原料乳中三聚氰胺檢測方法的改進(jìn)

李雪，隋建中，李梅，楊文娟

1.新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，烏魯木齊 830049 2.華潤賽科藥業(yè)有限責(zé)任公司，北京 100124

原料乳中三聚氰胺檢測方法的改進(jìn)

李雪1，隋建中1，李梅2，楊文娟1

1.新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，烏魯木齊 830049 2.華潤賽科藥業(yè)有限責(zé)任公司，北京 100124

對國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22388-2008中高效液相色譜法檢測原料乳中三聚氰胺的方法進(jìn)行改進(jìn)。改進(jìn)后的方法，平均回收率為88.19%～91.31%，縮短了樣品前處理時間，提高了樣品添加回收率。

原料乳；三聚氰胺；高效液相色譜法；定量分析

三聚氰胺簡稱三胺，又稱蜜胺、三聚氰酰胺，低毒，是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。主要用于生產(chǎn)三聚氰胺-甲醛樹脂，廣泛應(yīng)用于塑料、涂料、造紙、木材加工、醫(yī)藥和電器等工業(yè)。動物試驗結(jié)果表明：動物長期攝入三聚氰胺會造成生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，產(chǎn)生膀胱、腎部結(jié)石，并可進(jìn)一步誘發(fā)膀胱癌。2008年10月7日，國家質(zhì)檢總局、國家標(biāo)準(zhǔn)委員會發(fā)布了GB/T22388-2008《原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法》。該標(biāo)準(zhǔn)中的高效液相色譜法是目前最常用的三聚氰胺檢測方法，但是在采用該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行試驗的過程中，發(fā)現(xiàn)添加回收率不理想。本研究針對前處理方法進(jìn)行了改進(jìn)，提高了方法的添加回收率，并總結(jié)出一些實踐心得。

1 材料與儀器設(shè)備

1.1 試劑與溶液

1.1.1 試劑

乙腈、甲醇、辛烷磺酸鈉均為色譜純，氨水、三氯乙酸、檸檬酸均為分析純，三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度大于或等于99.0%）。

1.1.2 溶液

甲醇水溶液：準(zhǔn)確量取50mL甲醇和50mL水，混勻后備用。

氨化甲醇溶液（5%）：準(zhǔn)確量取5mL氨水和95mL甲醇，混勻后備用。

乙酸鉛溶液（22g/L）：取22g乙酸鉛用約300mL水溶解后定容至1L。

三氯乙酸溶液（1%）：準(zhǔn)確稱取10g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻后備用。

離子對試劑緩沖液：準(zhǔn)確稱取2.10g檸檬酸和2.16g辛烷磺酸鈉，加入約980mL水溶解，調(diào)節(jié)pH至3.0后，定容至1L備用。

三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液：準(zhǔn)確稱取100mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（準(zhǔn)確至0.1mg）于100mL容量瓶中，用甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，4℃條件下避光保存。

三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)工作液：根據(jù)檢測需要，用流動相將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋得到相應(yīng)濃度標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 儀器設(shè)備

高效液相色譜儀（安捷倫1260，配紫外檢測器），分析天平（感量0.0001g和0.01g）,pH計(± 0.02),離心機(jī)（轉(zhuǎn)速不低于4000r/min），超聲波水浴，氮吹儀，旋渦混合器，混合型陽離子交換固相萃取柱，離心管（50mL）。

2 試驗方法

2.1 提取

稱取2g（準(zhǔn)確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超聲提取10min，再震蕩提取10min后，以4000 r/min離心10min。取上清液5mL待凈化。

2.2 凈化

依次用3mL甲醇、5mL水活化固相萃取小柱。將待凈化液轉(zhuǎn)移至固相萃取柱中。依次用3mL水、3mL甲醇洗滌，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液分兩次洗脫。洗脫液于50℃下用氮?dú)獯抵两桑瑲埩粑镉?mL流動相定容，旋渦混合1min，過微孔濾膜后，待測定。

2.3 高效液相色譜分離條件

色譜柱：C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：離子對緩沖溶液-乙腈（90︰10）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40℃；檢測波長：240nm；進(jìn)樣量：10μL。

3 試驗結(jié)果

3.1 方法的線性范圍和相關(guān)性

對濃度為0.8mg/L、2mg/L、20mg/L、40mg/ L、80mg/L的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖1）。結(jié)果表明，三聚氰胺在0.8～80 mg/L范圍內(nèi)呈線性相關(guān)。線性方程為y＝36.35x＋5.3094,相關(guān)系數(shù)為R2＝0.9998。

圖1 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 回收率、精密度和最低檢出限

依據(jù)噪聲值，按3倍信噪比，計算其理論檢出限，為0.212mg/kg?；厥章蕼y定結(jié)果見表1，精密度測定結(jié)果見表2。標(biāo)準(zhǔn)、空白及添加樣品色譜圖見圖2至圖4。

表1 加標(biāo)回收率試驗結(jié)果（n=5）

表2 精密度試驗結(jié)果（n=5）

圖2 三聚氰胺標(biāo)樣色譜圖

圖3 空白樣品色譜圖

圖4 添加樣品色譜圖

4 討論

國家標(biāo)準(zhǔn)在樣品進(jìn)行離心后，對上清液用潤濕的濾紙過濾。試驗表明在過濾時會造成三聚氰胺的損失，降低回收率。本研究顯示：樣品經(jīng)過離心后直接取上清液進(jìn)行凈化，可以大大提高添加回收率，且對后續(xù)試驗不會造成影響。另外，如上清液不經(jīng)固相萃取柱凈化，雖然回收率可以達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求，但是長時間、大批量的檢測任務(wù)會對儀器尤其是色譜柱造成不良影響。

用混合型陽離子交換固相萃取柱進(jìn)行樣品凈化，由于洗脫樣品過程中存在離子交換過程，所以洗脫速度不宜過快，要使洗脫液與萃取柱填充物充分接觸，將三聚氰胺充分洗脫，從而得到理想的回收率。試驗表明洗脫流速≤2.0mL/min時，可以保證理想的回收率。

通過反復(fù)試驗，發(fā)現(xiàn)氮吹時如果將提取液完全吹干，樣品的回收率十分不理想，所以在進(jìn)行氮吹時不宜將樣品提取液完全吹干。

本試驗方法的平均回收率為88.19%～91.31%，精密度RSD＜2.96%(n=5),符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，準(zhǔn)確度好，精密度高。與國家標(biāo)準(zhǔn)的高效液相色譜法比較，改進(jìn)的方法提高了樣品添加回收率，節(jié)約了處理時間。改進(jìn)后的方法縮短了樣品前處理時間，提高了樣品添加回收率。

[1]王新娣，李莉，田蘭，等.乳制品中三聚氰胺檢測方法的改進(jìn)[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，33（3）:248-249.

[2]肖洋，粟周偉，馮永渝，等.原料乳中三聚氰胺的高效液相色譜法測定[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（1）：45-46.

[3]田玉平，王東輝，郭衛(wèi)榮.乳及乳制品中三聚氰胺的檢測方法[J].化學(xué)世界，2009（8）：467-470.

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[6]原料乳與乳制品中三聚氰胺檢測方法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008:2-4.

李雪（1981年12月—），新疆維吾爾自治區(qū)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心，農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作。

2014－02－18