柿葉總黃酮緩釋微丸累積釋藥率的測定

王 蘭， 顧 欣，龔 頻， 趙 麟， 虢紅梅

(1.陜西科技大學 生命科學與工程學院， 陜西 西安 710021； 2.陜西新藥技術開發(fā)中心， 陜西 西安 710075)

0 引言

柿葉為柿樹科柿樹屬(Diospyros)植物柿(Diospyroskaki L.f.)的新鮮或干燥葉.其主要有效成分為葉中的總黃酮，具有抗菌消炎、生津止渴、清熱解毒、潤肺強心、鎮(zhèn)咳止血、防癌抗癌等作用[1-3].目前市售的主要是以柿葉總黃酮為原料制成的傳統(tǒng)劑型如片劑，給藥次數多，患者使用不便，因此研究開發(fā)其新的緩/控釋制劑具有廣闊的應用前景.

作者實驗室研制了柿葉總黃酮緩釋微丸，有關柿葉總黃酮緩釋微丸的制備工藝研究另文報道.本文采用紫外-可見分光光度法測定了柿葉總黃酮緩釋微丸的體外累積釋藥率，并考察其釋藥性能，為進一步開發(fā)柿葉總黃酮緩/控釋制劑奠定基礎.

1 試劑與儀器

(1)試劑：柿葉總黃酮緩釋微丸(自制，批號： 20111223)；蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-201007，含量測定用)；氫氧化鈉(西安化學試劑廠)；無水乙醇(西安化學試劑廠)；亞硝酸鈉(北京化學試劑廠)；硝酸鋁(上海新中化學廠).

(2)儀器：ZRS-8G智能溶出儀(天津大學無線電廠)BS224S型電子天平(北京利多斯儀器系統(tǒng)有限公司)；SP-752(PC)型紫外-可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司).

2 累積釋藥率測定方法建立

2.1 波長選擇

(1)蘆丁對照品人工胃液的制備：精密稱取蘆丁對照品14.8 mg置于100 mL的容量瓶中，用適量人工胃液溶解后定容至刻度，搖勻，既得.

(2)蘆丁對照品磷酸鹽緩沖液的制備：精密稱取蘆丁對照品23.4 mg置于100 mL的容量瓶中，用適量的磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)溶解后定容至刻度，搖勻，既得.

(a)人工胃液

將上述溶液分別在400～600 nm波長范圍內掃描，結果表明，蘆丁對照品在人工胃液和磷酸鹽緩沖液中的最大吸收波長均在510 nm，因此選定510 nm為測定波長,如圖1所示.

(b)磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)圖1 蘆丁對照品的紫外-可見掃描圖

2.2 標準曲線的繪制

(1)人工胃液下標準曲線的繪制：分別精密移取蘆丁對照品人工胃液0、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL于25 mL的容量瓶中，加蒸餾水6 mL，加入5% NaNO2溶液1 mL，搖勻，放置6 min.再加入10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻，再放置6 min.最后加入1 mol/L NaOH溶液10 mL，搖勻，加蒸餾水至刻度，搖勻，靜置15 min后在510 nm處測定吸光度A.

(2)磷酸鹽緩沖液下標準曲線的繪制：分別精密移取蘆丁對照品磷酸鹽緩沖液0、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL于25 mL的容量瓶中，加蒸餾水6 mL，加入5% NaNO2溶液1 mL，搖勻，放置6 min.再加入10% Al(NO3)3溶液1 mL，搖勻，再放置6 min.最后加入1 mol/L NaOH溶液10 mL，搖勻，加蒸餾水至刻度，搖勻，靜置15 min后在510 nm處測定吸光度A.

以吸光度A為縱坐標，濃度C為橫坐標.分別以A對C做圖，結果顯示：在人工胃液條件下得回歸方程為：A=9.826 3C-0.014 6 (R2=0.999 4)，并且在5～40μg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系；在磷酸鹽緩沖液條件下得回歸方程為：A=11.313C-0.012 9 (R2=0.999 8)，并且在10～60μg/mL濃度范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系.

2.3 精密度實驗

分別配制蘆丁對照品人工胃液和蘆丁對照品磷酸鹽緩沖液，于510 nm處測其吸光度，平行測定7次，結果如表1、表2所示.

表1 人工胃液條件下精密度實驗結果

表2 磷酸鹽緩沖液條件下精密度實驗結果

由表可知，RSD(%)值均符合藥典要求，說明此方法精密度良好.

2.4 穩(wěn)定性實驗

分別配制高、中、低3個濃度的蘆丁對照品人工胃液和蘆丁對照品磷酸鹽緩沖液，分別于0、50 s、100 s、150 s、200 s、250 s、300 s時測定其吸收度.結果如表3、表4所示.

表3 人工胃液條件下穩(wěn)定性實驗結果

表4 磷酸鹽緩沖液條件下穩(wěn)定性實驗結果

由表3和表4可得，在人工胃液和磷酸鹽緩沖液條件下其平均RSD分別為0.77%和0.29%(n=7)，表明穩(wěn)定性良好.

2.5 回收率實驗

取已知含量的樣品適量，分別加入蘆丁對照品人工胃液和蘆丁對照品磷酸鹽緩沖液(高、中、低3個濃度)，結果，在人工胃液條件下其平均回收率為100.55%(RSD=2.71%)，在磷酸鹽緩沖液條件下其平均回收率為100.95%(RSD=1.94%),表明回收率良好.結果如表5、表6所示.

表5 人工胃液條件下回收率實驗結果

表6 磷酸鹽緩沖液條件下回收率實驗結果

3 累積釋藥率的測定[4-9]

按照《中國藥典》(2010版二部)附錄中釋放度測定法項下的方法操作，以柿葉總黃酮(以蘆丁計)的累積釋藥率為評價指標，將制備的柿葉總黃酮緩釋微丸分別在人工胃液和磷酸鹽緩沖液中于0.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h在510 nm處測定吸收度，以累積釋藥率對時間作圖，結果如圖2所示.在《中國藥典》(2010版第二部) 附錄中微囊、微球與脂質體制劑指導原則中規(guī)定在開始的0.5小時內的釋放量要求低于40%.

圖2 柿葉總黃酮緩釋微丸的 體外累積釋藥曲線

由圖2所知，人工胃液和磷酸鹽緩沖液在開始0.5小時內的釋放量分別為22.97%和34.93%，均未發(fā)生突釋效應.柿葉總黃酮緩釋微丸在磷酸鹽緩沖液中12小時的累積釋藥率為83.22%，在人工胃液中12小時的累積釋藥率為55.42%.

4 釋藥模型擬合[10-15]

柿葉總黃酮緩釋微丸分別在人工胃液和磷酸鹽緩沖液中，以零級釋藥模型、一級釋藥模型和Higuchi釋藥模型進行擬合，結果如表7和表8所示.

表7 人工胃液條件下釋藥模型擬合結果

由表7可以看出，以磷酸鹽緩沖液為釋藥介質，用Higuchi方程擬合時R2值最大，因此認為柿葉總黃酮緩釋微丸在磷酸鹽緩沖液中的釋藥模型也符合Higuchi方程.

表8 磷酸鹽緩沖液條件下釋藥模型擬合結果

由表8可以看出，以磷酸鹽緩沖液為釋藥介質，用Higuchi方程擬合時R2值最大，因此認為柿葉總黃酮緩釋微丸在磷酸鹽緩沖液中的釋藥模型也符合Higuchi方程.

5 結束語

本實驗采用紫外-可見分光光度法測定了柿葉總黃酮緩釋微丸在磷酸鹽緩沖液和人工胃液中的累積釋藥率，結果表明緩釋微丸在磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)中無突釋效應，并且12小時的累積釋藥率達83.22%，符合《中國藥典》(2010版第二部) 的要求，釋藥模型符合Higuchi方程.緩釋微丸在人工胃液中同樣無突釋效應，但是12小時的累積釋藥率僅為55.42%，釋藥模型符合Higuchi方程.相較于人工胃液，柿葉總黃酮緩釋微丸在磷酸鹽緩沖液中具有良好的釋藥性能.這也提示研究者們可以在緩釋材料和制備技術等方面繼續(xù)探討以改善柿葉總黃酮緩釋微丸在人工胃液中的釋藥性能，制備出具有更好釋藥性能的柿葉總黃酮緩/控釋制劑.

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