納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠催醒作用的研究

李 翠 余劍波 周 汾 陳慧榮 王 曼 宮麗榮 穆 蕊 董樹安

納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠催醒作用的研究

李 翠 余劍波△周 汾 陳慧榮 王 曼 宮麗榮 穆 蕊 董樹安

目的 探討納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠有無催醒作用及其作用機(jī)制。方法30只清潔級昆明種小鼠隨機(jī)分成納洛酮組（NAL組）、阿替美唑組（ATI組）和生理鹽水組（NS組）3組(n=10)。各組小鼠均腹腔注射右美托咪定1 mg/kg，給藥后90 min，各組分別腹腔注射納洛酮2 mg/kg、阿替美唑2 mg/kg與生理鹽水10 mL/kg，于右美托咪定給藥前及給藥后5、15、30、60、90、95、105、120、180 min評估鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛水平，并觀察小鼠蘇醒時(shí)間（以翻正反射恢復(fù)為標(biāo)準(zhǔn)）。結(jié)果各組在右美托咪定給藥5 min后即表現(xiàn)明顯的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛效應(yīng)，約在60 min時(shí)達(dá)到峰效應(yīng)和在180 min恢復(fù)；阿替美唑和納洛酮均可降低右美托咪定的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛效應(yīng)。NAL組在給藥后95、105、120、180 min鎮(zhèn)靜評分均低于NS組，在95、105、120 min鎮(zhèn)靜評分均高于ATI組；NAL組在給藥后95、105、120 min鎮(zhèn)痛評分均低于NS組(均P＜0.05)，與ATI組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ATI組、NAL組小鼠的蘇醒時(shí)間短于NS組[min：(3.0±1.9)vs(5.0± 2.5)vs(91.0±5.7)；F=1 793.368，P＜0.05]，NAL組與ATI組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠具有一定的催醒作用。

麻醉；納洛酮；右美托咪啶；鎮(zhèn)痛；阿替美唑；催醒作用；蘇醒時(shí)間

右美托咪定是一種新型的高選擇性α2-腎上腺素能受體激動劑，可以產(chǎn)生劑量依賴性的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛和抗焦慮作用，還可改善手術(shù)期間的心血管穩(wěn)定性和提供器官保護(hù)作用[1]，在諸多領(lǐng)域的臨床實(shí)踐中顯示出優(yōu)越性和應(yīng)用價(jià)值，但應(yīng)用右美托咪定長時(shí)間鎮(zhèn)靜及全麻術(shù)后患者的意識恢復(fù)時(shí)間較長。任何一種麻醉藥的應(yīng)用都需要尋找到一種有效的拮抗藥來作為安全保障，阿替美唑是一種具有高度選擇性的α2-腎上腺素能受體拮抗劑，但其尚未應(yīng)用于臨床，需要更多的臨床安全性研究。納洛酮是一種安全而有效的全麻催醒藥，是阿片受體競爭性拮抗劑，有文獻(xiàn)表明納洛酮對安定、氯胺酮等有一定拮抗作用[2]，但有關(guān)其對右美托咪定有無拮抗作用的研究較少，本研究旨在觀察納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠有無催醒作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組 清潔級昆明種小鼠30只，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，采用隨機(jī)數(shù)字表法分成生理鹽水組（NS組）、阿替美唑組（ATI組）和納洛酮組（NAL組）3組，每組10只。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 納洛酮由重慶萊美藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)（批號：1007012）；右美托咪定由江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)（批號：11031034）；阿替美唑由南京博鴻電子材料開發(fā)有限公司生產(chǎn)（批號：104054-27-5）；生理鹽水由廣東大冢制藥有限公司生產(chǎn)（批號：1110243）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 通過動物面罩吸入純氧，小鼠腹腔注射右美托咪定1 mg/kg[3]，在右美托咪定給藥后90 min各組再分別腹腔注射生理鹽水10 mL/kg、阿替美唑2 mg/kg[3]和納洛酮2 mg/kg[4]，動態(tài)觀察小鼠的行為學(xué)表現(xiàn)，于右美托咪定給藥前（基礎(chǔ)值）、給藥后5、15、30、60、90、95、105、120和180 min時(shí)分別進(jìn)行鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛評分。評分標(biāo)準(zhǔn)參照Granholm等[5]并作適當(dāng)調(diào)整，鎮(zhèn)靜評分包括自主體位、對聲音刺激的反應(yīng)、下頜及舌張力3個(gè)方面，標(biāo)準(zhǔn)如下，自主體位：不能站立計(jì)4分；躺下，站立困難，計(jì)3分；躺下，能夠困倦站立，計(jì)1分；正常，計(jì)0分。對聲音刺激的反應(yīng)（敲打不銹鋼手術(shù)臺面）：對聲響刺激無反應(yīng)，計(jì)3分；表現(xiàn)耳動、睜眼，計(jì)2分；表現(xiàn)耳動、睜眼、肢體瞬間抽動，計(jì)l分；有抬頭掙扎表現(xiàn)，計(jì)0分。下頜及舌張力：牽拉舌，可輕易拉出口腔，且不能自主復(fù)位，計(jì)3分；牽拉舌，可拉出口腔，但能自主復(fù)位計(jì)2分；牽拉舌時(shí)有明顯阻力，計(jì)1分；牽拉時(shí)逃避并搖頭，計(jì)0分。鎮(zhèn)痛評分：鉗夾鼠爪，痛覺完全消失，計(jì)3分；痛覺明顯降低，計(jì)2分；痛覺輕度障礙，計(jì)1分；痛覺明顯與給藥前相同，計(jì)0分。

觀察小鼠翻正反射消失持續(xù)時(shí)間（蘇醒時(shí)間）。小鼠連續(xù)3次仰臥后5 s不能恢復(fù)站立為翻正反射消失，連續(xù)3次仰臥后恢復(fù)站立為翻正反射恢復(fù)。

2 結(jié)果

2.1 納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠鎮(zhèn)靜評分的影響 右美托咪定給藥5 min后各組鎮(zhèn)靜評分較給藥前均明顯增加(P＜0.05)，且在給藥后大約60 min各組達(dá)到最大鎮(zhèn)靜效應(yīng)。給藥后90 min各組小鼠分別給予生理鹽水、阿替美唑及納洛酮腹腔注射，在給藥后120、180 min ATI組鎮(zhèn)靜評分與給藥前基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在180 min NAL組鎮(zhèn)靜評分與給藥前基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NAL組在給藥后95、105、120、180 min鎮(zhèn)靜評分均低于NS組，在95、105、120 min鎮(zhèn)靜評分均高于ATI組(均P＜0.05)。見表1。

2.2 納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠鎮(zhèn)痛評分的影響 右美托咪定給藥5 min后各組鎮(zhèn)痛評分較給藥前均明顯增加(P＜0.05)，且在給藥后大約60 min各組達(dá)到最大鎮(zhèn)痛效應(yīng)，給藥后90 min各組小鼠分別給予生理鹽水、阿替美唑及納洛酮腹腔注射，在給藥后180 min NS組鎮(zhèn)痛評分與給藥前基礎(chǔ)值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在105、120、180 min ATI組和NAL組鎮(zhèn)痛評分與給藥前基礎(chǔ)值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NAL組在給藥后95、105、120 min鎮(zhèn)痛評分均低于NS組(P＜0.05)，與ATI組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

2.3 納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠蘇醒時(shí)間的影響 納洛酮、阿替美唑均能明顯縮短右美托咪定麻醉小鼠的蘇醒時(shí)間[分別是（5.0±2.5）、（3.0±1.9）min]，且與NS組（min:91.0±5.7）比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1 793.368,P＜0.05)，NAL組與ATI組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Tab.1 Sedative scores of mice in each group表1 各組鎮(zhèn)靜評分的變化 （n=10，分，±s）

Tab.1 Sedative scores of mice in each group表1 各組鎮(zhèn)靜評分的變化 （n=10，分，±s）

＊P＜0.05；a與基礎(chǔ)值比較，P＜0.05；表2同

組別NS組(1) ATI組(2) NAL組(3) F基礎(chǔ)值5 min 5.0±1.0a4.6±0.7a4.7±0.5a0.709 15 min 7.6±0.7a7.3±0.5a7.2±0.4a1.444 30 min 7.5±0.7a7.6±0.5a8.0±0.8a1.465 60 min 8.2±0.4a8.0±0.5a8.3±0.5a1.105 90 min 8.1±0.7a7.6±0.5a7.7±0.5a2.011 F 149.969＊415.622＊419.694＊P(1)∶(3) P(2)∶(3) 000-------------95 min 7.7±0.8a2.5±0.5a4.5±0.5a175.810＊＜0.001 ＜0.001 105 min 6.1±0.6a1.3±0.5a2.3±0.5a243.887＊＜0.001 ＜0.001 120 min 5.0±0.7a0.6±0.5 1.4±0.5a168.545＊＜0.001 0.012 180 min 2.9±1.0a0.5±0.7 0.5±0.5 32.604＊＜0.001 1.000

Tab.2 Analgesic scores of mice in each group表2 各組鎮(zhèn)痛評分的變化 （n=10，分，±s）

Tab.2 Analgesic scores of mice in each group表2 各組鎮(zhèn)痛評分的變化 （n=10，分，±s）

組別NS組(1) ATI組(2) NAL組(3) F基礎(chǔ)值5 min 1.2±0.4a1.2±0.4a1.5±0.5a1.421 15 min 1.8±0.4a1.9±0.6a2.0±0.5a0.415 30 min 2.1±0.3a2.1±0.6a2.1±0.3a＜0.001 60 min 2.5±0.5a2.5±0.5a2.5±0.5a＜0.001 90 min 2.5±0.5a2.3±0.5a2.3±0.5a0.537 180 min 0.6±0.5 0.2±0.6 0.1±0.3 2.739 F 30.723＊33.060＊52.105＊P(1)∶(3) P(2)∶(3) 000-------------95 min 2.4±0.5a0.8±0.6a0.9±0.3a31.435＊＜0.001 1.000 105 min 2.0±0.7a0.5±0.5 0.3±0.5 27.105＊＜0.001 1.000 120 min 1.5±0.5a0.3±0.5 0.3±0.5 19.343＊＜0.001 1.000 --

3 討論

本研究中動物在注射右美托咪定后約60 min鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛達(dá)到峰效應(yīng)，約180 min自然恢復(fù)，選擇在注射右美托咪定后90 min時(shí)給藥便于觀察，本研究觀察右美托咪定鎮(zhèn)靜和鎮(zhèn)痛的強(qiáng)度和作用時(shí)間與前期研究一致[5]。右美托咪定是一種高選擇性α2-腎上腺素能受體激動劑，通過激動α2-腎上腺素能受體而產(chǎn)生鎮(zhèn)靜、抗焦慮和鎮(zhèn)痛等效應(yīng)，而阿替美唑是一種具有高度選擇性的α2-腎上腺素能拮抗劑，可用來拮抗由α2-腎上腺素能激動劑所產(chǎn)生的鎮(zhèn)靜、催眠、鎮(zhèn)痛及其他作用。Granholm等[5]研究表明阿替美唑可有效拮抗右美托咪定的作用，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明阿替美唑在給藥后可明顯降低鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛水平并顯著縮短蘇醒時(shí)間，提示其對用右美托咪定麻醉小鼠有明顯的催醒作用。

本研究結(jié)果顯示，納洛酮可降低右美托咪定麻醉小鼠的鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛評分，且明顯縮短小鼠的蘇醒時(shí)間，提示納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠具有一定的催醒作用。納洛酮雖然也可縮短翻正反射消失持續(xù)時(shí)間，但其并非α2受體的特異拮抗藥。有研究表明使用右美托咪定患者血漿β-內(nèi)啡肽在早期具有一定增高反應(yīng)，右美托咪定發(fā)揮作用可能通過促進(jìn)阿片肽的釋放而間接與阿片受體相關(guān)[6]。納洛酮是阿片受體競爭性拮抗劑，可有效地拮抗阿片樣物質(zhì)和內(nèi)源性阿片肽，能迅速通過血腦屏障，拮抗內(nèi)啡肽所介導(dǎo)的中樞抑制作用，促進(jìn)蘇醒。另有研究表明右美托咪定與嗎啡合用可產(chǎn)生協(xié)同作用，從而減少嗎啡的使用量[7]，Riedl等[8]研究認(rèn)為，α2受體和阿片受體在傷害性感覺初級傳入神經(jīng)纖維上存在共表達(dá)區(qū)域，這兩種受體在皮膚外周神經(jīng)末稍和脊髓背角淺層均有廣泛共區(qū)，且與P物質(zhì)所在區(qū)域相同。雖作用于不同的受體，納洛酮對右美托咪定的催醒作用，可能與α2受體和阿片受體激活之后的某種共同的生理、生化機(jī)制相關(guān)。另一方面，右美托咪定作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)突觸后膜α2受體，活化抑制交感神經(jīng)活性,避免交感神經(jīng)的過度興奮[9-10]，而使用納洛酮后痛覺敏感增加而產(chǎn)生交感神經(jīng)興奮現(xiàn)象。

綜上所述，納洛酮對右美托咪定麻醉小鼠具有一定的催醒作用，納洛酮可嘗試用于臨床拮抗右美托咪定，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1]Bajwa S,Kulshrestha A.Dexmedetomidine:an adjuvant making large inroads into clinical practice[J].Ann Med Health Sci Res, 2013,3(4):475-483.

[2]Pacheco Dda F,Romero TR,Duarte ID.Central antinociception induced by ketamine is mediated by endogenous opioids and muand delta-opioid receptors[J].Brain Res,2014,1562:69-75.

[3]Cruz JI,Loste JM,Burzaco OH.Observations on the use of medetomidine/ketamine and its reversal with atipamezole for chemical restraint in the mouse[J].Lab Anim,1998,32(1):18-22.

[4]Gupta R,Gupta LK,Bhattacharya SK.Naloxone blocks the beneficial effects of aqueous extract of Murraya koenigii(L.)Spreng leaves in models of pain[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci,2013,17 (13):1748-1751.

[5]Granholm M,McKusick BC,Westerholm FC,et al.Evaluation of the clinical efficacy and safety of dexmedetomidine or medetomidine in cats and their reversal with atipamezole[J].Vet Anaesth Analg,2006,33(4):214-223.

[6]Hao J,Luo JS,Weng Q,et al.Effects of dexmedetomidine on sedation and beta-endorphin in traumatic brain injury:a comparative study with propofol[J].Zhonghua Wei Zhong Bing Ji Jiu Yi Xue, 2013,25(6):373-376.

[7]Kabalak A,Ekmekcioglu E,Ceylan A,et al.The synergistic antinociceptive interactions of morphine and dexmedetomidine in rats with nerve-ligation injury[J].Hippokratia,2013,17(4):326-331.

[8]Riedl MS,Schnell SA,Overland AC,et al.Coexpression of alpha 2A-adrenergic and delta-opioid receptors in substance P-containing terminals in rat dorsal horn[J].J Comp Neurol,2009,513(4): 385-398.doi:10.1002/cne.21982.

[9]Cho JS,Kim SH,Shin S,et al.Effects of Dexmedetomidine on Changes in Heart Rate Variability and Hemodynamics During Tracheal Intubation[J].Am J Ther,2014 May 14.[Epub ahead of print]

[10]陳君,佟小光.右美托咪啶聯(lián)合全身麻醉在頸動脈內(nèi)膜切除術(shù)中的應(yīng)用[J].中國現(xiàn)代神經(jīng)疾病雜志,2014,14(2):87-92.

（2014-05-01收稿 2014-07-18修回）

（本文編輯 陳麗潔）

Awaken Effect of Naloxon in Dexmedetomidine-Anesthetized Mice

LI Cui,YU Jianbo△,ZHOU Fen,CHEN Huirong,WANG Man,GONG Lirong,MU Rui,DONG Shuan
Deportment of Anesthesiology，Tianjin Nankai Hospital，Tianjin 300100，China
△

E-mail：yujianbo11@126.com

ObjectiveTo investigate the awaken effect of naloxon on dexmedetomidine anesthetized mice and its mechanism.MethodsThirty Kunming mice of clean grade were randomly divided into 3 groups which included NAL group(Naloxon group),ATI group（Atipamezole group）and NS group(Normal Saline group).All groups were given dexmedetomidine 1 mg·kg-1intraperitoneally.Naloxon 2 mg·kg-1,atipamezole 2 mg·kg-1and normal saline 10 mL·kg-1were randomly given intraperitoneally to the NAL,ATI and NS group respectively 90 minutes after dexmedetomidine administration. At timepoints prior to dexmedetomidine administration and 5,15,30,60,90,95,105,120,180 minutes after it,the sedative and analgesic effects besides recovery time(based on restore of righting reflex loss)were assessed.ResultsSedation and analgesia effects became apparent within 5 minutes,and peaked at approximately 60 minutes then spontaneously recovered at 180 minutes after injection of dexmedetomidine.The sedative and analgesic effects were reduced in both ATI and NAL groups.Compared with ATI group,the sedation scores were higher at 95,105 and 120 minutes after dexmedetomidine administration than those in NAL group(P＜0.05)but the scores were not statistically significant at 180 minutes between these two groups.Compared with NS group,the sedation scores were lower at time points of 95,105,120 and 180 minutes than those in NAL group(P＞0.05).The analgesic scores were not statistically significant at time points of 95,105,120 and 180 minutes between NAL group and ATI group,but they were lower in NAL group compared with NS group at timepoints of 95,105 and 120 minutes(P＞0.05).The recovery time in ATI and NAL group were shorter than that in NS group(F=1 793.368,P＜0.05),but it showed no statistical difference between ATI group and NAL group(P＞0.05).ConclusionNaloxone had a certain awaken effect on dexmedetomidine anesthetized mice.

anesthesia;naloxone;dexmedetomidine;analgesia;atipamezole;awaken effect;recovery time

R614.2

A

10.3969/j.issn.0253-9896.2014.12.009

天津醫(yī)學(xué)會麻醉學(xué)分會中青年科研培育基金項(xiàng)目

天津市南開醫(yī)院麻醉科（郵編300100）

△通訊作者 E-mail：yujianbo11@126.com