五種殺菌劑及其復(fù)配制劑對葡萄黑痘病菌的生物測定

王艷+劉麗萍

摘要：本文采用生長速率法測定了五種殺菌劑對葡萄黑痘病菌（Sphaceloma ampelinum de Bary）的室內(nèi)生物活性。結(jié)果表明：12.5%腈菌唑EC，32.5%烯唑醇WP的EC50分別為 0.0507微升/升、0.0839微升/升 ；20%銀果WP和20%銀泰EC的EC50分別為34.1597微升/升、62.1856微升/升。均高于 50%多菌靈WP的生物活性。根據(jù)“按比例混合法”復(fù)配銀泰和腈菌唑，結(jié)果表明：銀泰和腈菌唑按5∶1比例復(fù)配有明顯增效作用，其共毒系數(shù)大于200。按1∶1，1∶2比例復(fù)配略有增效作用，其共毒系數(shù)大于125。

關(guān)鍵詞：葡萄黑痘病菌； 銀泰；腈菌唑； 復(fù)配制劑

基金資助：黑龍江省自然科學(xué)基金項目（批準號：C201129）

中圖分類號：S436 文獻標(biāo)識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-09-20-2

葡萄黑痘病是由葡萄痂圓孢（Sphaceloma ampelinum de Bary）侵染引起的，是當(dāng)前葡萄生產(chǎn)的重要病害之一。此病分布廣，發(fā)生普遍，我國所有的葡萄產(chǎn)區(qū)幾乎均有發(fā)生，在多雨潮濕季節(jié)發(fā)病尤其嚴重。黑痘病菌常造成葡萄新梢和葉片枯死，果實品質(zhì)變劣，產(chǎn)量下降，在生產(chǎn)上一般造成10%～30%的產(chǎn)量損失。生產(chǎn)上防治葡萄黑痘病的常用藥劑由于長期單一使用造成了葡萄黑痘病菌對其產(chǎn)生了抗藥性，防治效果大大降低。當(dāng)前葡萄生產(chǎn)提倡無公害化，對藥劑提出來更高的要求，不僅要求高效、低毒、低殘留，而且更要與環(huán)境的相容性好，本文采用生長速率法測定五種殺菌劑對葡萄黑痘病菌的室內(nèi)生物活性，其中銀果、銀泰為我國擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的新型仿生農(nóng)藥， 通過銀泰和腈菌唑復(fù)配，篩選出了效果較好的復(fù)配制劑。如果這些復(fù)配制劑田間試驗效果可靠，將為生產(chǎn)上防治葡萄黑痘病提供交替輪換使用的藥劑，具有很好的生產(chǎn)應(yīng)用價值。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試菌株。葡萄黑痘病菌（Sphaceloma ampelinum de Bary）由山東省農(nóng)業(yè)仿生應(yīng)用工程技術(shù)研究中心提供；供試藥劑。20%銀泰EC（山東省農(nóng)業(yè)仿生應(yīng)用工程技術(shù)研究中心提供）；20%銀果WP（山東京蓬藥業(yè)有限公司出品）；12.5%腈菌唑EC（山東聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司生產(chǎn)）；32.5%烯唑醇WP（西安美邦農(nóng)藥有限公司產(chǎn)品）；50%多菌靈WP（威海韓孚生化農(nóng)藥有限公司生產(chǎn)）；培養(yǎng)基。選用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）。

1.2試驗方法

室內(nèi)抑菌試驗，采用生長速率法。

1.2.1室內(nèi)單劑的毒力測定 菌種的培養(yǎng)和菌餅的制備。選皿底平坦，直徑為6厘米的潔凈培養(yǎng)皿，經(jīng)干燥滅菌，在無菌操作條件下，傾入PDA培養(yǎng)基，制成平板，待冷凝后接入供試菌種。置26℃左右恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌絲均勻布滿培養(yǎng)皿時，用直徑0.4厘米的打孔器，在上述菌落邊緣切下帶菌培養(yǎng)基即為菌餅；帶毒培養(yǎng)基的制備。帶毒培養(yǎng)基的制備均在無菌條件下進行。每種藥劑取5～6個濃度梯度，將計算好的一定量藥劑加入40℃左右的PDA培養(yǎng)基中，充分振蕩均勻后，傾入直徑6厘米的滅菌培養(yǎng)皿中。每濃度重復(fù)3～4次，以加入無菌水的作為空白對照；菌餅的移植。待上述含毒培養(yǎng)基冷凝后，用接種針每皿一餅移入不同濃度的帶毒培養(yǎng)基中，置26℃左右恒溫培養(yǎng)箱，待對照長滿時，測量菌落直徑；菌落直徑的測量及計算方法。每個菌落按十字交叉法測量2次，以其平均數(shù)代表菌落的大小。計算抑菌率。抑菌率的計算公式如下：

純生長量（厘米）=菌落的平均直徑-菌餅直徑

抑菌率（%）=（對照純生長量-處理純生長量）/對照純生長量 ×100%

毒力方程的計算。以藥劑的濃度對數(shù)值為x，抑菌率的機率值為y，用Excel軟件計算，求出供試藥劑的直線回歸方程、相關(guān)系數(shù)、有效中濃度EC50 及EC95。

1.2.2 殺菌劑復(fù)配劑的室內(nèi)毒力測定 將銀泰與腈菌唑參照其其毒力測定的劑量梯度配成1∶10 、1∶2、1∶1、5∶1 四種比例的復(fù)配藥劑，參照1.2.1的方法進行復(fù)配劑的室內(nèi)毒力測定。

1.2.3 共毒系數(shù)（CTC）的計算 本試驗采用孫云沛法，即先求出各藥劑的毒力回歸方程，再求得有效中濃度，按下列公式計算：

共毒系數(shù)（CTC）=A的EC50×B的EC50×100 / M的EC50（A的EC50×PB+B的EC50×PA）

式中：A-復(fù)配劑中的一種殺菌劑的EC50

B-復(fù)配劑中的另一種殺菌劑EC50

M-復(fù)配劑的EC50

PA -復(fù)配劑中殺菌劑A的百分含量

PB-復(fù)配劑中殺菌劑B的百分含量

2 結(jié)果與分析

2.1 單劑室內(nèi)毒力測定結(jié)果

用Excel軟件計算各單劑的毒力直線回歸方程、相關(guān)系數(shù)、有效中濃度EC50 及EC95。單劑結(jié)果見（表1）， 由表1可知12.5%腈菌唑EC，32.5%烯唑醇WP的EC50最小，均在0.05微升/升左右；20%銀泰EC，20%銀果WP的EC50較小，為50微升/升左右；50%多菌靈WP的EC50較大，大于100微升/升。

2.2 復(fù)配劑室內(nèi)毒力測定結(jié)果

用Excel軟件計算混劑的毒力直線回歸方程、相關(guān)系數(shù)、有效中濃度EC50及共毒系數(shù)（CTC），結(jié)果見（表2）。

根據(jù)潭福杰對共毒系數(shù)類型的劃分標(biāo)準，CTC≥170為明顯增效，120≤CTC<170為略有增效，70≤CTC<120為相加作用，CTC<70為拮抗作用。由共毒系數(shù)可以看出，復(fù)配劑按5∶1比例混合表現(xiàn)為明顯增效作用。1∶1和1∶2比例復(fù)配抑制葡萄黑痘病菌效果優(yōu)于單劑，建議進行深入的田間試驗后可以推廣使用。

3 討論與結(jié)論

一般情況下作用方式不同的殺菌劑混劑的增效作用程度顯著大于作用方式相同的殺菌劑混劑的增效作用。腈菌唑是具保護和治療活性的內(nèi)吸性三唑類殺菌劑。主要對病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用。銀泰抑菌的作用方式不同于麥角甾醇合成抑制類殺菌劑，在低、中濃度下對病菌細胞電解質(zhì)的滲透和細胞壁麥角甾醇的合成沒有明顯的抑制作用。排除了藥劑對病菌細胞膜通透性和細胞壁麥角甾醇合成的影響。

銀泰是仿生合成的新型農(nóng)用殺菌劑，是抑制多種作物病原真菌的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境友好的新型仿生農(nóng)藥。在防治葡萄黑痘病菌時，本試驗通過大量預(yù)備試驗，首次通過銀泰和腈菌唑的不同比例復(fù)配篩選出高共毒系數(shù)的制劑配方。提高了室內(nèi)生物活性，將有利于降低了生產(chǎn)成本和藥劑對環(huán)境的壓力，延緩葡萄黑痘病菌抗藥性的持續(xù)產(chǎn)生。

已經(jīng)有試驗表明，有些殺菌劑應(yīng)用離體既室內(nèi)生測有效，活體既田間試驗無效。而另外一些殺菌劑室內(nèi)生測抑菌作用不明顯，田間條件下卻有效。這可能是因為室內(nèi)離體條件下測得的僅是藥劑與病原菌相互作用的結(jié)果。而田間試驗中，則主要是藥劑、病原菌和農(nóng)作物三者相互作用得結(jié)果。本試驗篩選的配方尚屬首次，為生產(chǎn)實踐提供理論基礎(chǔ)，深入的田間防治效果研究尚未進行，有待進一步證實。

參考文獻

[1]陳義挺，陸修閩，金光等.美國紅提子葡萄黑痘病的侵染與防治[J].福建果樹，1999，（3）：47.

[2]邱益三，范亦剛，于樹璋.葡萄黑痘病的藥劑防治試驗[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994，（5）：39.

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[8]張龍，，孟昭禮，李健強等.擬銀杏殺菌劑綠帝和銀泰抑制小麥紋枯病菌機制初探 [J] 麥類作物學(xué)報，2003，23（4）：109-112.

[9] 孟昭禮，羅蘭，尚堅等.人工模擬殺菌劑銀泰對10種植物病原菌的室內(nèi)生物測定[J]. 萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報，1999，16（2）：124-126.

[10]李玉平，馮俊濤，邵紅軍等.25種菊科植物提取物對3種植物病原菌得藥效試驗 [J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2003，31（5）：125.

作者簡介：王艷，碩士學(xué)歷，黑龍江大學(xué)農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境學(xué)院，實驗師，研究方向：植物保護和植物營養(yǎng)。

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2014-4-29 14：23：00

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.

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一般情況下作用方式不同的殺菌劑混劑的增效作用程度顯著大于作用方式相同的殺菌劑混劑的增效作用。腈菌唑是具保護和治療活性的內(nèi)吸性三唑類殺菌劑。主要對病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用。銀泰抑菌的作用方式不同于麥角甾醇合成抑制類殺菌劑，在低、中濃度下對病菌細胞電解質(zhì)的滲透和細胞壁麥角甾醇的合成沒有明顯的抑制作用。排除了藥劑對病菌細胞膜通透性和細胞壁麥角甾醇合成的影響。

銀泰是仿生合成的新型農(nóng)用殺菌劑，是抑制多種作物病原真菌的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境友好的新型仿生農(nóng)藥。在防治葡萄黑痘病菌時，本試驗通過大量預(yù)備試驗，首次通過銀泰和腈菌唑的不同比例復(fù)配篩選出高共毒系數(shù)的制劑配方。提高了室內(nèi)生物活性，將有利于降低了生產(chǎn)成本和藥劑對環(huán)境的壓力，延緩葡萄黑痘病菌抗藥性的持續(xù)產(chǎn)生。

已經(jīng)有試驗表明，有些殺菌劑應(yīng)用離體既室內(nèi)生測有效，活體既田間試驗無效。而另外一些殺菌劑室內(nèi)生測抑菌作用不明顯，田間條件下卻有效。這可能是因為室內(nèi)離體條件下測得的僅是藥劑與病原菌相互作用的結(jié)果。而田間試驗中，則主要是藥劑、病原菌和農(nóng)作物三者相互作用得結(jié)果。本試驗篩選的配方尚屬首次，為生產(chǎn)實踐提供理論基礎(chǔ)，深入的田間防治效果研究尚未進行，有待進一步證實。

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[10]李玉平，馮俊濤，邵紅軍等.25種菊科植物提取物對3種植物病原菌得藥效試驗 [J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2003，31（5）：125.

作者簡介：王艷，碩士學(xué)歷，黑龍江大學(xué)農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境學(xué)院，實驗師，研究方向：植物保護和植物營養(yǎng)。

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一般情況下作用方式不同的殺菌劑混劑的增效作用程度顯著大于作用方式相同的殺菌劑混劑的增效作用。腈菌唑是具保護和治療活性的內(nèi)吸性三唑類殺菌劑。主要對病原菌的麥角甾醇的生物合成起抑制作用。銀泰抑菌的作用方式不同于麥角甾醇合成抑制類殺菌劑，在低、中濃度下對病菌細胞電解質(zhì)的滲透和細胞壁麥角甾醇的合成沒有明顯的抑制作用。排除了藥劑對病菌細胞膜通透性和細胞壁麥角甾醇合成的影響。

銀泰是仿生合成的新型農(nóng)用殺菌劑，是抑制多種作物病原真菌的高效、低毒、低殘留、與環(huán)境友好的新型仿生農(nóng)藥。在防治葡萄黑痘病菌時，本試驗通過大量預(yù)備試驗，首次通過銀泰和腈菌唑的不同比例復(fù)配篩選出高共毒系數(shù)的制劑配方。提高了室內(nèi)生物活性，將有利于降低了生產(chǎn)成本和藥劑對環(huán)境的壓力，延緩葡萄黑痘病菌抗藥性的持續(xù)產(chǎn)生。

已經(jīng)有試驗表明，有些殺菌劑應(yīng)用離體既室內(nèi)生測有效，活體既田間試驗無效。而另外一些殺菌劑室內(nèi)生測抑菌作用不明顯，田間條件下卻有效。這可能是因為室內(nèi)離體條件下測得的僅是藥劑與病原菌相互作用的結(jié)果。而田間試驗中，則主要是藥劑、病原菌和農(nóng)作物三者相互作用得結(jié)果。本試驗篩選的配方尚屬首次，為生產(chǎn)實踐提供理論基礎(chǔ)，深入的田間防治效果研究尚未進行，有待進一步證實。

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[9] 孟昭禮，羅蘭，尚堅等.人工模擬殺菌劑銀泰對10種植物病原菌的室內(nèi)生物測定[J]. 萊陽農(nóng)學(xué)院學(xué)報，1999，16（2）：124-126.

[10]李玉平，馮俊濤，邵紅軍等.25種菊科植物提取物對3種植物病原菌得藥效試驗 [J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2003，31（5）：125.

作者簡介：王艷，碩士學(xué)歷，黑龍江大學(xué)農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境學(xué)院，實驗師，研究方向：植物保護和植物營養(yǎng)。

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