慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血清sHLA-G水平測(cè)定的臨床意義

宋 斌，章正華，李章志，陳 雁，萬(wàn)楚成

（湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院血液內(nèi)科，湖北 十堰 442000）

慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者血清sHLA-G水平測(cè)定的臨床意義

宋 斌，章正華，李章志，陳 雁，萬(wàn)楚成

（湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院血液內(nèi)科，湖北 十堰 442000）

目的 探討血清可溶性人類(lèi)白細(xì)胞抗原G（sHLA-G）在慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜（CITP）中的表達(dá)及臨床意義。方法采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)76例初治慢性ITP患者治療前后血清中sHLA-G水平。結(jié)果 CITP患者治療前sHLA-G水平明顯高于對(duì)照組（P＜0.05）。經(jīng)治療緩解后患者血清sHLA-G水平與治療前相比明顯下降（P＜0.05）。未緩解者sHLA-G水平與初診患者無(wú)明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論 sHLA-G可能參與了CITP的發(fā)病，檢測(cè)sHLA-G水平變化有助于慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜病情判斷,可作為療效觀察的新指標(biāo)。

慢性；特發(fā)性血小板減少性紫癜；可溶性人類(lèi)白細(xì)胞抗原G

人類(lèi)白細(xì)胞抗原G（HLA-G）是一種非經(jīng)典I類(lèi)組織相容性復(fù)合體（MHC）分子，分為膜結(jié)合型HLA-G（mHLA-G）和可溶性HLA-G（sHLA-G）。大量的研究結(jié)果證實(shí)HLA-G在免疫調(diào)節(jié)及免疫耐受中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用[1]。近期的研究表明HLA-G在自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等疾病中的表達(dá)發(fā)生了改變，推測(cè)其可能在自身免疫性疾病的病理生理中發(fā)揮重要作用[2]。慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜（CITP）是成人中最為常見(jiàn)的出血性疾病，其發(fā)病機(jī)制目前多數(shù)認(rèn)為與免疫介導(dǎo)密切相關(guān)，被認(rèn)為是一種自身免疫病。本研究采用ELISA方法檢測(cè)慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者緩解前后血清中sHLA-G水平，探討血清sHLA-G在慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

CITP組：為2011年1月至2012年3月在我院住院治療的初治CITP患者76例，均按張之南主編的《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]確診。其中男24例，女52例，年齡14歲～66歲。正常對(duì)照組：48例，均來(lái)源于正常志愿獻(xiàn)血員，男16例，女32例，年齡18～56歲。

1.2 治療方法及療效判定

慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者主要采用腎上腺糖皮質(zhì)激素潑尼松治療，腎上腺糖皮質(zhì)激素潑尼松用量1.0～1.5 mg/（kg·d），口服，至血小板數(shù)回升至正常水平時(shí)逐漸減量，小劑量維持治療4～6月后停藥。部分病人同時(shí)靜脈滴注丙種球蛋白，丙種球蛋白用量400 mg/（kg·d），連用5天。

療效判定按《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》[3]，顯效：血小板恢復(fù)正常，無(wú)出血癥狀，持續(xù)3個(gè)月以上；良效：血小板上升至50×109/L或較原水平上升30×109/L以上，無(wú)或基本無(wú)出血癥狀，持續(xù)2個(gè)月以上；進(jìn)步：血小板有所上升，出血癥狀改善，持續(xù)2周以上；無(wú)效：血小板計(jì)數(shù)及出血癥狀無(wú)改善或惡化。顯效及良效為緩解，進(jìn)步及無(wú)效為未緩解。

1.3 標(biāo)本采集

所有患者在治療前及治療后清晨空腹抽取靜脈血，同時(shí)進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。取血清標(biāo)本保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 血清sHLA-G檢測(cè)

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法，sH LA-G試劑盒為捷克BioVendor公司產(chǎn)品，具體步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果以“±s”表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

CITP患者治療后緩解組血清sHLA-G水平與治療前和未緩解組相比下降，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 治療前后和對(duì)照組血清sHLA-G水平（±s，μg/L）

表1 治療前后和對(duì)照組血清sHLA-G水平（±s，μg/L）

注：與對(duì)照組相比，#P＜0.05；與治療前相比，△P＜0.05；與對(duì)照組相比，※P＞0.05；與治療前相比，*P＞0.05。

組別 n 血清sHLA-G治療前 CITP 76 13.57±5.17#治療后 緩解組 58 6.20±3.78△※未緩解組 18 13.54±4.31*對(duì)照組 48 6.11±4.42

3 討論

HLA-G基因?qū)儆诜墙?jīng)典HLA-Ⅰb類(lèi)基因，具有23個(gè)等位基因（16個(gè)位于外顯子，7個(gè)位于內(nèi)含子），編碼7種HLA-G分子，即HLAG1～HLA-G7。生理狀況下HLA-G主要表達(dá)于胸腺上皮細(xì)胞、胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞及眼角膜細(xì)胞等[1]。大量研究表明HLA-G具有極強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，主要表現(xiàn)在（1）有效抑制CTL和NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用；（2）誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞或CD8+NK細(xì)胞的凋亡；（3）抑制CD4+T細(xì)胞的增值或阻礙初始型T細(xì)胞的分化；（4）抑制樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞（antigen presenting cell，APC）的成熟和活化，影響抗原遞呈；（5）刺激APC細(xì)胞分泌TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子，使Th1/ Th2平衡移向Th2[4]。研究發(fā)現(xiàn)在病理狀態(tài)下，腫瘤、移植、病毒感染等均能誘導(dǎo)HLA-G分子的異常表達(dá)[5]，說(shuō)明HLA-G分子在一些疾病過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用。

近期的研究表明HLA-G在多種炎性疾病和自身免疫性疾病中的表達(dá)發(fā)生改變，在潰瘍性結(jié)腸炎患者的腸粘膜、銀屑病患者的病損皮膚組織、哮喘患者的支氣管上皮及炎性肌病患者的肌纖維組織中均觀察到了HLA-G的表達(dá)[6]，表明HLA-G參與了此類(lèi)疾病的病理生理過(guò)程。

本研究顯示CITP患者治療前水平明顯增高，其機(jī)制可能為在CITP發(fā)病過(guò)程中免疫遞呈細(xì)胞刺激T淋巴細(xì)胞，活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生sHLA-G,同時(shí)活化的T淋巴細(xì)胞激活單核巨噬細(xì)胞從而使sHLA-G的釋放增加。經(jīng)治療緩解后患者血清sHLA-G水平與治療前相比明顯下降（P＜0.05），未緩解者sHLA-G水平與初診患者無(wú)明顯差異（P＞0.05）。提示我們sHLA-G可能參與了CITP的發(fā)病。

同時(shí)從本研究可以看出經(jīng)腎上腺糖皮質(zhì)激素治療未緩解者，其血清sHLA-G水平無(wú)明顯下降，提示我們?cè)谥委熯^(guò)程中監(jiān)測(cè)sHLA-G水平可以指導(dǎo)治療及判斷病情，腎上腺糖皮質(zhì)激素目前為CITP的首選治療，但在腎上腺糖皮質(zhì)激素治療過(guò)程中，若血清sHLA-G無(wú)明顯下降，提示腎上腺糖皮質(zhì)激素治療效果可能欠佳，則可采取其他治療措施，從而避免激素的長(zhǎng)期大量使用而導(dǎo)致的副作用。

綜上所述我們認(rèn)為sHLA-G可能參與了CITP的發(fā)病，檢測(cè)sHLA-G水平變化有助于慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜病情判斷,可作為療效觀察的新指標(biāo)。

[1] Apps R,Gardner L,Moffett A.A critical look at HLA-G[J].Trends Immu nol,2008,29(7):313-321.

[2] Rizzo R,Hviid TV,Govoni M,et al.HLA-G genotype and HLA-G ex pression in systemic lupus erythematosus:HLA-G as a putative su sceptibility gene in systemic lupus erythematosus[J].Tissue Antige ns,2008,71(6):520-529.

[3] 張之南,沈悌.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)[M].第3版,北京:科學(xué)出版社,2007:172-175.

[4] 許惠惠,阮嫣赟,顏衛(wèi)華,等.HLA-G誘導(dǎo)DC細(xì)胞在免疫耐受機(jī)制中的研究進(jìn)展[J].生命科學(xué),2011,23(08):736-741.

[5] Yan WH.Human leukocyte antigen-G in cancer:are they clinically relev ant[J].Cancer Lett,2011,311(2):123-130.

[6] Zelante A,Borgoni R,Galuppi C,et al.Therapy modi fi es HLA-G secreti on differently in Crohn's disease and ulcerative colitis patients[J].In fl a mm Bowel Dis,2011,17(8):94-95.

（本文編輯 董林）

Clinical signi fi cance of serum level of sHLA-G in patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura

SONG Bin,ZHANG Zheng-hua,LI Zhang-zhi,HEN Yan,WAN Chu-cheng
(Department of Hematology, Af fi liated Taihe Hospital of Hubei Medical College, Shiyan 442000,China)

Objective To investigate clinical signi fi cance of sHLA-G in patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura(CITP). Methods Serum levels of sHLA-G in 76 patients with initial CITP were detected using enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). Results The serum level of sHLA-G in initial patients with CITP was signi fi cantly higher than level of controls (P＜0.05), The serum level of sHLA-G in those having good response after therapy was signi fi cantly lower than before treatment(P＜0.05). There were no difference in sHLA-G between nonremission and initial patients(P＞0.05). Conclusion Serum levels of sHLA-G in the patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura is useful marker to judge state of illness, and sHLA-G may be regarded as new index of curative effect.

Chronic;Idiopathic thrombocytopenic purpura;sHLA-G

R554.6

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2014.02.001.001.02

2013-07-12

宋 斌，男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：血液病的診斷與治療。

萬(wàn)楚成，男，學(xué)士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，E-mail：lovmme@tom.com