朝鮮淫羊藿葉的黃酮苷類成分研究*

李金玉， 李洪梅， 李蓉濤

(昆明理工大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院， 云南 昆明 650500)

淫羊藿(Epimediumkoreanum)為小檗科(Berbfidaceae)淫羊藿屬(Epimedium)植物，又名三枝九葉草等，亦稱“仙靈脾”。淫羊藿屬全世界大約有52個(gè)種[1]，我國約有40個(gè)種，是傳統(tǒng)補(bǔ)腎壯陽藥，據(jù)明代李時(shí)珍《本草綱目》記載，淫羊藿具有“補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕”的作用。淫羊藿是我國傳統(tǒng)中藥，作為滋陰壯陽、預(yù)防類風(fēng)濕的植物藥使用已有2000余年的歷史[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿具有抗骨質(zhì)疏松[2]、抗炎[3]、抗衰老[4]、抗氧化[5]和抗腫瘤[6]等功效，此外，還具有雌、雄性激素作用[7]。近年來，由于具有很好的開發(fā)利用前景，淫羊藿已成為國內(nèi)外醫(yī)藥界的研究熱點(diǎn)。本文對(duì)朝鮮淫羊藿70%丙酮水提取物的正丁醇部分進(jìn)行研究，得到了6個(gè)黃酮苷，分別被鑒定為：金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯(1)，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯(2)，3′，5，7-三羥基-4′-甲氧基黃酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(3)，山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷(4)，蘆丁(5)和槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(6)?；衔?和2為首次從淫羊藿屬植物中分離得到，化合物3，4和6為首次從該植物中分離得到。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和材料

1D和2D NMR譜在Brucker AM-400、DRX-500及Avance III 600型超導(dǎo)核磁共振儀上測(cè)定；ESI-MS用API QSTAR Pulsar質(zhì)譜儀測(cè)定。HPLC使用安捷倫1200高效液相色譜儀，分析柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱(4.6 × 250 mm，5 μm)，半制備柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱(9.6 × 250 mm，5 μm)；MPLC C-605/C-601型中壓液相色譜儀由瑞士BüCHI公司生產(chǎn)；Dianion HP-20為日本三菱公司生產(chǎn)；Toyopeal HW-40C由日本TOSOH公司生產(chǎn)；Sephadex LH-20(20-100 μm)由瑞典Pharmacia公司生產(chǎn)；YMC*-GEL ODS-A 由日本YMC生產(chǎn)；TLC正相硅膠板(G和GF254)，拌樣用硅膠(80-100目)和柱層析用硅膠(200-300目)，均為青島海洋化工廠生產(chǎn)；顯色劑為碘粉和5% H2SO4-EtOH溶液；展開劑：(1)氯仿：甲醇：水(8：2：0.2)；(2)甲苯：甲酸甲酯：甲酸(1：5：2)。

朝鮮淫羊藿葉于2010年11月購買自吉林省通化市，經(jīng)昆明理工大學(xué)李海舟博士鑒定為朝鮮淫羊藿(E.koreanum)，憑證標(biāo)本(KMUST-B-20101109)存放于昆明理工大學(xué)資源藥物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

干燥朝鮮淫羊藿葉(10 kg)經(jīng)70%丙酮/水提取，減壓濃縮至無丙酮味，然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取。正丁醇相(164 g)經(jīng)Toyopeal HW-40柱層析，甲醇/水(0%、30%、60%、90%、100%)梯度洗脫，合并得到6段，A-F。C段(40 g)經(jīng)ODS中壓柱，25%-65%甲醇水梯度洗脫(流速：10 mL/min)分為4段，C1-C4。C3(10 g)經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇洗脫)被分為4段，C3-1～C3-4。C3-4(1.1 g)經(jīng)ODS中壓柱(50%甲醇，流速：10 mL/min)洗脫分為3段C3-4-1～C3-4-3。C3-4-3(200 mg)用80-100目硅膠樣，200-300目硅膠柱層析，氯仿/甲醇10：1洗脫，得到5段，C3-4-3-1～ C3-4-3-5。C3-4-3-2(60 mg)經(jīng)半制備型HPLC進(jìn)行分離(流動(dòng)相：20%乙腈/水，流速：3 mL/min)，得到化合物1(7.6 mg)和2(8.0 mg)。C3-4-2(180 mg)經(jīng)Sephadex LH-20(氯仿/甲醇1：1)柱層析，后經(jīng)半制備型HPLC進(jìn)行分離(流動(dòng)相：18%乙腈/水，流速：3 mL/min)得到化合物3(10 mg)和4(7.6 mg)。C3-4-1(500 mg)，用80-100目硅膠拌樣，200-300目硅膠柱層析，氯仿/甲醇(15：1，10：1，8：1，4：1)梯度洗脫得到化合物5(13 mg)。D段(28 g)經(jīng)Dianion柱梯度洗脫(30%、60%、90%甲醇/水)分為5段，D1-D5。D3(8.0 g)先經(jīng)Sephadex LH-20(氯仿/甲醇1：1)純化，然后經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析(氯仿/甲醇 10：1，6：1，4：1，0：1洗脫)，分為三段，D3-1～D3-3。D3-2(75 mg)通過半制備型HPLC進(jìn)行分離(流動(dòng)相：18%乙腈/水，流速：3 mL/min)得到化合物6(13 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

圖1 化合物1-6的結(jié)構(gòu)

化合物1：黃色無定形粉末，1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH：3.10-3.47(3H，m，H-2″，H-3″，H-4″)，3.65(3H，s，COOCH3)，3.88(3H，s，OCH3)，4.18(1H，d，J=9.5 Hz，H-5″)，5.30(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，6.46(1H，s，H-8)，6.86(1H，s，H-6)，6.93(1H，d，J=8.1 Hz，H-5′)，6.97(1H，s，H-3)，7.57(1H，s，H-2′)，7.58(1H，d，J=8.1 Hz，H-6′)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC：164.2(s，C-2)，103.5(d，C-3)，182.0(s，C-4)，161.2(s，C-5)，99.3(d，C-6)，162.4(s，C-7)，94.8(d，C-8)，156.9(s，C-9)，105.5(s，C-10)，121.3(s，C-1′)，110.4(d，C-2′)，148.1(s，C-3′)，151.0(s，C-4′)，115.8(d，C-5′)，120.5(d，C-6′)，99.1(d，C-1″)，72.1(d，C-2″)，75.4(d，C-3″)，71.3(d，C-4″)，75.1(d，C-5″)，169.2(s，C-6″)，56.0(q，OCH3)，52.0(q，COOCH3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，故結(jié)構(gòu)鑒定為金圣草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。

化合物2：黃色無定形粉末，1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH：3.13-3.40(3H，m，H-2″，H-3″，H-4″)，3.65(3H，s，COOCH3)，4.21(1H，d，J=9.5 Hz，H-5″)，5.31(1H，d，J=7.1 Hz，H-1″)，6.47(1H，s，H-8)，6.87(1H，s，H-6)，6.89(1H，s，H-3)，6.94(2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，5′)，7.95(2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′)，12.98(1H，s，5-OH)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δC：164.1(s，C-2)，103.5(d，C-3)，182.3(s，C-4)，161.6(s，C-5)，99.6(d，C-6)，162.8(s，C-7)，95.0(d，C-8)，157.4(s，C-9)，105.9(s，C-10)，121.3(s，C-1′)，129.0(d，C-2′，6′)，116.4(d，C-3′，5′)，162.8(s，C-4′)，99.5(d，C-1″)，73.1(d，C-2″)，75.8(d，C-3″)，71.7(d，C-4″)，75.6(d，C-5″)，169.5(s，C-6″)，52.3(q，COOCH3)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，故結(jié)構(gòu)鑒定為芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸-6″-甲酯。

化合物3：黃色無定形粉末，1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δH：1.10(3H，d，J=6.0 Hz，H-6?)，3.81(1H，d，J=10.5 Hz，H-5″)，3.95(3H，s，OCH3)，4.53(1H，s，H-1?)，5.31(1H，d，J=7.1 Hz，H-1″)，6.20(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.40(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.90(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.62(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，7.95(1H，dd，J=1.8，8.4 Hz，H-6′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δC：159.0(s，C-2)，135.4(s，C-3)，179.4(s，C-4)，163.2(s，C-5)，100.2(d，C-6)，166.4(s，C-7)，95.1(d，C-8)，158.7(s，C-9)，105.8(s，C-10)，123.1(s，C-1′)，114.6(d，C-2′)，148.4(s，C-3′)，150.9(s，C-4′)，116.2(d，C-5′)，124.1(d，C-6′)，104.5(d，C-1″)，76.0(d，C-2″)，78.3(d，C-3″)，69.2(d，C-4″)，77.5(d，C-5″)，68.6(t，C-6″)，102.3(d，C-1?)，72.2(d，C-2?)，72.4(d，C-3?)，73.9(d，C-4?)，68.7(d，C-5?)，18.0(q，C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故結(jié)構(gòu)鑒定為3′，5，7-三羥基-4′-甲氧基黃酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

化合物4：黃色無定形粉末，1H-NMR(400 MHz，CD3OD)δH：1.13(3H，d，J=6.2 Hz，H-6?)，3.65(1H，d，J=10.2 Hz，H-5″)，4.51(1H，s，H-1?)，5.22(1H，d，J=6.8 Hz，H-1″)，6.18(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.38(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.88(2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′)，8.03(2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′)；13C-NMR(100 MHz，CD3OD)δC：159.3(s，C-2)，135.5(s，C-3)，179.3(s，C-4)，163.0(s，C-5)，100.2(d，C-6)，166.8(s，C-7)，95.1(d，C-8)，158.6(s，C-9)，105.5(s，C-10)，122.7(s，C-1′)，132.6(d，C-2′，C-6′)，116.1(d，C-3′，C-5′)，161.5(s，C-4′)，104.7(d，C-1″)，75.7(d，C-2″)，78.1(d，C-3″)，71.4(d，C-4″)，77.2(d，C-5″)，68.5(t，C-6″)，102.4(d，C-1?)，72.3(d，C-2?)，72.1(d，C-3?)，73.9(d，C-4?)，69.7(d，C-5?)，18.0(q，C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故結(jié)構(gòu)鑒定為山奈酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→6)-β-D-葡萄糖苷。

化合物5：黃色無定形粉末，1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δH：1.00(3H，d，J=6.2 Hz，H-6?)，3.70(1H，d，J=10.5 Hz，H-5″)，4.38(1H，s，H-1?)，5.31(1H，d，J=7.5 Hz，H-1″)，6.14(1H，s，H-8)，6.33(1H，s，H-6)，6.82(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.52(1H，d，J=2.1 Hz，H-2′)，7.54(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6′)，12.51(1H，s，5-OH)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δC：157.4(s，C-2)，134.1(s，C-3)，177.9(s，C-4)，162.0(s，C-5)，100.0(d，C-6)，166.4(s，C-7)，94.7(d，C-8)，157.3(s，C-9)，104.3(s，C-10)，121.8(s，C-1′)，116.1(d，C-2′)，145.7(s，C-3′)，149.6(s，C-4′)，116.9(d，C-5′)，122.5(d，C-6′)，102.3(d，C-1″)，74.9(d，C-2″)，77.4(d，C-3″)，70.9(d，C-4″)，76.8(d，C-5″)，67.9(t，C-6″)，101.6(d，C-1?)，71.4(d，C-2?)，71.2(d，C-3?)，72.7(d，C-4?)，69.1(d，C-5?)，18.6(q，C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故結(jié)構(gòu)鑒定為蘆丁。

化合物6：黃色無定形粉末，1H-NMR(400 MHz，DMSO-d6)δH：5.33(1H，dJ=7.6 Hz，H-1?)，5.43(1H，d，J=7.2 Hz，H-1″)，6.14(1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.34(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.80(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.53 (1H，d，J=2.0 Hz，H-2′)，7.62(1H，dd，J=2.0，8.5 Hz，H-6′)；13C-NMR(100 MHz，DMSO-d6)δC：156.4(s，C-2)，133.3(s，C-3)，177.3(s，C-4)，161.2(s，C-5)，99.1(d，C-6)，165.6(s，C-7)，93.8(d，C-8)，156.0(s，C-9)，103.5(s，C-10)，121.1(s，C-1′)，116.1(d，C-2′)，148.6(s，C-3′)，144.9(s，C-4′)，115.2(d，C-5′)，121.6(d，C-6′)，101.9(d，C-1″)，71.2(d，C-2″)，73.2(d，C-3″)，67.9(d，C-4″)，75.8(d，C-5″)，60.1(t，C-6″)，100.9(d，C-1?)，74.1(d，C-2?)，76.5(d，C-3?)，70.0(d，C-4?)，77.5(d，C-5?)，60.9(t，C-6?)。波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，故結(jié)構(gòu)鑒定為槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷。

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