參紅補(bǔ)血顆粒薄層色譜鑒別研究

徐 巖，初洪波，于秀華，金 蕊，位 鴻，段 青，黃曉巍*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117；2.吉林大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130012；3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院,北京 100700)

“參紅補(bǔ)血顆?！笔怯糜谘撟C治療的中藥復(fù)方新藥，是在長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)院內(nèi)制劑“參脈注射液”的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)上研制開發(fā)的．其處方由紅景天、紅參、黃精、白術(shù)、麥冬等五味中藥組成，具有益氣生血，養(yǎng)血安神的功效.庫(kù)頁(yè)紅景天分布于吉林和黑龍江，尤其吉林的長(zhǎng)白山是其主要分布地．吉林也是紅參的主產(chǎn)地．紅參與紅景天配伍相得益彰，治療血虛證療效尤為突出．處方中紅景天、紅參為君，大補(bǔ)元?dú)?，益氣生血；黃精、白術(shù)為臣，補(bǔ)氣養(yǎng)陰，健脾益腎；麥冬為佐，滋陰補(bǔ)血，養(yǎng)心安神[1]．現(xiàn)代研究表明，紅景天能促進(jìn)機(jī)體骨髓有核細(xì)胞的增殖、分化和成熟，并能提高淋巴細(xì)胞的免疫活性且具有抗腫瘤作用，其主要有效成分為紅景天苷和多種黃酮苷及水溶性多糖[2-3]．紅參含有多種人參皂苷及多糖，有增強(qiáng)體液免疫、促進(jìn)造血、抗腫瘤等作用[4]．此外，黃精、白術(shù)、麥冬均有很好的增強(qiáng)免疫，益氣滋陰的功效[5-7]．為了更好地控制參紅補(bǔ)血顆粒的質(zhì)量，本研究對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，采用薄層色譜法[8]對(duì)紅景天、紅參、黃精、白術(shù)進(jìn)行了鑒別．

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

CAMAG型薄層色譜成像儀(瑞士CAMAG公司)；CP225D型雙量程電子分析天平(德國(guó) Sartoris公司)；KQ-100型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；GZX-9240MBE型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)；薄層板為青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)及煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所生產(chǎn)．

紅景天對(duì)照藥材(批號(hào):121412-200907)；紅參對(duì)照藥材(批號(hào):121045-200609)；黃精對(duì)照藥材(批號(hào):121341-201002)；白術(shù)對(duì)照藥材(批號(hào):120925-200805)；紅景天苷對(duì)照品(批號(hào):110774-200206);人參皂苷Re對(duì)照品(批號(hào):110754-201123);人參皂苷Rg1對(duì)照品(批號(hào):110703-201027);人參皂苷Rb1對(duì)照品(批號(hào):110704-201318))；以上對(duì)照藥材及對(duì)照品均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院．參紅補(bǔ)血顆粒樣品1、樣品2、樣品3，批號(hào)分別為:20130901、20130902、20130903，均由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心提供．

1.2 紅景天的薄層鑒別

取本品5g，研細(xì)，加甲醇10ml，超聲處理30min，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液．同時(shí)按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含紅景天的陰性對(duì)照溶液．另取紅景天對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液．再取紅景天苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液．按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6:3:1:1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏．供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，如圖1所示.

圖1 紅景天薄層鑒別

1.3 紅參的薄層鑒別

取本品5g，研細(xì)，加水1ml攪拌濕潤(rùn)，加水飽和的正丁醇50ml，超聲處理30min，吸取上清液，加3倍量氨試液，搖勻，分層，取上層液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液.按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含紅參的陰性對(duì)照溶液．另取紅參對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液．再取人參皂苷Rb1對(duì)照品、人參皂苷Re對(duì)照品、人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液．按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰．供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，如圖2所示.

圖2 紅參薄層鑒別

1.4 黃精的薄層鑒別

取本品5g，研細(xì)，加70%乙醇20ml，加熱回流1h，抽濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液．同時(shí)按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含黃精的陰性對(duì)照溶液.另取黃精對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液．按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各10μl ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-甲酸(5:2:0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰．供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，如圖3所示.

圖3 黃精薄層鑒別

1.5 白術(shù)的薄層鑒別

取本品5g，研細(xì)，加正己烷10ml，超聲處理15min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液．同時(shí)按處方和制法及供試品溶液制備方法制成不含白術(shù)的陰性對(duì)照溶液．另取白術(shù)對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液．按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述新制備的三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(50:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰．供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，如圖4所示.

圖4 白術(shù)薄層鑒別

2 討論

2.1 上樣技術(shù)問(wèn)題

上樣是薄層色譜分析操作最關(guān)鍵的一步，也是第一步．它直接關(guān)系到能否得到分離度好的薄層色譜．在進(jìn)行上樣操作時(shí)，由于操作不當(dāng)?shù)仍?，毛?xì)管或注射器等上樣裝置可能會(huì)對(duì)薄層表面造成一定的機(jī)械性損傷，這將會(huì)對(duì)物質(zhì)的定量分析結(jié)果帶來(lái)一定的影響．質(zhì)量高、流程規(guī)范的上樣操作，對(duì)于樣品的定量及定性分析至關(guān)重要．此外，在選用溶劑時(shí)應(yīng)盡可能地避免使用溶解度相對(duì)大的溶劑，同時(shí)盡可能地保證溶劑的粘度小，沸點(diǎn)適中．在實(shí)際應(yīng)用中，由于中藥中含有許多并不十分明確的物質(zhì)，同時(shí)又要保證其所含成分盡可能地全部得到分析處理，在實(shí)驗(yàn)中使用最頻繁的溶劑還是甲醇和乙醇．而許多甲醇或乙醇的萃取液卻常常由于含有太多雜質(zhì)而無(wú)法得到較高質(zhì)量的薄層色譜，這是因?yàn)槠漭腿∫哼€沒(méi)有經(jīng)過(guò)預(yù)處理環(huán)節(jié)所致，所以對(duì)于中藥的薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)，樣品的預(yù)處理也是一個(gè)非常值得注意的步驟．

2.2 展開劑的選擇

在薄層鑒別中，對(duì)于同一種吸附薄層，展開劑極性越大，對(duì)化合物的展開能力越強(qiáng)，反之則弱．為防止某些被分離化合物斑點(diǎn)的拖尾，可以在展開劑中加入少量酸、堿等化合物．在展開劑中加入丙酮等中等極性的溶劑可使兩種互不混合的溶劑進(jìn)行混溶，同時(shí)加快展速，并降低展開劑的粘度．

2.3 展開劑與顯色劑的使用問(wèn)題

對(duì)于薄層色譜鑒別，展開劑的預(yù)飽和是非常重要的，最好在展開之前預(yù)飽和5～10min，這樣可以防止斑點(diǎn)的拖尾現(xiàn)象以及邊緣效應(yīng)；其次，展開劑不可放置太久或者再次使用，否則會(huì)因有機(jī)溶劑不同程度的揮發(fā)而造成展開劑比例的改變，使薄層板出現(xiàn)假前沿；最后，噴顯色劑時(shí)不應(yīng)太靠近薄層板，否則會(huì)因力度太大而將斑點(diǎn)噴花．

薄層板在經(jīng)過(guò)上樣和展開劑展開操作后，有些樣品還需要用顯色劑進(jìn)行顯色處理，如果需要用到氨水和碘蒸氣進(jìn)行熏蒸處理，熏蒸的時(shí)間要足夠長(zhǎng)，使之反應(yīng)充分，直至顯色后再將其取出．如果要進(jìn)行噴霧顯色，所壓縮的氣體要均勻．加熱顯色時(shí)需注意加熱的時(shí)間和溫度．有的成分加入試劑(如揮發(fā)油成分或甾醇類成分經(jīng)香草醛硫酸、硫酸醋酐等試劑顯色)后，加熱溫度的高低、時(shí)間長(zhǎng)短的不同或加熱后放置時(shí)間的不同，斑點(diǎn)的顯色都可能會(huì)隨之而發(fā)生改變．

3 結(jié)論

本研究參照《中國(guó)藥典》2010年版紅景天、紅參、黃精、白術(shù)薄層鑒別方法，同時(shí)查閱了大量相關(guān)文獻(xiàn)．在此基礎(chǔ)上，建立了上述四味藥材的薄層層析鑒別方法，方法簡(jiǎn)便、可靠、重現(xiàn)性好．該方法能有效控制產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，可作為參紅補(bǔ)血顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)．

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