不同劑量淫羊藿苷對雷公藤多苷模型小鼠睪丸病理損傷的影響

覃光輝姚重華王 驍田 雨薛軼燕曲環(huán)汝蘇 勵

（1深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院，深圳415812；2上海市中醫(yī)醫(yī)院，上海200071；3上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海200032）

不同劑量淫羊藿苷對雷公藤多苷模型小鼠睪丸病理損傷的影響

覃光輝1姚重華2王 驍3田 雨3薛軼燕3曲環(huán)汝3蘇 勵3

（1深圳市龍崗區(qū)中醫(yī)院，深圳415812；2上海市中醫(yī)醫(yī)院，上海200071；3上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，上海200032）

目的探討淫羊藿苷拮抗雷公藤多苷小鼠睪丸病理損傷的量效關(guān)系。方法應(yīng)用雷公藤多苷所致的睪丸生精障礙小鼠模型，觀察不同劑量淫羊藿苷對小鼠睪丸病理形態(tài)學(xué)的影響。結(jié)果模型組小鼠睪丸組織可見明顯的病理損傷；3份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組小鼠睪丸生精小管管壁較厚，細(xì)胞層次較寬，各級生精細(xì)胞排列較規(guī)則，基底面至腔面可見精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞等各個發(fā)育階段的細(xì)胞，細(xì)胞增殖旺盛，可見較多分裂期細(xì)胞，腔內(nèi)可見成熟精子，間質(zhì)稀少，血管豐富，間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育良好。1份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組和9份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組小鼠睪丸病理表現(xiàn)相似，好于模型組，但差于3份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組。結(jié)論在淫羊藿苷／雷公藤多苷的1∶1、3∶1、9∶1三種劑量配比中，3∶1配比具有最好的拮抗雷公藤多苷睪丸病理損傷的作用。

淫羊藿苷；雷公藤多苷；睪丸；病理損傷

在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷具有拮抗雷公藤多苷睪丸病理損傷的作用［1］。在此基礎(chǔ)上，我們進(jìn)一步探討了淫羊藿苷拮抗雷公藤多苷睪丸病理損傷的量效關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組選用8周齡昆明種雄性小鼠50只，體重（40.95±2.76）g，SPF級，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司提供，動物許可證號：SCXX（滬）2007-0005。飼養(yǎng)在上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院動物房內(nèi)，室溫（27±1）℃，食用全價營養(yǎng)顆粒飼料，飲用自來水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為5組（正常組、模型組、1份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組＜簡稱1倍比組＞、3份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組＜簡稱3倍比組＞、9份淫羊藿苷／1份雷公藤多苷治療組＜簡稱9倍比組＞），每組10只，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＞0.05，各組之間體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

1.1.2 藥物及試劑淫羊藿苷（規(guī)格：98%HPLC），由西安小草植物科技有限公司提供，用雙蒸水分別配成12mg／ml、36mg／ml、108mg／ml的混懸液，置4℃保存?zhèn)溆?；雷公藤多苷片，江蘇美通制藥有限公司生產(chǎn)，批號：080913。用雙蒸水配成12mg／ml的混懸液，置4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 治療前各組體重

表1 治療前各組體重

組別樣本量體重P正常組10 39.90±2.78 0.451模型組10 42.18±3.14 1倍比組10 40.91±2.60 3倍比組10 40.52±2.52

1.1.3 儀器設(shè)備LEICA-RM2135型切片機(jī)，LEICADME光學(xué)顯微鏡，由上海徠卡顯微系統(tǒng)有限公司制造。

1.2 方法

1.2.1 給藥劑量正常組：每日生理鹽水0.5ml／100g體重灌胃，連續(xù)30天，每天1次。

模型組：參考文獻(xiàn)［2］進(jìn)行造模。雷公藤多苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，以及生理鹽水0.25ml／100g／d體重灌胃，連續(xù)30天，每天1次。

1倍比組：雷公藤多苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，以及12mg／ml淫羊藿苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，連續(xù)30天，每天1次。

3倍比組：雷公藤多苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，以及36mg／ml淫羊藿苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，連續(xù)30天，每天1次。

9倍比組：雷公藤多苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，以及1080mg／ml淫羊藿苷混懸液0.25ml／100g／d／體重灌胃，連續(xù)30天，每天1次。

1.2.2 觀察癥狀體征實(shí)驗(yàn)自開始起，每周稱重1次，觀察小鼠的體形、毛色、步態(tài)、覓食及活動情況，并記錄動物每天死亡只數(shù)。

1.2.3 觀察睪丸病理形態(tài)第31天用頸椎脫臼法處死小鼠，取左側(cè)睪丸，用Bouin液（冰醋酸∶甲醛∶苦味酸飽和水溶液按1∶5∶15比例配制，現(xiàn)配現(xiàn)用）固定24小時，經(jīng)梯度乙醇脫水，石蠟包埋，分別制成4張厚約4μm連續(xù)石蠟切片，將石蠟切片置于37℃烤箱過夜后，經(jīng)二甲苯脫蠟后梯度乙醇脫水，蘇木精染色5min，經(jīng)1%鹽酸乙醇分色，自來水充分沖洗藍(lán)化后，再用0.1%伊紅復(fù)染5min，最后經(jīng)梯度乙醇脫水，二甲苯透明后，封片。光鏡下觀察睪丸組織切片病理形態(tài)的改變。

2 結(jié)果

2.1 一般情況死亡6只，均為灌胃不當(dāng)當(dāng)場死亡。各組體重均增加，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，P＞0.05，各組之間體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2。除正常組外，其它各組小鼠于造模后均逐漸出現(xiàn)活動減少，反應(yīng)遲鈍，畏寒蜷臥，體毛疏松，失去光澤，進(jìn)食量、飲水量減少等表現(xiàn)，模型組最嚴(yán)重，各治療組比較輕微。

表2 治療后各組體重

表2 治療后各組體重

組別樣本量體重P正常組10 47.90±3.57 0.721模型組9 48.17±2.36 1倍比組8 48.69±3.67 3倍比組9 48.51±4.51 9倍比組846.51±2.26

2.2 光鏡觀察結(jié)果正常組小鼠睪丸，生精上皮（管壁）厚，細(xì)胞層次寬，各級生精細(xì)胞排列規(guī)則，基底面至腔面可見精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞等各個發(fā)育階段的細(xì)胞，細(xì)胞增殖旺盛，可見到較多分裂期細(xì)胞，腔內(nèi)可見成熟精子，間質(zhì)稀少，血管豐富，間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育良好（圖1）；模型組生精小管大部分退化變性，萎縮，生精上皮（管壁）明顯變薄，細(xì)胞層次減少，各級生精細(xì)胞排列紊亂甚至缺失，數(shù)量明顯減少，生精小管腔內(nèi)空虛，少見甚至未見成熟的精子，間質(zhì)成分增寬，并且出現(xiàn)較大空隙，血管稀少，間質(zhì)細(xì)胞減少或消失（圖2）；3倍比組的鏡下表現(xiàn)與正常組基本相同，生精小管管壁較厚，細(xì)胞層次較寬，各級生精細(xì)胞排列較規(guī)則，基底面至腔面可見精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞等各個發(fā)育階段的細(xì)胞，細(xì)胞增殖旺盛，可見到較多分裂期細(xì)胞，腔內(nèi)可見成熟精子，間質(zhì)稀少，血管豐富，間質(zhì)細(xì)胞發(fā)育良好（圖3）。

圖1

圖2

圖3

1倍比組的鏡下表現(xiàn)（圖4）與9倍比組（圖5）基本相同，生精小管管壁較薄，細(xì)胞層次較窄，各級生精細(xì)胞排列欠規(guī)則，數(shù)量減少，基底面至腔面可見精原細(xì)胞、初級精母細(xì)胞、精子細(xì)胞等各個發(fā)育階段的細(xì)胞，少見成熟的精子，間質(zhì)成分增寬，血管稀少，間質(zhì)細(xì)胞減少。

圖4

圖5

3 結(jié)論

淫羊藿苷拮抗雷公藤多苷睪丸病理損害的作用隨劑量的增加呈現(xiàn)由弱到強(qiáng)再減弱的趨勢。在淫羊藿苷／雷公藤多苷的1∶1、3∶1、9∶1三種劑量配比中，3∶1的配伍比例具有最好的拮抗雷公藤多苷睪丸病理損傷的作用。

［1］覃光輝，王驍，姚重華，等.淫羊藿苷對雷公藤多苷模型小鼠睪丸病理損傷的影響［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2009，（7）：8-10.

In fluen c e o f Dif f e r e n t Volume o f Ica riine on Trip t e r y gium Gl y c o sid e s Mo d el Ra t wit h Pat holo gical Inju r y o f Te sti

Qin Guanghui1Yao Chonghua2W ang Xiao3Tian Yu3Xue Yiyan3Qu Huanru3Su Li3(1 Shen zhen Longgang hospital of traditional chinese M edicine,Guangdong Province,415812,China; 2 Shanghai Hospitalof Traditional Chinese M edicine,Shanghai,200071,China; 3 Longhua,Shanghai University of Traditional Chinese M edicine,Shanghai,200032,China)

ObjectiveTo investigate dose-effect relationship of Icariin'Antagonism to TWP model pathological testicular damage in mice.MethodsWe applied TWP-induced obstacles spermatogenic mice to observe the the mouse testis pathomorphologx impact of different doses of Icariin.ResultsThe testicular tissue in the model group of mice can be seen clearlx pathological damage；3 Icariin／1 TWP treatment group mice spermatogenic tubule vall change more thicker，cell-level vider，spermatogenic cells at all levels more regular，the basement surface can be seen to-cavitx surface-spermatogonia，primarx spermatocxte，sperm cells in various developmental stages of the cell，strong cell proliferation，more split-phase cells，mature sperm cavitx，scarce interstitial，vascular-rich，vell-developed interstitial cells.1 Icariin／1 TWP treatment group and 9 Icariin／1 TWP treatment group are similar to mouse testis pathologx，better than the model group，but vorse than the 3 Icariin／1 TWP treatment group.ConclusionIn the ratio of Icariin／TWP 1∶1，3∶1，9∶1，the 3∶1 has the best antagonistic TWP model pathological testicular injurx role.

Icariin；Tripterxgium Glxcosides；Testis；Pathological injurx

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.02.105

：1672-2779（2014）-02-0156-03

??蘇 玲 本文校對：張云城

2013-10-21）