測定宮頸癌不同分期及正常宮頸組織MiR—140水平的臨床意義分析

吳燕華　胡崢　鄒文　齊國華

【摘要】 目的：檢測不同組織的MiR基因水平，探討宮頸癌與該基因的關(guān)系。方法：收集2012年1月-2013年6月期間來本院及中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院治療的宮頸疾病患者的臨床資料，共62例，包括32例良性患者（良性組）和30例惡性患者（觀察組），另選擇同期來兩院行健康體檢者30例（對照組），測定其MiR-140水平。結(jié)果：觀察組MiR-140 OD值為（0.82±0.30），高于對照組的（0.53±0.11）和良性組的（0.61±0.15），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分別為（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：宮頸癌患者體內(nèi)MiR-140水平高表達(dá)，且病情越重越明顯。

【關(guān)鍵詞】 MiR-140； 宮頸癌； 疾病分期

宮頸癌是婦科惡性腫瘤較為常見的一種，近年來其發(fā)病有年輕化的趨勢。其中鱗狀上皮癌較為多見。據(jù)估計(jì)，40%的患者可能在確診后9個(gè)月內(nèi)病死，針對持續(xù)性或復(fù)發(fā)性宮頸癌，患者病死率幾乎高達(dá)80%[1-2]。而能否準(zhǔn)確進(jìn)行臨床分期，關(guān)系到治療方案的制定及預(yù)后的預(yù)判，目前臨床分期主要通過專科檢查來確定，本研究通過檢測不同組織的MiR基因水平，探討宮頸癌與該基因的關(guān)系，通過干擾該基因，從而達(dá)到治療宮勁癌的目的，現(xiàn)在將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年1月-2013年6月期間本院及中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院收治的經(jīng)手術(shù)并病理證實(shí)的宮頸疾病患者的臨床資料，共62例，其中良性為32例（良性組），惡性腫瘤為30例（觀察組）；其中鱗癌25例，腺癌4例，腺鱗癌1例；年齡34～71歲，平均（48.0±10.4）歲；患者主要體征為陰道排液、不規(guī)則或接觸性出血。另選擇同期來兩院行健康體檢者30例（對照組）。三組患者的年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有研究對象均知情同意。

1.2 試劑與儀器 由日本TOYOBO公司提供的RT-PCR試劑盒；由美國Invitrogen公司提供的Trizol；紫外分光光度計(jì)。0.5 mol/LEDTA緩沖液（pH 8.0）、PBS緩沖液（pH 7.2～7.4）。RNA酶抑制劑、反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、反轉(zhuǎn)錄酶、PCR反應(yīng)液、Taq DNA聚合酶。

1.3 檢測方法 取宮頸癌組織，良性組織，正常組織的新鮮標(biāo)本，無菌條件下放入50 mL的無菌管中，立即置于液氮罐中。所有患者均經(jīng)病理學(xué)檢驗(yàn)的證實(shí)。用Trizol試劑提取各組細(xì)胞總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測mRNA純度并計(jì)算其濃度，RT-PCR條件為：37 ℃ 60 min，95 ℃ 10 min，cDNA產(chǎn)物置于-20 ℃保存。根據(jù)Genebank序列，設(shè)計(jì)上述壞死相關(guān)因子和對照β-actin的引物序列并合成。cDNA在引物指導(dǎo)下擴(kuò)增PCR產(chǎn)物。獲得的產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳后，在凝膠成像系統(tǒng)上分析相關(guān)因子mRNA的豐度。

1.4 宮頸癌的臨床分期 0期：原位癌（不列入浸潤癌治療效果統(tǒng)計(jì)中）；Ⅰ期：癌局限于宮頸（癌擴(kuò)展到宮體，在分期中不予考慮）；Ⅱ期：癌灶超越宮頸，陰道浸潤未達(dá)下1/3，宮旁浸潤未達(dá)盆壁；Ⅲ期：癌灶超越宮頸，陰道浸潤已達(dá)下1/3，宮旁浸潤已達(dá)盆壁，有腎盂積水或腎無功能者均列入Ⅲ期，但非癌所致的腎盂積水及腎功能者除外；Ⅳ期：癌播散超出真骨盆，或癌浸潤膀骯黏膜及直腸黏膜[3-5]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組MiR-140結(jié)果比較 本文結(jié)果顯示，觀察組MiR-140 OD值為（0.82±0.30），高于對照組的（0.53±0.11）和良性組的（0.61±0.15），比較差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。良性組和對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 不同分期MiR-140結(jié)果比較 本文結(jié)果顯示，TNM分期中Ⅳ期（n=7）、Ⅲ期（n=13）MiR-140 OD值分別為（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均高于Ⅰ期（n=4）（0.60±0.12）和Ⅱ期（n=6）（0.69±0.08），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，適宜的腫瘤標(biāo)志物的選擇對于宮頸癌的輔助診斷、療效判斷等意義重大。MiR-140是micRNAs家族成員之一，可表達(dá)于軟骨中，并調(diào)節(jié)其發(fā)育。MiR-140的特異性表達(dá)及改變可能是致病的主要原因。有學(xué)者研究表明，在利用敲除目標(biāo)基因miR-140制備大鼠疾病模型的過程中，miR-140的缺失和年齡相關(guān)，可能原因是miR-140參與了調(diào)節(jié)軟骨發(fā)育的過程，導(dǎo)致蛋白多糖丟失及關(guān)節(jié)軟骨的纖維化并伴有加重跡象[6-10]。臨床中對于MiR指標(biāo)在宮頸癌患者中的變化研究并不少見，但是對于MiR-140在宮頸癌患者局部組中的表達(dá)研究卻極為少見，因此對其進(jìn)行研究的空間較大。有研究認(rèn)為，MiR-140對于惡性腫瘤細(xì)胞的增殖及分裂，并對細(xì)胞的癌變有一定的影響作用，因此對其在良惡性宮頸疾病患者組織中的表達(dá)差異也有一定的檢測價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，觀察組MiR-140 OD值為（0.82±0.30），高于對照組的（0.53±0.11）和良性組的（0.61±0.15），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。良性組和對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。提示MiR-140可在腫瘤患者中高表達(dá)。本研究采用的分期為FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果顯示，Ⅳ期、Ⅲ期MiR-140 OD值分別為（0.92±0.21）和（0.85±0.23），均高于Ⅰ期和Ⅱ期，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示，病情越重，MiR-140 OD值越高。endprint

綜上所述，宮頸癌患者體內(nèi)MiR-140水平高表達(dá)，且病情越重越明顯。

參考文獻(xiàn)

[1] Lin Y， Chen Z， Kuang F， et al. Evaluation of international federation of gynecology and obstetrics stage ib cervical cancer： comparison of diffusion-weighted and dynamic contrast-enhanced magnetic resonance imaging at 3.0 T[J].J Comput Assist Tomogr， 2013， 37（6）：989-994.

[2] Wang H， Zhu L， Lu W， et al.Clinicopathological risk factors for recurrence after neoadjuvant chemotherapy and radical hysterectomy in cervical cancer[J].World J Surg Oncol， 2013， 25（11）： 301.

[3] Vieira L， Almeida A. The cytology and DNA detection by the Papillo Check（?） test in the diagnosis of human papillomavirus infection[J].Eur J Microbiol Immunol （Bp）， 2013， 3（1）： 61-67.

[4] Tachezy R， Smahelova J， Kaspirkova J， et al. Human papillomavirus type-specific prevalence in the cervical cancer screening population of czech women[J].PLos One， 2013， 12（11）： e79156.

[5] Zhang Y， Hu J， Lu H J， et al. Determination of an optimal standardized uptake value of fluorodeoxyglucose for positron emission tomography imaging to assess pathological volumes of cervical cancer： a prospective study[J].PLos One， 2013， 8（11）： e75159.

[6] Brichacek B， Lagenaur L A， Lee P P， et al. In vivo evaluation of safety and toxicity of a lactobacillus jensenii producing modified cyanovirin-n in a rhesus macaque vaginal challenge model[J].PLos One， 2013， 8（11）： e78817.

[7] Brichacek E.Practice bulletin no 140：management of abnormal cervical cancer screening test results and cervical cancer precursors[J].Obstet Gynecol， 2013， 122（6）： 1338-1366.

[8] Wan G， Xie W， Liu Z， et al. Hypoxia-induced MIR155 is a potent autophagy inducer by targeting multiple players in the MTOR pathway[J]. Autophagy， 2013， 10（1）： 11.

[9]肖慶，黃震，遲秀文，等.液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV、DNA檢測在宮頸癌篩查中的臨床意義[J].現(xiàn)代診斷與治療，2011，22（1）：46-47.

[10]朱文克，冀紅霞，柳婉瓊，等.液基細(xì)胞學(xué)與人乳頭狀瘤病毒檢測及聯(lián)合應(yīng)用預(yù)測宮頸病變的效能[J].中國使用醫(yī)刊，2012，39（18）：122-124.

（收稿日期：2014-01-20） （本文編輯：黃新珍）endprint