎng)4 d，每12～13 h記錄1次各處理的死亡果蠅數(shù)，4 d后統(tǒng)計(jì)各處理的死亡果蠅數(shù)[7]。

1.3.4 石榴葉提取物對(duì)槐蚜的殺蟲(chóng)活性 采用室內(nèi)葉片法測(cè)定石榴葉提取物的殺蚜活性[8]。以大小適中的健康無(wú)翅成蚜為試蟲(chóng)，將帶蟲(chóng)的葉片修剪成約25頭蟲(chóng)/每片葉，將葉片置于鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中。用10%DMSO溶液梯度稀釋石榴葉提取物儲(chǔ)存液，并噴灑于各個(gè)試驗(yàn)皿中，以10% DMSO溶液作為對(duì)照，置于溫度為25 ℃、濕度為80%的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后統(tǒng)計(jì)蚜蟲(chóng)死亡率。死亡率及校正死亡率計(jì)算方法分別見(jiàn)公式（1）與公式（2）。

3 結(jié)論與討論

本研究表明，石榴葉提取物對(duì)白色葡萄球菌抑菌活性明顯，對(duì)黑腹果蠅成蟲(chóng)有明顯的毒害作用，且毒性效果與濃度呈正相關(guān)。石榴葉提取物對(duì)槐蚜防治效果明顯，當(dāng)石榴葉提取物濃度為60 mg/mL時(shí)，24 h后槐蚜校正死亡率達(dá)9672%，與目前使用的化學(xué)農(nóng)藥吡蟲(chóng)啉的防治效果差異不顯著[9]。石榴葉提取物具有廣譜抑菌殺蟲(chóng)活性。

參考文獻(xiàn)：

[1]周建華，胡建平. 石榴生物活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)釀造，2008（14）：20-22.

[2]趙彥超，師寶君，胡兆農(nóng). 杠柳毒素NW的殺蟲(chóng)活性[J]. 昆蟲(chóng)知識(shí)，2008，45（6）：950-952.

[3]張羽飛，于春麗，張春枝. 乙醇室溫浸提法提取黃芩總黃酮的工藝條件[J]. 大連輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，23（3）：190-193.

[4]周德慶. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊(cè)[M]. 上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986：121-123.

[5]付良臣，孟昭禮，李玉群. 柳樹(shù)中農(nóng)用抑菌活性物的初步研究[J]. 當(dāng)代生態(tài)農(nóng)業(yè)，2005，14（增刊1）：113-114.

[6]王菊鳳，李鵠鳴. 蛹蟲(chóng)草多糖對(duì)果蠅壽命影響的研究[J]. 中國(guó)野生植物資源，2008，27（3）：38-41，48.

[7]楊冬梅，陳 玲，龍 燦，等. 北冬蟲(chóng)夏草提取液對(duì)果蠅繁殖力及壽命的影響[J]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012（11）：87-89.

[8]劉 月，霍 清，張盛宇，等. 臭椿葉提取液對(duì)蚜蟲(chóng)防治效果的研究[J]. 北方園藝，2009（9）：94-95.

[9]王慶忠，王東方，王漢海，等. 番茄莖葉乙醇水提取物對(duì)槐蚜的生物活性研究[J]. 北方園藝，2012（24）：147-149.endprint