黃白通氣顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

宋文惠, 王 康, 李亞男, 劉春梅

(1陜西省人民醫(yī)院藥劑科， 西安 710068； 2西安新通藥物研究有限公司， 西安 710077)

黃白通氣顆粒由大黃、厚樸等4味中藥制成，臨床中主要用于腹部外科術(shù)后排氣、胃腸功能恢復(fù)。其中，君藥大黃所含蒽醌類成分可促進(jìn)腸蠕動(dòng)而導(dǎo)致瀉下，為本制劑主要活性成分[1]。為了有效地控制本制劑質(zhì)量，本研究采用薄層色譜法對方中大黃進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜法對大黃蒽醌類成分中含量較高的大黃素和大黃酚進(jìn)行定量測定，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器島津LC-10ATvp高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外檢測器，LC Solution Lite色譜工作站。賽多利斯 CP225D電子天平。

1.2試藥大黃對照藥材(批號0902-9805，供鑒別用),大黃酸對照品(批號0757-9804，供鑒別用),大黃素對照品(批號0756-200110，供含量測定用),大黃酚對照品(批號796-200107，供含量測定用),以上均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇為色譜純，其余試劑為分析純；硅膠G薄層板(煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司)。

1.3樣品黃白通氣顆粒(批號110501、110502、110503)及缺大黃陰性樣品均由本單位自制。

2 方法與結(jié)果

2.1大黃鑒別[2-3]取本品3批樣品各6 g，分別加乙酸乙酯30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。取缺大黃陰性樣品，同法制成大黃陰性樣品溶液。另取大黃對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏后，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對照不顯斑點(diǎn)，結(jié)果見圖1。

1: 黃白通氣顆粒(批號110501)； 2: 缺大黃陰性樣品； 3: 大黃酸對照品； 4: 大黃對照藥材； 5: 黃白通氣顆粒(批號110502)； 6: 黃白通氣顆粒(批號110503)

2.2大黃素和大黃酚含量測定[4-6]

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取大黃素對照品、大黃酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含大黃素12 μg、大黃酚15 μg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本制劑細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸(35∶1)的混合溶液25 mL，密塞，稱定重量，置80℃水浴中加熱回流1 h，放冷，若瓶壁有黏附物，超聲處理去除，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液溶液5 mL，蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性溶液的制備 取陰性樣品細(xì)粉，采用“2.2.2”項(xiàng)下方法制備成陰性樣品溶液。

2.2.4 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水(85∶15)；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：30 ℃；理論塔板數(shù)以大黃素計(jì)算不得少于3 000。

2.2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 在“2.2.4”色譜條件下檢測，陰性樣品溶液在大黃素和大黃酚對照品色譜峰的相應(yīng)位置上，沒有色譜峰出現(xiàn)，表明本制劑中的其他成分及輔料對大黃素和大黃酚的含量測定不產(chǎn)生干擾，見圖2。

圖2 黃白通氣顆粒高效液相色譜圖

2.2.6 線性實(shí)驗(yàn) 精密稱取大黃素對照品、大黃酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含大黃素25 μg、大黃酚30 μg的混合溶液；分別進(jìn)樣5、8、10、12、15 μL，依法測定，以進(jìn)樣量對峰面積A進(jìn)行回歸，得大黃素線性回歸方程為Y=3 494 173X+57 043，r=0.999 9；大黃酚線性回歸方程為Y=4 322 035X+81 498，r=0.999 9。結(jié)果大黃素在0.125～0.374 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好；大黃酚在0.150～0.451 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，依法測定，結(jié)果大黃素峰面積RSD為0.42%，大黃酚峰面積RSD為0.47%。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取110501批樣品6份，同“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定。結(jié)果大黃素的峰面積/稱樣量的值RSD為1.38%，大黃酚的峰面積/稱樣量的值RSD為1.58%，表明重復(fù)性良好。

2.2.9 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取”2.2.8”項(xiàng)下第一份樣品溶液分別于0、2、4、8、10 h依法測定,結(jié)果大黃素峰面積RSD為0.98%，大黃酚峰面積RSD為1.22%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取110501批樣品6份，每份約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入用甲醇-鹽酸(35∶1)配制的混合對照品溶液5 mL(大黃素濃度為61.2 μg/mL，大黃酚濃度為78.8 μg /mL)，再精密加入甲醇-鹽酸(35∶1)的混合溶液20 mL，同“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定，計(jì)算回收率，結(jié)果大黃素平均回收率為97.9%,RSD=1.31%;大黃酚平均回收率為48.2%,RSD=1.35%,見表1、2。

表1 大黃素加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表2 大黃酚加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.11 樣品含量測定 分別取110501、110502、110503樣品，依照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備，依法測定，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

展開劑選擇時(shí)，首先考查《中國藥典》(2010年版)一部大黃項(xiàng)下鑒別項(xiàng)中選用的石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液，但考慮到石油醚為混合物，且沸點(diǎn)較低，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性，最終選擇環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶3∶0.1)為展開劑。實(shí)驗(yàn)中樣品分別與大黃對照藥材、大黃酸對照品、陰性樣品進(jìn)行對照，結(jié)果陰性沒有干擾，斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，表明本方法可以用于黃白通氣顆粒中大黃的定性鑒別。

流動(dòng)相選擇時(shí)，采用《中國藥典》(2010年版)一部大黃項(xiàng)下含量測定中所用的甲醇-0.1%磷酸水(85∶15)為本品含量測定流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)表明色譜系統(tǒng)分離度好，無干擾，因此確定該流動(dòng)相作為本制劑含量測定的流動(dòng)相。

大黃相關(guān)制劑在含量測定時(shí)，供試品溶液制備多采用甲醇回流提取→鹽酸水解→三氯甲烷提取的方法，考慮到該方法操作步驟多，未知因素較多。本實(shí)驗(yàn)選用操作較為簡便的甲醇-鹽酸回流提取的制備方法[6]，結(jié)果表明該方法重現(xiàn)性好，穩(wěn)定性高，可以用于本制劑的含量測定。

由于樣品僅測定3批，需積累數(shù)據(jù)后確定其含量限度，才可用于本制劑的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

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[6] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010:1115.