醫(yī)學(xué)專(zhuān)科開(kāi)設(shè)瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的教學(xué)體會(huì)

周俊萍，龔 蕾

（曲靖醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校 生物化學(xué)教研室，云南 曲靖 655000）

醫(yī)學(xué)專(zhuān)科開(kāi)設(shè)瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的教學(xué)體會(huì)

周俊萍，龔 蕾

（曲靖醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校 生物化學(xué)教研室，云南 曲靖 655000）

瓊脂糖凝膠電泳是生物化學(xué)中常用的分離技術(shù)之一，在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究及分析中有廣泛的應(yīng)用。本文結(jié)合醫(yī)學(xué)專(zhuān)科院校瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)的開(kāi)設(shè)，對(duì)從實(shí)驗(yàn)前的各項(xiàng)準(zhǔn)備工作到學(xué)生實(shí)驗(yàn)的教學(xué)過(guò)程及實(shí)驗(yàn)課后的思考等方面進(jìn)行分析和總結(jié)，以期為今后的實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革提供參考。

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)；瓊脂糖凝膠電泳；教學(xué)體會(huì)

瓊脂糖凝膠電泳是核酸分析常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，是核酸研究工作中不可缺少的重要手段，廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)理論研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、醫(yī)學(xué)衛(wèi)生、工業(yè)生產(chǎn)等許多領(lǐng)域，在生物化學(xué)和分子生物學(xué)的教學(xué)和科研中具有重要作用。[1-2]我校自2009年為醫(yī)學(xué)專(zhuān)科學(xué)生增開(kāi)該實(shí)驗(yàn)以來(lái)，受到廣大學(xué)生的歡迎，收到良好的教學(xué)效果。本實(shí)驗(yàn)在實(shí)際的操作過(guò)程中由于實(shí)驗(yàn)試劑、耗材準(zhǔn)備比較復(fù)雜，微小的疏忽都會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗，在長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備和教學(xué)過(guò)程中，我們總結(jié)了一些教學(xué)經(jīng)驗(yàn)和教學(xué)體會(huì)。

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料的準(zhǔn)備。待測(cè)DNA，瓊脂糖，電泳儀，電泳槽，紫外透射反射儀，酒精燈，100ml燒杯，微量移液器，三羥甲基氨基甲烷，鹽酸，醋酸鈉，EDTA，瓊脂糖，溴酚藍(lán)，溴化乙錠。

二、實(shí)驗(yàn)課中

1.瓊脂糖膠的制備。本實(shí)驗(yàn)配制的是質(zhì)量濃度為1%的50mL凝膠。在電爐上將膠熔至清澈透明的溶液狀，冷卻到60℃左右，加染料GV（GoldView），每100ml膠加5pl，搖勻，倒入事先裝好的水平電泳槽內(nèi)，梳子根據(jù)樣品量選用。凝膠厚度一般為0.3～0.5cm。待凝膠完全凝固后（于室溫放置30～45min），在梳子齒附近加入少量電泳緩沖液，然后緩慢輕輕地向上拔掉梳子，將凝膠放入電泳槽中。

2.點(diǎn)樣。點(diǎn)樣量要根據(jù)點(diǎn)樣孔大小和樣品濃度確定，一般上樣體積約5～10uL。點(diǎn)樣前，樣品需按照配比添加上樣緩沖液，吹打均勻后，移液器吸取樣品，垂直于點(diǎn)樣孔，用另一只手幫助固定移液器下端，移液器槍頭尖端進(jìn)入點(diǎn)樣孔即可將樣品注入孔內(nèi)，注意不可將槍頭尖端插至孔底，并選擇其他點(diǎn)樣孔點(diǎn)上適合的DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)（DNA Marker）。所謂適合是指樣品DNA分子量大小應(yīng)基本在DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)。

3.電泳。將電泳儀的正極與電泳槽的正極相連，負(fù)極與負(fù)極相連。核酸帶負(fù)電荷，從負(fù)極向正極移動(dòng)，膠的點(diǎn)樣孔一端應(yīng)放在電泳槽的負(fù)極接線一端。電泳槽中電泳緩沖液與制膠用電泳緩沖液應(yīng)相同，電泳緩沖液（1xTBE），使其恰好沒(méi)過(guò)膠面約lmm。電泳緩沖液太多則電流加大，凝膠發(fā)熱，設(shè)置好電源，一般采用恒壓電源，電壓選擇為5V/cm左右（長(zhǎng)度以兩個(gè)電極之間的距離計(jì)算）。電泳時(shí)間一般為30～60min，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要也可做適當(dāng)調(diào)整。電壓增高，電泳時(shí)間縮短，核酸條帶相對(duì)來(lái)說(shuō)不夠整齊，不夠清晰；相反，電壓降低，電泳時(shí)間較長(zhǎng)，核酸條帶整齊清晰。將電泳后的凝膠放在紫外透視儀中觀察結(jié)果，對(duì)照DNA marker分析條帶、得出結(jié)論并分析實(shí)驗(yàn)成敗的原因。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖示

4.重視實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，指導(dǎo)填寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告。生化實(shí)驗(yàn)的目的主要是加強(qiáng)理解和驗(yàn)證相關(guān)理論，通過(guò)實(shí)驗(yàn)操作獲得和提高實(shí)驗(yàn)技能，培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力。通過(guò)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析提高綜合分析的能力，實(shí)驗(yàn)報(bào)告在一定程度上起到檢驗(yàn)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)原理、目的、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的理解和分析的能力。在過(guò)去的實(shí)驗(yàn)報(bào)告中，學(xué)生由于不知道如何最終來(lái)書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，所以盲目抄書(shū)或者相互抄襲的現(xiàn)象很多，實(shí)驗(yàn)結(jié)論往往簡(jiǎn)單了事，這樣根本無(wú)法達(dá)到實(shí)驗(yàn)的預(yù)先效果。有效地利用實(shí)驗(yàn)課后的十分鐘時(shí)間給學(xué)生講解如何書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告，可以在一定程度上杜絕相互抄襲的現(xiàn)象，既培養(yǎng)學(xué)生養(yǎng)成嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的學(xué)風(fēng)[3-5]，又真正地讓學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中得到收獲。

三、實(shí)驗(yàn)課后

1.認(rèn)真批改實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)，及時(shí)返還學(xué)生。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，教師始終要求學(xué)生在書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告時(shí)如實(shí)反映實(shí)驗(yàn)結(jié)果，不得抄襲或者編寫(xiě)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這樣教師在批改實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)時(shí)才能更好地發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)失敗或者出現(xiàn)偏差的原因，并在報(bào)告冊(cè)中一一進(jìn)行修改；同時(shí)，批閱實(shí)驗(yàn)報(bào)告冊(cè)還能幫助教師發(fā)現(xiàn)一些在以往教學(xué)中容易忽視的問(wèn)題，對(duì)于完善今后的實(shí)驗(yàn)教學(xué)有著深刻的意義。其次，批閱后的報(bào)告冊(cè)及時(shí)返還學(xué)生，可以幫助學(xué)生有效地回憶起實(shí)驗(yàn)中操作不當(dāng)?shù)牡胤骄烤钩霈F(xiàn)在何處，避免在今后的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中再犯類(lèi)似的錯(cuò)誤。

2.課后思考。在參考了其他醫(yī)學(xué)院校的實(shí)驗(yàn)教程，我校瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)課的成功開(kāi)設(shè)，是我校生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)改革的一大舉措。隨著分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)在醫(yī)學(xué)研究中的地位不斷增強(qiáng)，開(kāi)展一定比例的生化分子實(shí)驗(yàn)無(wú)疑將為學(xué)生今后開(kāi)展設(shè)計(jì)性、綜合性實(shí)驗(yàn)奠定下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)[6-11]。

總之，只有不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，探索適合醫(yī)學(xué)專(zhuān)科生物化學(xué)的新實(shí)驗(yàn)，增加學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性、主動(dòng)性，才能培養(yǎng)出面向2l世紀(jì)具有綜合能力和創(chuàng)新意識(shí)的高素質(zhì)醫(yī)學(xué)人才。

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G642.0

A

1674-9324（2014）11-0260-02

周俊萍（1978-），女，云南昆明人，講師，研究方向：生物化學(xué)及分子生物學(xué)。