不同提取濃縮干燥工藝對穿心蓮內(nèi)酯類成分的影響

范文成，王 岳，韓月芝，王 健，張國良

（石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050035）

穿心蓮為爵床科植物Andrographis paniculata（Burm．F．）Nees，原產(chǎn)于印度，我國廣東、福建地區(qū)也廣泛栽培，是南方地區(qū)民間治療多種感染性疾病及蛇毒咬傷的常用草藥，同時也是穿心蓮片、消炎利膽片、復(fù)方苦木消炎片的主要原料。穿心蓮藥材在受熱或貯藏過程中其內(nèi)酯類成分會發(fā)生變化，穿心蓮提取浸膏在干燥過程中，其穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯也會發(fā)生轉(zhuǎn)化[1－2]。對于提取、濃縮過程及不同pH的提取溶劑對穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的影響，尚未見詳細的報道。本研究中，通過對同一批藥材采用不同提取、濃縮溫度、時間及不同pH的提取溶劑，旨在找出穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的變化規(guī)律，為優(yōu)選穿心蓮藥材的提取、濃縮工藝提供指導(dǎo)和參考。

1 儀器與材料

Agilent 1100型系列高效液相色譜儀，Agilent自動進樣器，Agilent DAD檢測器。穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為110797－200307，110854－200306）；穿心蓮藥材（安徽井泉飲片公司，由以嶺藥業(yè)高級鑒別師王振江鑒定為穿心蓮）；甲醇（色譜純，F(xiàn)isher公司），水為高純水，提取用乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 含量測定

2．1．1 溶液制備

取樣品適量（約相當(dāng)于藥材2 g），按2010年版《中國藥典（一部）》穿心蓮片含量測定方法制備供試品溶液[3]。精密稱取穿心蓮內(nèi)酯 21．20 mg，脫水穿心蓮內(nèi)酯 20．40 mg，置 10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1．0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（穿心蓮內(nèi)酯質(zhì)量濃度 0．212 g／L，脫水穿心蓮內(nèi)酯濃度0．204 g ／L）。

2．1．2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

流動相：甲醇 －水（60∶40）；色譜柱：ODS C18柱（250 mm ×4．6 mm，10 μm），檢測波長：穿心蓮內(nèi)酯為 225 nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯為254 nm。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計算均應(yīng)不低于2 000。本次分析所使用的穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯混合對照品的質(zhì)量濃度分別為0．103 5 mg／mL和0．102 4 mg／mL。穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液、穿心蓮提取物溶液、陰性對照品溶液色譜圖，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．1．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對照品溶液 2．0，5．0，10．0，15．0，20．0 μL，注入高效液相色譜儀中測定。以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸曲線，穿心蓮內(nèi)酯為Y＝2 017 340X－74 407．5，（r＝0．999 6）；脫水穿心蓮內(nèi)酯為Y＝1 331 742X＋15 216．46（r＝0．999 8）。結(jié)果表明，穿心蓮內(nèi)酯進樣量在0．424～4．24μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，脫水穿心蓮內(nèi)酯進樣量在0．408～4．08μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗：取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液各10 μL，重復(fù)進樣6次，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果的RSD分別為0．8%和 1．1% （n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：分別取同一批的穿心蓮提取物5份，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的RSD分別為1．3%和2．1% （n＝5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的穿心蓮提取物9份（穿心蓮內(nèi)酯含量 22．54 mg ／g，脫水穿心蓮內(nèi)酯 29．32 mg ／g），每份約0．2 g，精密稱定，分別精密加入 2．0，2．5，3．0 mL 穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液（質(zhì)量濃度2．12 g／L）和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液（質(zhì)量濃度2．04 g／L），依法制備供試品溶液并按擬訂色譜條件測定。結(jié)果見表1。

表1 穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)蓮加樣回收試驗結(jié)果（n＝9）

2．2 提取方法考察

提取溫度和時間：取同一批藥材100 g，混合均勻，按2010年版《中國藥典（一部）》穿心蓮片提取工藝提取，溫度分別設(shè)定60，70，80℃，提取時間分別為1，2，3 h，按擬訂方法測定提取液中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，計算轉(zhuǎn)移率。結(jié)果見表2?？梢?，60℃提取效果明顯不如70℃和80℃，分析是溫度低造成提取率低；無論哪個溫度提取，脫水穿心蓮內(nèi)酯提取2 h效果比提取1 h和3 h好；70℃提取3 h與2 h，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量變化不大，80℃提取3 h與提取2 h比較，二者含量均降低，可能是由于提取的溫度高、時間長，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯被部分破壞。取，溫度設(shè)定70℃，以1 mol／L的鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)提取溶劑的 pH 分別為 3，6，9，提取時間分別為 1，2，3 h，取提取液按擬訂方法測定提取液中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果見表4?？梢?，pH為3和6的溶劑提取時，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量轉(zhuǎn)移率無明顯變化；pH為9提取時，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量轉(zhuǎn)移率明顯低于pH為3和6的提取轉(zhuǎn)移率；pH為9提取時，隨提取時間的延長，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量轉(zhuǎn)移率均降低，可能是堿性條件下，長提取時間，對穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯有破壞。

表3 不同濃縮溫度穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率（%）

表2 不同提取溫度和時間穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率（%）

表4 不同pH下穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率（%）

濃縮溫度和時間：取同一批藥材100 g，按70℃提取2 h的條件提取，提取液進行減壓濃縮，溫度分別設(shè)定40，50，60℃，按上述方法測定提取液中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果見表3?？梢?，不同濃縮溫度對脫水穿心蓮內(nèi)酯含量影響不大，考慮60℃減壓濃縮，沸騰劇烈，易跑藥液，選擇55℃減壓濃縮。pH：取同一批藥材 100 g，混合均勻，按2010年版《中國藥典（一部 ）》穿心蓮片提取工藝提

干燥溫度：取同一批藥材100 g，按70℃提取2 h的條件提取，提取液55℃濃縮，干燥溫度分別設(shè)定50，70，90℃，干燥時間為4 h（均已干燥）。按擬訂方法測定提取液中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量。結(jié)果見表5。可見，干燥前后穿心蓮內(nèi)酯含量降低，脫水穿心蓮內(nèi)酯含量升高；干燥溫度越高，穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率下降越明顯，脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率升高越明顯，穿心蓮總內(nèi)酯的轉(zhuǎn)移率隨溫度變化不大，但比干燥前降低約10%。

3 討論

提取過程中，提取溫度過低，提取不完全；溫度過高，時間過長，會破壞穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯，故溫度宜控制在70℃；在40～60℃范圍內(nèi)進行減壓濃縮，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量轉(zhuǎn)移率無明顯變化；堿性條件影響穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量的轉(zhuǎn)移率，而且隨提取時間延長，二者的轉(zhuǎn)移率均下降，因此堿性條件不利于兩成分的提出，且對兩種成分有破壞。干燥對兩種成分轉(zhuǎn)移率影響顯著，溫度越高，穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率下降越明顯，脫水穿心蓮內(nèi)酯升高越明顯，說明干燥過程中，穿心蓮內(nèi)酯向脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)化。同時對調(diào)整濃縮液pH進行了干燥試驗，結(jié)果表明調(diào)整濃縮液pH至4～5再干燥，能有效防止穿心蓮內(nèi)酯向脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)化，同時對兩種內(nèi)酯總和的轉(zhuǎn)移率無明顯影響。通過上述試驗，確定了穿心蓮最佳提取濃縮干燥的工藝為，提取溫度70℃，提取液55℃減壓濃縮，調(diào)濃縮液pH至4～5，然后70℃干燥。

表5 不同干燥溫度穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯轉(zhuǎn)移率（%）

[1]楊東升，陳松光，歐陽惠芳，等．穿心蓮流膏中穿心蓮內(nèi)酯類成分在烘干過程中的變化[J]．中成藥，2003，25（11）：869．

[2]顏玉貞，謝培山．穿心蓮質(zhì)量控制的再評價[J]．中藥新藥與臨床藥理，1998，9（4）：204 － 206．

[3]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京∶中國醫(yī)藥科技出版社，2010：964．