高效液相色譜法測(cè)定芩雙片中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量*

王光函 ，邸子真 ，趙，鄒桂欣 ，呂曉東

（1．遼寧省中醫(yī)藥研究院 遼寧 沈陽(yáng) 110034； 2．遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 遼寧 大連 116600）

芩雙片是由麻黃、大青葉、甘草等9味中藥組方的復(fù)方制劑，具有清熱解毒、化痰止咳、宣肺平喘之功效，用于肺熱壅肺型咳嗽、喘證及感冒后咳嗽。方中麻黃為君藥，起到宣肺、解毒、清熱的作用。本研究中采用高效液相色譜法對(duì)麻黃中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿進(jìn)行含量測(cè)定，為提高和完善本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；FA1004型電子天平（上海上天精密儀器有限公司）；KQ－250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。鹽酸麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)為171241－201007），鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品（批號(hào)為 171237－200807），均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；芩雙片（遼寧省中醫(yī)藥研究院藥學(xué)室自制）；磷酸為色譜純，水為哇哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：PhenomenexSynergi4μPolar－RP 柱（250mm×4．6mm，5 μm）；流動(dòng)相：0．09%磷酸溶液（含 0．04% 三乙胺和 0．02% 二正丁胺）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：1．0 mL ／min；柱溫：室溫。

2．2 溶液制備

取鹽酸麻黃堿對(duì)照品、鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加流動(dòng)相制成每1 mL含鹽酸麻黃堿106 μg、鹽酸偽麻黃堿29．12 μg的混合對(duì)照品溶液。取本品適量，研細(xì)，取 1g，精密稱(chēng)定，精密加入1．44%的磷酸溶液25 mL，稱(chēng)重，超聲處理20 min，放冷，稱(chēng)重，用1．44%的磷酸溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，搖勻，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另取處方中除麻黃以外的其他藥材，按芩雙片處方和制法制備不含麻黃的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性考察：取對(duì)照品溶液5 μL、供試品溶液10 μL及陰性對(duì)照品溶液10 μL，按2．1項(xiàng)下色譜條件，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，在此條件下鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿與其他成分有很好的分離度，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線(xiàn)性關(guān)系考察：分別精密吸取鹽酸麻黃堿（106 μg／mL）和鹽酸偽麻黃堿（29．12 μg ／mL）的混合對(duì)照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以峰面積和進(jìn)樣量進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程，鹽酸麻黃堿為Y＝1 752．6X＋14．12（r＝0．999 9），線(xiàn)性范圍為 0．212～1．272 μg；鹽酸偽麻黃堿：Y＝1 739X＋1．386 7（r＝0．999 8），線(xiàn)性范圍為 0．058 24 ～0．349 44 μg。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一混合對(duì)照品溶液5 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對(duì)照品峰面積的RSD分別為2．37%和1．33%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液 10 μL，分別在 0，2，4，8，24 h時(shí)進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)定各峰面積，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結(jié)果的RSD為1．24%（n＝5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品適量，研細(xì)，取1 g，精密稱(chēng)定，平行6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結(jié)果的RSD為2．23%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品（鹽酸麻黃堿含量1．036mg／g，鹽酸偽麻黃堿含量0．452 mg／g）適量，按供試品制備方法制備待測(cè)溶液按2．1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的回收率。結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1 鹽酸麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

表2 鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測(cè)定

對(duì)5批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，每批樣品平行2份，依法制備供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量之和。結(jié)果批號(hào)為 120901，120902，120902，120904，120905 的樣品中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿總含量分別為 0．605，0．583，0．613，0．642，0．617 mg ／片，平均 0．6 12 mg ／片。

3 討論

供試品溶液制備方法考察時(shí)，曾比較1．44%的磷酸溶液和水為溶劑，另外也對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行考察，采用1．44%的磷酸溶液效果較好，超聲20 min與30 min無(wú)顯著差別，但超聲時(shí)間為60 min時(shí)鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量顯著降低，因此采用1．44%的磷酸溶液為溶劑，時(shí)間為20 min。

曾參照藥典麻黃藥材項(xiàng)下方法[1]，以甲醇－0．09%磷酸溶液（含 0．04%三乙胺和 0．02% 二正丁胺，1．5：98．5）為流動(dòng)相，但供試品中鹽酸偽麻黃堿位置有干擾，將流動(dòng)相進(jìn)行調(diào)整后，結(jié)果分離度良好。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：300 － 301．