泥東風(fēng)螺4個(gè)群體遺傳多樣性的AFLP分析

秦溱，王曉清*，曾志南,*，朱丹麗，熊鋼,2，巫旗生，寧岳

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南生物機(jī)電技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410127；3.福建水產(chǎn)科學(xué)研究所，福建 廈門(mén) 361000)

泥東風(fēng)螺4個(gè)群體遺傳多樣性的AFLP分析

秦溱1，王曉清1*，曾志南1,3*，朱丹麗1，熊鋼1,2，巫旗生3，寧岳3

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128；2.湖南生物機(jī)電技術(shù)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410127；3.福建水產(chǎn)科學(xué)研究所，福建 廈門(mén) 361000)

利用AFLP分子標(biāo)記方法對(duì)4個(gè)群體(福建連江野生、連江養(yǎng)殖、長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖、廣西野生)的泥東風(fēng)螺進(jìn)行遺傳多樣性分析。結(jié)果：用11對(duì)引物共擴(kuò)增出908條有效片段，其中684條(75.33%)為多態(tài)性片段，224條片段(24.67%)為4個(gè)群體所共有；遺傳多樣性指數(shù)分析顯示，4個(gè)群體的有效等位基因數(shù)、平均等位基因數(shù)、Shannon’s多樣性指數(shù)和平均雜合度依次為1.500 6、1.974 0、0.464 7、0.303 4，Nei’s遺傳距離為0.128 4～0.180 6，遺傳相似系數(shù)為0.834 8～0.879 5，表明4個(gè)泥東風(fēng)螺群體具有較為豐富的遺傳多樣性，且群體間具有較高的遺傳相似性；分子方差分析(AMOVA)結(jié)果顯示，4個(gè)群體中 83.49%的變異來(lái)源于群體內(nèi)，14.65%的變異來(lái)源于地區(qū)間，而群體間的遺傳變異僅為1.86%，且4個(gè)群體間的遺傳分化(GST)為0.195 4，基因流(NM)為2.058 6，說(shuō)明群體間的基因交流水平較低；UPGMA聚類(lèi)分析和主坐標(biāo)(PCA)分析結(jié)果表明，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體遺傳距離最近，而連江野生群體與其他3個(gè)群體的遺傳距離最遠(yuǎn)。

泥東風(fēng)螺；遺傳多樣性；遺傳距離；擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)

泥東風(fēng)螺(BabyLonia lutosa (Lamer))[1]，俗稱“黃螺”，屬海洋底棲腹足綱(Gastropoda)、新腹足目(Neogastropoda)、蛾螺科(Buccinidae)、東風(fēng)螺屬(BabyLonia)成員，是熱帶、亞熱帶貝類(lèi)品種。泥東風(fēng)螺在中國(guó)主要分布于福建、海南、廣東、廣西等地，是中國(guó)沿海重要的經(jīng)濟(jì)軟體動(dòng)物[2–3]。泥東風(fēng)螺不僅生長(zhǎng)速度快、肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)成分含量高，還含有人體所必須的氨基酸和稀有元素，易被人體消化吸收，屬于健康食品，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)主要是通過(guò)分析限制性內(nèi)切酶不同的片段長(zhǎng)度，進(jìn)而檢測(cè)基因組DNA多態(tài)性的一種分子標(biāo)記技術(shù)。目前，AFLP標(biāo)記由于具有多態(tài)性豐富、信息量多等優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛用于黃姑魚(yú)、棘頭梅童、華貴櫛孔扇貝、文蛤[4–7]等海洋動(dòng)物群體遺傳多樣性及各類(lèi)遺傳變異的研究。近年來(lái)，對(duì)泥東風(fēng)螺捕撈強(qiáng)度的增大導(dǎo)致其自然資源嚴(yán)重降低。本研究首次利用AFLP技術(shù)對(duì)中國(guó)東南沿海泥東風(fēng)螺 4個(gè)群體進(jìn)行遺傳多樣性分析，旨在為泥東風(fēng)螺種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)、保護(hù)及合理增殖放流提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 供試螺

2013年3—7月，從福建的長(zhǎng)樂(lè)、連江和廣西隨機(jī)采集的4個(gè)泥東風(fēng)螺群體，包括2個(gè)野生群體(連江、廣西)和2個(gè)養(yǎng)殖群體(連江、長(zhǎng)樂(lè))，泥東風(fēng)螺共計(jì)120個(gè)。

1.1.2 試 劑

Mse I酶、EcoRI酶、T4連接酶及Taq DNA聚合酶均購(gòu)自NEB公司。

1.1.3 引 物

AFLP分析所用引物序列見(jiàn)表 1。引物均由上海英駿公司合成。

1.2 方 法

1.2.1 基因組DNA的提取

采用鹽析法[8]分別提取120個(gè)泥東風(fēng)螺的總DNA。用DNA檢測(cè)儀檢測(cè)DNA的濃度和純度。將吸光比值(A260 nm/A280 nm)在1.8～2.0的樣品DNA分裝，保存于–20 ℃冰箱，備用。

表1 試驗(yàn)所用接頭和引物組合Table 1 AFLP primers and adapters used in the experiment

1.2.2 AFLP分析

1) 酶切。酶切反應(yīng)體系(20 μL)：10×(EcoRI) Buffer 2.0 μL，100×BSA 0.2 μL，20U/μL EcoR I 0.2 μL，10 U/μL Mse I 0.2 μL，20 pmol/μL DNA模板1 μL，ddH2O補(bǔ)齊至20 μL。37 ℃酶切5 h，65 ℃滅活20 min，置于室溫使DNA復(fù)性。

2) 連接。反應(yīng)體系為：10×Buffer 1.0 μL，5 pmol/μL EcoR I接頭引物(Ead5和Ead3) 0.25 μL，50 pmol/μL Mse I引物(Mad5和Mad3) 0.5 μL，400 U/μL T4連接酶0.1 μL，酶切產(chǎn)物5 μL，ddH2O補(bǔ)足至10 μL，16 ℃連接16 h后，65 ℃滅活20 min。

3) 限制性片段的擴(kuò)增。預(yù)擴(kuò)增PCR反應(yīng)體系為：5 U/μL Taq酶 0.2 μL，10×PCR Buffer(含MgCl2) 2.0 μL，10 mmol/L dNTP 0.4 μL，10 μmol/L 選擇性擴(kuò)增引物(E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7或E8) 0.6 μL，10 μmol/L選擇性擴(kuò)增引物(M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7或M8) 0.6 μL，ddH2O補(bǔ)齊至20 μL。PCR預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?2 ℃預(yù)變性5 min；95 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，20個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。預(yù)擴(kuò)增PCR產(chǎn)物稀釋20倍后，用于選擇性擴(kuò)增。

4) 選擇性擴(kuò)增PCR。反應(yīng)體系為：5 U/μL Taq 酶 0.2 μL，10×PCR Buffer(含 MgCl2)2.0 μL，10 mmol/L dNTP 0.4 μL，10 μmol/L選擇性擴(kuò)增引物(E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7或E8)0.4 μL，10 μmol/L選擇性擴(kuò)增引物(M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7或M8) 0.8 μL，ddH2O補(bǔ)齊至20 μL。PCR選擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃變性2 min，95 ℃退火30 s，65℃延伸30 s；72 ℃變性1 min，共13個(gè)循環(huán)(每個(gè)循環(huán)降0.7 )℃；95 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72℃延伸1 min，30個(gè)循環(huán)；最后在72 ℃延伸5 min。

5) 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳。通過(guò)對(duì)AFLP各條件的優(yōu)化，篩選出多條帶清晰的選擇性擴(kuò)增引物組合進(jìn)行PCR。PCR反應(yīng)體系及程序同上。擴(kuò)增產(chǎn)物用6%變性聚丙烯酰胺凝膠100 W恒定功率電泳2 h，進(jìn)行銀染檢測(cè)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

對(duì)銀染后得到的指紋圖譜進(jìn)行讀取分析，有條帶的記為“1”，無(wú)條帶的記為“0”。將AFLP指紋圖譜的統(tǒng)計(jì)結(jié)果用由“1”和“0”構(gòu)成的矩陣數(shù)列表示。采用PopGene 1.32軟件計(jì)算擴(kuò)增片段總數(shù)、多態(tài)性位點(diǎn)比例、Shannon指數(shù)、期望雜合度、Nei’s遺傳距離及遺傳相似系數(shù)、遺傳分化與基因流等，并根據(jù)群體間的遺傳距離用UPGMA方法進(jìn)行聚類(lèi)分析，采用 Winamova1.55軟件進(jìn)行群體間以及群體內(nèi)的分子變異分析，運(yùn)用Genalex 6[9]軟件進(jìn)行主坐標(biāo)分析。

2 結(jié) 果

2.1 AFLP擴(kuò)增譜帶統(tǒng)計(jì)

本研究共進(jìn)行了64條隨機(jī)引物的擴(kuò)增，其中11對(duì)有效引物可獲得擴(kuò)增片段條帶清晰、重復(fù)性好的條帶，11對(duì)引物組合從4個(gè)群體中共擴(kuò)增出908條有效擴(kuò)增片段，每對(duì)引物組合可擴(kuò)增出 56～108條片段，平均82.55條片段，其中224條片段(24.67%) 為4個(gè)群體所共有，684條(75.33%)為多態(tài)性片段，表現(xiàn)出群體多樣性。

E6/M7擴(kuò)增片段總數(shù)最多(108條)，E8/M3擴(kuò)增片段總數(shù)最少(56條)；E8/M4擴(kuò)增多態(tài)性片段比例最高(78.75%)，E8/M5擴(kuò)增多態(tài)性片段比例最低(69.86%)，表現(xiàn)出群體多樣性(表2)。

表2 11對(duì)AFLP引物組合的擴(kuò)增結(jié)果Table 2 Amplification results of 11 different AFLP primer combinations

引物 E2/M3對(duì)部分泥東風(fēng)螺樣品的AFLP擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 E2/M3引物組合擴(kuò)增LJYN和GXWN群體得到的AFLP指紋圖譜Fig.1 AFLP patterns of LJYN and GXWN populations using primer E2/M3

連江野生泥東風(fēng)螺(LJWN)、廣西野生泥東風(fēng)螺(GXWN)、連江養(yǎng)殖泥東風(fēng)螺(LJYN)、長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖泥東風(fēng)螺(CLYN)4個(gè)群體的擴(kuò)增結(jié)果見(jiàn)表3。連江野生群體和長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體的多態(tài)性比例高于其他2個(gè)群體，分別為72.90%和72.86%。

表3 4個(gè)泥東風(fēng)螺群體的擴(kuò)增結(jié)果Table 3 Amplification results of four populations of Babylonia lutosa

2.2 遺傳多樣性分析

對(duì)4個(gè)群體的遺傳多樣性指數(shù)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)4個(gè)群體平均的等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、Shannon’s多樣性指數(shù)和平均雜合度依次為1.974 0、1.500 6、0.464 7和0.303 4(表4)。從等位基因數(shù)和有效等位基因數(shù)的分析結(jié)果來(lái)看，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體的等位基因數(shù)及有效等位基因數(shù)高于連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體，且長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體的有效等位基因數(shù)最多，連江養(yǎng)殖群體的最少。Shannon’s多樣性指數(shù)分析結(jié)果表明，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體的遺傳變異大于連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體，且長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體的遺傳變異最大，連江養(yǎng)殖群體的最小。平均雜合度分析結(jié)果也顯示出相同趨勢(shì)，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體高于連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體，且長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體雜合度最高，連江養(yǎng)殖群體雜合度最低。4種遺傳多樣性指數(shù)均表明，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性高于連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體，其中長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性最高，連江養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性最低；4個(gè)群體的遺傳多樣性大小依次為長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體、廣西野生群體、連江野生群體、連江養(yǎng)殖群體。

表4 4個(gè)群體的遺傳多樣性指數(shù)Table 4 Parameters of genetic diversity of four populations of Babylonia lutosa

2.3 遺傳距離及遺傳相似系數(shù)分析

依據(jù)AFLP指紋圖譜，用Nei’s(1979)[10]公式，計(jì)算4個(gè)群體的遺傳距離和遺傳相似系數(shù)(表5)。4個(gè)群體間遺傳距離為0.128 4～0.180 6，平均遺傳距離為0.152 0；遺傳相似系數(shù)為0.834 8～0.879 5，平均遺傳相似系數(shù)為0.859 2，其中，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體的遺傳距離最小，遺傳相似系數(shù)最高；連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體的遺傳距離最大，遺傳相似系數(shù)最低。分析表明，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體可能是由一個(gè)群體遺傳變異而得，而同一地區(qū)不同養(yǎng)殖模式的群體間存在著較為明顯的遺傳變異。

表5 4個(gè)群體的遺傳距離和遺傳相似系數(shù)Table 5 Genetic distance and genetic similarity of four populations of Babylonia lutosa

2.4 4個(gè)群體間遺傳多樣性來(lái)源的分子方差分析(AMOVA)

利用分子方差分析方法得出群體間、群體內(nèi)和地區(qū)間 3種變異來(lái)源對(duì)總的遺傳變異的貢獻(xiàn)率(表6)，表明泥東風(fēng)螺的遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)(83.49%)，其次來(lái)源于群體間(14.65%)，而發(fā)生在地區(qū)間的遺傳變異最少，為1.86%。群體間的PhiPT遺傳分化系數(shù)為0.201，表明4個(gè)群體間處于中等偏低的遺傳分化水平，且群體內(nèi)的遺傳變異為最主要的變異源。

表6 泥東風(fēng)螺4個(gè)群體的AMOVA分析Table 6 Data derived from AMOVA of four populations of Babylonia lutosa

2.5 群體間的遺傳分化與基因流

用PopGene軟件分析得出4個(gè)群體的總遺傳多樣性值(HT)為0.377 0，群體內(nèi)遺傳多樣性(Hs)高達(dá)0.303 3，遺傳分化值(GST)=19.54%，即19.54%的遺傳變異存在于群體間，而高達(dá)80.46%的遺傳變異存在于群體內(nèi)。4個(gè)群體間的基因流(NM)僅為2.058 6，說(shuō)明由于4個(gè)群體間的地理隔離，造成了群體間的基因交流水平較低。

2.6 群體間的遺傳距離和聚類(lèi)分析

根據(jù) Nei’s遺傳距離對(duì) 4個(gè)泥東風(fēng)螺群體的AFLP指紋圖譜進(jìn)行聚類(lèi)分析，采用UPGMA法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)(圖3)。從UPGMA聚類(lèi)分析結(jié)果來(lái)看，4個(gè)泥東風(fēng)螺群體中長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體遺傳距離最近，其次是連江養(yǎng)殖群體，與廣西野生群體遺傳距離最遠(yuǎn)的是連江野生群體。主坐標(biāo)分析(PCA)得出第一主坐標(biāo)(coord.1，橫坐標(biāo))占全部變異的30.22%，而第二主坐標(biāo)(coord.2，縱坐標(biāo))占25.82%，第一主坐標(biāo)和第二主坐標(biāo)總共占全部變異的56.04%。表明長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體明顯與廣西野生群體在主坐標(biāo)上分布距離最近，而連江野生群體與其他3個(gè)群體的分布距離最遠(yuǎn)(圖4)，說(shuō)明主坐標(biāo)分析結(jié)果與上述Upgma法聚類(lèi)分析結(jié)果一致。

圖3 4個(gè)泥東風(fēng)螺群體構(gòu)建的UPGMA系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.3 The phylogenetic tree of four populations of Babylonia lutosa with UPGMA

圖4 4個(gè)泥東風(fēng)螺群體的主坐標(biāo)分析(PCA)Fig.4 PCA for four populations of Babylonia lutosa

3 討 論

a. 泥東風(fēng)螺4個(gè)群體的遺傳多樣性。AFLP在螺類(lèi)上的運(yùn)用較少。潘英等[11]首次利用AFLP技術(shù)對(duì)5個(gè)管角螺群體的遺傳多樣性進(jìn)行分析研究。本試驗(yàn)用11對(duì)不同的選擇性擴(kuò)增引物對(duì)4個(gè)泥東風(fēng)螺群體進(jìn)行AFLP分析，多態(tài)性片段比例、等位基因數(shù)和有效等位基因數(shù)Shannon’s多樣性指數(shù)、期望雜合度等指標(biāo)均表明4個(gè)泥東風(fēng)螺群體具有較為豐富的遺傳多樣性。遺傳多樣性高低依次為長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體、廣西野生群體、連江野生群體、連江養(yǎng)殖群體，且長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體的遺傳多樣性高于連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體。其原因可能是長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖的群體引種于廣西野生泥東風(fēng)螺，經(jīng)過(guò)福建長(zhǎng)樂(lè)地區(qū)長(zhǎng)期養(yǎng)殖后，使其遺傳多樣性在原有的基礎(chǔ)上更為豐富。影響遺傳多樣性的自然因素主要來(lái)自區(qū)域差異，而人為因素如環(huán)境污染、捕撈過(guò)度或者人工放流等則都有可能造成遺傳多樣性的丟失[12–13]。盡管本研究中的泥東風(fēng)螺群體目前均有較高的遺傳多樣性，但捕撈方式的不合理及環(huán)境污染都有可能致使遺傳多樣性降低。

b. 泥東風(fēng)螺4個(gè)群體間的遺傳相似性分析。有研究[14–18]表明，同一區(qū)域的人工養(yǎng)殖群體經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的人工選育，由于種間雜交、近親繁殖、遺傳漂變等原因，其遺傳多樣性低于野生群體，在一定程度上顯示出種質(zhì)資源退化的現(xiàn)象。筆者對(duì)4個(gè)泥東風(fēng)螺群體的Nei’s遺傳距離和遺傳相似系數(shù)分析的結(jié)果表明，長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體的遺傳距離最小，遺傳相似系數(shù)最高，連江野生群體和連江養(yǎng)殖群體的遺傳距離最大，遺傳相似系數(shù)最低，這說(shuō)明長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體可能具有一定的遺傳同源性，而同一區(qū)域內(nèi)不同的養(yǎng)殖模式會(huì)使群體的遺傳多樣性發(fā)生變化，且人工養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性低于野生群體。分子方差分析(AMOVA)結(jié)果顯示，4個(gè)泥東風(fēng)螺群體的遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)(83.49%)，其次來(lái)源于地區(qū)間(14.65%)，而發(fā)生在群體間的遺傳變異最少(1.86%)，這與群體間遺傳分化及基因流結(jié)果相一致?；蛄魇侵干飩€(gè)體由于交配或遷移而導(dǎo)致的基因從一個(gè)居群向另一個(gè)居群擴(kuò)散，使得繁殖群體中等位基因頻率發(fā)生變化的現(xiàn)象。本試驗(yàn)中的基因流(NM)僅為2.058 6，說(shuō)明本試驗(yàn)中的4個(gè)群體間由于地理隔離而引起的群體間基因交流的水平較低，因此導(dǎo)致群體間的遺傳變異主要來(lái)源于群體內(nèi)的遺傳變異。從UPGMA聚類(lèi)分析結(jié)果來(lái)看，4個(gè)泥東風(fēng)螺群體中長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群

體與廣西野生群體遺傳距離最近，其次是連江養(yǎng)殖群體，與廣西野生群體遺傳距離最遠(yuǎn)的是連江野生群體，這與4個(gè)泥東風(fēng)螺群體在主坐標(biāo)軸上的分布結(jié)果一致，進(jìn)一步證明長(zhǎng)樂(lè)養(yǎng)殖群體和廣西野生群體在遺傳上存在親緣性，且與連江養(yǎng)殖群體和野生群體存在著一定的遺傳分化。

[1] 董津茂，蔡如星．浙江動(dòng)物志(軟體動(dòng)物)[M]．杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1991．

[2] 王如才．中國(guó)水生貝類(lèi)原色圖鑒[M]．杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1988．

[3] 陳利雄，吳進(jìn)鋒．東風(fēng)螺的養(yǎng)殖技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化前景[J]．齊魯漁業(yè)，2004，21(10)：9–11．

[4] 韓志強(qiáng)，高天翔，王志勇，等．黃姑魚(yú)群體遺傳多樣性的AFLP分析[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2006，30(5)：640–646．[5] 鄭德鋒，趙金良，周文玉，等．我國(guó)沿海棘頭梅童魚(yú)(Collichthys lucidus)群體遺傳結(jié)構(gòu)的AFLP分析[J]．海洋與湖藻，2011，42(3)：443–447．

[6] 歐燕燕．華貴櫛孔扇貝體色多態(tài)性研究及AFLP分析[D]．湛江：廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，2012．

[7] 赫崇波，叢林林，葛隴利，等．文蛤養(yǎng)殖群體和野生群體遺傳多樣性的AFLP分析[J]．中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2008，15(2)：215–221．

[8] 譚建明，謝桐，徐琴君，等．快速鹽析法提取DNA在HLA基因分型中的應(yīng)用[J]．中華器官移植雜志，1996，17(1)：9–11．

[9] Peakall R，Smouse P．GENALEX 6：Genetic anaLysis in Excel．Population genetic software for teaching and research[J]．Molecular Ecology Notes，2006，6(1)： 288–295．

[10] Nei M，Li W．Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleases[J]. National Acad Sciences，1979，76(10)：139–147．

[11] 潘英，慕翠敏，李琪，等．管角螺遺傳多樣性的AFLP分析[J]．中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，43(4)：58–62．[12] 王愛(ài)民，閻冰，葉力，等．三個(gè)野生種群馬氏珠母貝遺傳多樣性的RAPD分析[J]．農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào)，2003，11(2)：163–168．

[13] 高悅勉，孫洋，才慧梅．3種扇貝遺傳結(jié)構(gòu)的RAPD分析[J]．海洋水產(chǎn)研究，2007，28(6)：25–31．

[14] 劉芳，劉衛(wèi)東，王強(qiáng)，等．微衛(wèi)星標(biāo)記及其在貝類(lèi)遺傳選育研究中的應(yīng)用[J]．水產(chǎn)科學(xué)，2006，25(5)：268–269．

[15] 夏德全，王文君．動(dòng)物線粒體DNA研究及在魚(yú)類(lèi)種群遺傳結(jié)構(gòu)研究中的應(yīng)用[J]．水產(chǎn)學(xué)報(bào)，1998，22(4)：364–369．

[16] 張全啟，徐曉斐，齊潔，等．三種鲆鰈魚(yú)養(yǎng)殖群體的遺傳多樣性分析及特異性AFLP標(biāo)記研究[J]．中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32(5)：512–518．

[17] 高祥剛，葛隴利，劉衛(wèi)東，等．皺紋盤(pán)鮑野生與養(yǎng)殖群體遺傳多樣性的 AFLP分析[J]．生物技術(shù)通報(bào)，2008(增刊)：324–330．

[18] 許寶紅，肖調(diào)義，蘇建明，等．南洞庭湖15種野生蚌類(lèi)遺傳多樣性分析[J]．湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2009，35(1)：88–103．

責(zé)任編輯：羅 維

英文編輯：羅 維

Genetic distance in four populations of Babylonia lutosa (Lamer) assessed by AFLP makers

QIN Qin1, WANG Xiao-qing1*, ZENG Zhi-nan1,3*, ZHU Dan-li1, XIONG Gang1,2, WU Qi-sheng3, NING Yue3
(1.College of Animal Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China; 2.Hunan Biological Electromechanical Vocational Technical College, Changsha 410127, China; 3.Fisheries Science Research Institute of Fujian, Xiamen, Fujian 361000, China)

Genetic diversity of Lianjiang wild population (LJWN), Lianjiang cultured population (LJYN), Changle cultured population (CLYN), Guangxi wild population (GXWN) of Babylonia lutosa (Lamer) was analyzed by amplified fragment length polymorphisms (AFLP). For the assessment, total 908 bands were generated from four populations using 11 different primer combinations, 684 (75.33%) were polymorphic fragments of which 224 (24.67%) are shared by the four populations. Genetic diversity index analysis showed, the effective number of alleles, the average number of alleles, Shannon’s diversity index and average heterozygosity were 1.500 6, 1.974 0, 0.464 7, 0.303 4, respectively; Nei’s genetic distance and genetic similarity coefficient were ranged from 0.128 4 to 0.180 6 and 0.834 8 to 0.879 5, indicating relatively rich genetic diversity and high genetic similarity among the four populations of Babylonia lutosa (Lamer).Results of analysis of molecular variance (AMOVA) and assignment test revealed 83.49% variation within population, 14.65% variation from region difference and 1.86% variation among the four populations. Genetic variance GSTand NMwere 0.195 4 and 2.058 6 among four population groups indicating that the gene exchange level is very low. The analysis results of UPGMA and PCA showed that the nearest genetic distance exists between CLYN population and GXWN population. Genetic distance between LJWN population and other 3 populations was the farthest.

Babylonia lutosa (Lamer); genetic distance; genetic diversity; amplified fragment length polymorphisms (AFLP)

Q959.212；Q347

A

1007?1032(2014)03?0299?06

10.13331/j.cnki.jhau.2014.03.015

投稿網(wǎng)址：http://www.hunau.net/qks

2014–04–11

國(guó)家海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(201205021)

秦溱(1988—)，女，湖南長(zhǎng)沙人，碩士研究生，主要從事水生生物學(xué)研究，51953385@qq.com；*通信作者，wangxiao8258@ 126.com；xmzzn@sina.com