• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    煙草連作對土壤微生物多樣性及酶活性的影響

    2014-06-12 02:28:42,,,,,,
    土壤與作物 2014年2期

    , ,,,,,

    (1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院,河南 鄭州 450002;2.河南省許昌市煙草公司,河南 許昌 461000;3.河南省襄城縣煙草公司,河南 襄城 452670)

    我國耕地面積少,作物連作現(xiàn)象十分普遍。煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物,也是一種忌連作作物,但由于經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)動(dòng)烤煙連作在煙葉生產(chǎn)中十分普遍。煙草連作常導(dǎo)致煙株生長發(fā)育不良,品質(zhì)及產(chǎn)量下降,抗病能力降低,土傳病害加重[1-2]。

    土壤微生物作為土壤有機(jī)質(zhì)和養(yǎng)分轉(zhuǎn)化與循環(huán)的動(dòng)力,直接關(guān)系到土壤養(yǎng)分的有效性,對作物的正常生長發(fā)育起重要作用[3-4]。土壤微生物中以細(xì)菌的種類和數(shù)量最多[5],土壤細(xì)菌的多樣性能夠反映特定土壤環(huán)境的歷史情況[6]。土壤酶來自微生物、植物和動(dòng)物的活體或殘?bào)w,通過催化土壤中的生化反應(yīng)發(fā)揮重要作用,保持了土壤生物化學(xué)的相對穩(wěn)定狀態(tài),其活性與土壤的理化性質(zhì)和其他生物學(xué)特征緊密相關(guān),是近年來土壤質(zhì)量評(píng)估指標(biāo)中必不可少的內(nèi)容[7-9]。土壤蔗糖酶、淀粉酶 、纖維素酶廣泛存在于土壤中,它們直接參與土壤有機(jī)質(zhì)的代謝過程,與土壤肥力密切相關(guān),是評(píng)價(jià)土壤肥力的重要指標(biāo)之一,并能部分反映土壤生產(chǎn)力[10-13]。

    研究試圖利用常規(guī)方法結(jié)合PCR-DGGE技術(shù),系統(tǒng)分析了烤煙連作對土壤細(xì)菌、真菌、放線菌數(shù)量和3種土壤酶活性的影響規(guī)律,以期為煙田土壤的可持續(xù)利用和克服連作障礙提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    試驗(yàn)土壤樣品于2011年9月采自許昌市襄城縣庾河村(GPS信息:33.99°N,113.56°E,H:113 m)連作1a-8a的21塊煙田,其中煙草連作1a-6a土樣各3個(gè)、連作8a土樣3個(gè),但沒有采集到連作7a的土樣。采樣時(shí)遵循隨機(jī)、等量、多點(diǎn)混合的原則,采用S形布點(diǎn)取樣,每塊田地取15個(gè)小樣混合,土樣取自0 ~ 20 cm深的耕層土,共3份平行樣。一部分土樣裝入無菌紙袋,立即帶回實(shí)驗(yàn)室,研磨過0.9 mm(20目)篩后于4 ℃冰箱保存,用于土壤微生物的分析;另一部分土樣風(fēng)干,用于測定土壤酶活性。采樣煙田分布于相同的農(nóng)業(yè)生態(tài)區(qū)域內(nèi),施肥和田間管理均按照當(dāng)?shù)責(zé)煵萆a(chǎn)技術(shù)規(guī)程進(jìn)行,烤煙品種均為中煙100。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1土壤酶活性的測定。淀粉酶、蔗糖酶、纖維素酶活性的測定采用3,5-二硝基水楊酸比色法[14]。

    1.2.2土壤微生物種群、數(shù)量的常規(guī)分離分析。菌分離采用1/10 TSA培養(yǎng)基,真菌分離采用PDA+Kana(卡那霉素0.005 mg·ml-1)培養(yǎng)基,放線菌分離采用高氏一號(hào)培養(yǎng)基。土壤細(xì)菌、真菌、放線菌的計(jì)數(shù)采用稀釋涂抹平板法[15]。

    1.2.3土壤樣品DNA的提取。本實(shí)驗(yàn)室方法提取土壤樣品總DNA,稱取大約3 g土樣于10 mL離心管中;加入6 mL TENP buffer(50 mmol·L-1Tris,20 mmol·L-1EDTA,100 mmol·L-1NaCl,0.01 g·mL-1PVPP,pH值10),渦旋震蕩10 min,12 000 r·min-1離心5 min,棄去上清液;沉淀中加入6 mL PBS buffer(8 g NaCl,0.2 g KCl,1.44 g Na2HPO4,0.24 g KH2PO4,溶于1 L水,pH值7.4),渦旋震蕩5 min,12 000 r·min-1離心5 min,棄去上清液,沉淀備用;將沉淀中加入3 mL土壤DNA提取液(100 mmol·L-1Tris·HCl,100 mmol·L-1EDTA,100 mmol·L-1磷酸鈉緩沖液,1.5 mol·L-1NaCl,1%CTAB,2%CaCl,1 ug·mL-1BSA,pH值8.0),震蕩混勻后置于超低溫冰箱中冷凍15 min,65℃水浴5 min,然后充分反復(fù)凍融3次。向反復(fù)凍融的土壤中加入溶菌酶(100 mg·mL-1,50 uL)、蝸牛酶(20 mg·mL-1,100 uL),37℃水浴1 h,再加入2.0 mg(100 mg·Ml-1,吸取20 uL)蛋白酶K,37℃水浴30 min;加入500 uL裂解液(20%SDS),人工輕緩顛倒幾次至液體變粘稠,65℃水浴1 h,12 000 r·min-1(4℃)離心5 min,收集上清液;將上清液中加入等體積的苯酚/氯仿/異戊醇(25∶24∶1),冰浴上人工晃動(dòng)5min,取上清液;在上清液中加入0.5倍體積25%PEG8000,4℃放置2 h(或過夜沉淀);12 000 r·min-1(4℃)離心10 min,沉淀用75%乙醇洗滌2次,8 000 r·min-1( 4℃)離心5 min,沉淀室溫晾干,根據(jù)DNA得量溶于60 uL~100 uL TE 緩沖液。

    1.2.4細(xì)菌16S rDNA基因V3區(qū)的擴(kuò)增。據(jù)NCBI數(shù)據(jù)庫公開的細(xì)菌基因組16S保守序列設(shè)計(jì)了2對細(xì)菌通用引物,并進(jìn)行巢式PCR擴(kuò)增。其中第一輪PCR的引物對為Eubac 10F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和Eubac 1507R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’),產(chǎn)物長度約為1.5 kbp。擴(kuò)增反應(yīng)體系25 ul,PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性4 min;94℃ 50 s,52℃ 50 s,72℃ 1 min,28個(gè)循環(huán);72℃總延伸10 min。第二輪擴(kuò)增以第一輪PCR產(chǎn)物為模板,以細(xì)菌16S rDNA V3區(qū)引物對BV34F(5’-TCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGA-3’)和BV56GC(5’-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCTCGAATTAAACCACATGCTCCAGCAATTAAACCACATGCTCCA-3’),產(chǎn)物長度約為400 bp。第2輪PCR反應(yīng)體系50 ul,PCR反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性4 min;94℃ 40 s,52℃ 45 s,72℃ 45 s,28個(gè)循環(huán);72℃總延伸10 min。

    1.2.5變性梯度凝膠電泳(DGGE)分析。GGE參數(shù)為:變性劑(尿素及去離子甲酰胺)梯度40%到60%,8%的聚丙烯酰胺凝膠。點(diǎn)樣量為30 uL已濃縮PCR產(chǎn)物,電泳在60℃,1倍 TAE(pH 8.0)緩沖液,100V電壓下進(jìn)行10 h。電泳結(jié)束后在EB中染色15 min,并用BIO IMAGING(美國UVP GelDoc-It Imaging Systems)的凝膠成像系統(tǒng)拍照。

    1.2.6數(shù)據(jù)處理與分析。驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)字化處理,并進(jìn)行Duncan法方差分析;用Quantity One軟件(Bio-Rad)對DGGE圖譜進(jìn)行數(shù)字化處理[16],按照如下公式計(jì)算多樣性指數(shù)Shannon-Wiener指數(shù)、Simpson指數(shù)、McIntosh多樣性指數(shù)[17]。其中:s——每泳道中的條帶數(shù)量;Pi——泳道中第i條帶灰度(height of the peak)占該泳道總灰度的比例;ni——泳道中第i條帶灰度;N——每泳道中所有條帶的總灰度。

    Simpson指數(shù):

    Shannon-Wiener指數(shù):

    McIntosh多樣性指數(shù):

    2 結(jié)果與分析

    2.1 連作年限對土壤酶活性的影響

    連作1 a-8 a土壤蔗糖酶活性整體呈現(xiàn)先升高后下降再略有回升的趨勢,連作2 a時(shí)土壤蔗糖酶活性達(dá)到最大值,之后顯著降低(p<0.01),并在連作第6 a達(dá)到最低,到第8 a又顯著增加,見圖1。此外,連作2 a、3 a蔗糖酶活性與其他連作年限相比差異達(dá)到極顯著水平(p<0.01),而連作4 a、5 a和6 a的蔗糖酶活性并無顯明差異,連作8 a蔗糖酶活性與連作5 a、6 a相比達(dá)到極限著差異(p<0.01)。

    圖1 不同連作年限土壤酶活性的變化Fig.1 The changes of soil enzyme activities during different continuous cropping years注:酶和淀粉酶標(biāo)于主坐標(biāo)軸,纖維素酶標(biāo)于次坐標(biāo)軸。

    土壤淀粉酶活性呈先升高后降低的趨勢,在連作2 a時(shí)達(dá)到最大值,與連作1a酶活性相比并無顯著差異,但與其它連作年限相比差異達(dá)到顯著水平(p<0.05);連作4 a-8 a的土壤淀粉酶活無顯著性差異。

    土壤纖維素酶活性在連作1 a-3 a時(shí)劇烈下降,連作1 a、2 a時(shí)的纖維素酶活性與其他連作年限相比存在顯著差異(p<0.05);連作1 a時(shí)最高,連作年限達(dá)到3 a以后,土壤纖維素酶活性呈相對穩(wěn)定狀態(tài)。

    2.2 不同連作年限的植煙土壤微生物學(xué)特征常規(guī)分離結(jié)果

    土壤細(xì)菌數(shù)量隨連作年限的延長,總體呈現(xiàn)減少的趨勢,見圖2;且連作1 a的煙田土壤細(xì)菌數(shù)量最多,與其他連作年限(連作5 a除外)有顯著差異(p<0.05);連作5 a的細(xì)菌數(shù)量與連作3 a、6 a和8 a達(dá)到顯著差異(p<0.05)。

    從圖2可以看出,土壤真菌隨著連作年限的增加其數(shù)量變化趨勢為升高-降低-升高-降低;連作3 a之前,土壤真菌數(shù)量逐漸增多,連作4 a、5 a數(shù)量有所增加,5 a之后再次減少。其中,連作3 a真菌數(shù)量與連作1 a和8 a達(dá)到顯著差異(p<0.05);連作6 a與8 a達(dá)到顯著差異(p<0.05)。

    圖2 不同連作年限土壤微生物數(shù)量的變化Fig.2 The changes of soil microbial number during different continuous cropping years

    由圖2可知,隨著連作年限的延長,土壤放線菌數(shù)量總體上逐漸減少,其變化趨勢與細(xì)菌相似,且連作3 a后,其數(shù)量顯著下降,之后趨于平穩(wěn);試驗(yàn)結(jié)果表明,連作1 a、2 a和3 a放線菌數(shù)量接近同一水平,且與其他連作年限差異顯著(p<0.05);連作4 a、5 a、6 a和8 a之間無顯著性差異(p<0.05)。

    2.3 不同連作年限土壤細(xì)菌的PCR擴(kuò)增

    細(xì)菌16S rDNA的第一輪PCR擴(kuò)增條帶亮度高,大小約為1 500 bp,陰性對照無條帶,且無非特異性擴(kuò)增,見圖3。第二輪擴(kuò)增的細(xì)菌V3區(qū)條帶片段的大小約為400 bp,陰性對照無條帶,且無非特異性擴(kuò)增,見圖4,能夠滿足進(jìn)一步的DGGE分析要求。

    2.4 不同連作年限煙田土樣的細(xì)菌的DGGE分析

    連作1 a-8 a的DNA泳道中條帶的個(gè)數(shù)和亮度不一,說明不同連作年限土壤樣品的細(xì)菌多樣性不同,見圖5。連作1 a-8 a的土樣中多樣性條帶數(shù)量在11條~17條不等,且隨著連作年限的延長,條帶數(shù)逐漸減少。其中連作1 a的條帶數(shù)最多,達(dá)到17條,連作8 a的條帶數(shù)最少,只有11條,但連作5 a樣品的條帶數(shù)多于4 a和6 a樣品,5 a后繼續(xù)減少。說明土壤細(xì)菌豐富度(S)隨植煙年限的增加呈下降趨勢。

    Shannon指數(shù)主要反映物種的豐富度,描述了土壤微生物群落功能多樣性相對多度的信息。由表1可以看出,不同連作年限之間的土樣的微生物的Shannon指數(shù)均存在極顯著差異(p<0.01),且連作1 a、2 a其值較大,之后有降低的趨勢,而到連作5a時(shí),又有所上升。Simpson指數(shù)反映了群落中常見的物種多少。不同連作年限之間土樣的微生物的Simpson指數(shù)均存在極顯著差異(p<0.01)。Mcintosh多樣性指數(shù)基于群落物種多維空間上的多樣性指數(shù)。不同連作年限之間的土樣的微生物的Mcintosh指數(shù)均存在極顯著差異(p<0.01)。

    圖3 連作1 a-8 a土樣細(xì)菌總DNA的第一輪PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.3 The first round PCR amplification result of soil bacteria DNA during different continuous cropping years of 1-8注:M:DL 2000 DNA Marker;1 a-8 a分別表示連作1年- 8年的煙田土樣;N:陰性對照

    圖4 連作1 a-8 a土樣細(xì)菌總DNA的第二輪PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.4 The second round PCR amplification result of soil bacteria DNA during different continuous cropping years of 1-8注:M:DL 2000 DNA Marker;1 a-8 a分別表示連作1年-8年的煙田土樣;N:陰性對照

    連作年限Continuous years香農(nóng)指數(shù)Shannon(H)辛普森指數(shù)Simpson(J)McIntosh多樣性指數(shù)McIntosh(Dmc)1 a4.066 6 A0.939 6 A0.760 4 A2 a3.973 0 B0.935 2 B0.752 2 B3 a3.877 3 D0.930 8 D0.743 7 D4 a3.659 7 F0.918 8 F0.721 7 F5 a3.968 3 C0.934 8 C0.751 5 C6 a3.674 5 E0.920 5 E0.725 0 E8 a3.420 3 G0.904 3 G0.698 0 G

    圖5 不同連作年限煙田土壤細(xì)菌群落V3區(qū)的DGGE指紋圖譜Fig.5 The DGGE finger-print of soil microbial V3 area during different continuous cropping years注:1 a-8 a分別表示連作1年-8年的煙田土樣

    3 討論與結(jié)論

    土壤酶作為衡量土壤健康狀況的一個(gè)必不可少的土壤微生物學(xué)指標(biāo)之一,越來越受到人們的高度重視,許多研究者在連作對土壤酶影響方面也進(jìn)行了很多研究。試驗(yàn)研究表明,短期連作(連作2 a-3 a)可使土壤淀粉酶和蔗糖酶活性升高;連作3 a以上時(shí),兩種酶活性顯著下降,處于較低水平,與賈新民等[18]、何川等[19]的結(jié)果相似;而纖維素酶呈持續(xù)下降趨勢,結(jié)果與胡汝曉等[20]研究結(jié)果一致。

    土壤微生物在反映土壤質(zhì)量狀況上有較高的靈敏度,是近年來研究土壤健康狀況不可或缺的生物學(xué)指標(biāo)[21]。眾多研究表明,連作可使土壤微生物數(shù)量和類群發(fā)生變化[22-24]。試驗(yàn)采用常規(guī)分離培養(yǎng)和分子技術(shù)兩種手段,研究不同連作年限間土壤微生物多樣性的變化。結(jié)果表明隨著連作年限的延長土壤可培養(yǎng)微生物數(shù)量逐漸減少,其中細(xì)菌數(shù)量降低尤為明顯,對連作表現(xiàn)出較高的敏感性,放線菌對連作反應(yīng)稍滯后,至第3 a時(shí)開始呈現(xiàn)降低趨勢,該結(jié)果與胡元森等[25]的研究結(jié)果極其相似;放線菌數(shù)量變化之所以較穩(wěn)定,可能是由于放線菌與細(xì)菌相比,生長較慢、受農(nóng)業(yè)技術(shù)措施的影響小也表現(xiàn)較慢的緣故[26]。而真菌數(shù)量的變化與與細(xì)菌數(shù)量變化村存在此消彼長的關(guān)系,與古戰(zhàn)朝等[27]結(jié)果相似??傮w上,隨著連作年限的增加,土壤微生物種類和數(shù)量、土壤酶活性呈下降趨勢,細(xì)菌和放線菌在微生物中所占的比例也呈下降趨勢,而真菌所占比例有所上升。一方面可能是因?yàn)檫B作導(dǎo)致土壤中養(yǎng)分含量失衡,造成土壤貧瘠,更適宜真菌生長[28];另一方面可能是由于土壤根系分泌物抑制土壤微生物生長發(fā)育造成的,而細(xì)菌和放線菌對此反應(yīng)較為敏感,真菌對此反應(yīng)不太敏感,導(dǎo)致土壤微生物中真菌比例增加。

    根據(jù)細(xì)菌16S rDNA的PCR-DGGE圖譜中條帶的位置和亮度的數(shù)字化結(jié)果計(jì)算了細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)多樣性指標(biāo)。連作1 a -8 a的條帶數(shù)11條 ~ 17條不等,且隨著植煙年限的延長,條帶數(shù)逐漸減少,而到達(dá)5 a時(shí)條帶數(shù)增加,5 a后減少。不同連作年限的變化規(guī)律相同,均隨著連作年限的延長,土樣的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)和McIntosh多樣性指數(shù)均在不斷下降,而到第5 a又有所回升,之后繼續(xù)下降,到第8 a降到最低。這與細(xì)菌的常規(guī)分離培養(yǎng)方法結(jié)果吻合。

    煙草連作對土壤微生物數(shù)量的影響與對土壤酶活性的影響具有一致性??赡苁怯捎跓煵葸B作引起了土壤微生物主要類群發(fā)生定向改變,進(jìn)而導(dǎo)致主要土壤酶活性的定向改變,這種改變將導(dǎo)致土壤生態(tài)系統(tǒng)中物質(zhì)轉(zhuǎn)化受到影響。

    研究認(rèn)為煙草連作年限應(yīng)在3 a以下,此年限內(nèi)土壤微生物的多樣性和活性較高。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 劉 方,卜通達(dá),何騰兵.連作烤煙土壤養(yǎng)分變化分析[J].貴州農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),1997,16(2),1-4.

    [2] 晉 艷,楊宇虹,段玉琪,等.烤煙連作對煙葉產(chǎn)量和質(zhì)量的影響研究初報(bào)[J].煙草科技,2002(1): 41-51.

    [3] 章家恩,劉文高,王偉勝.南亞熱帶不同植被根際微生物數(shù)量與根際土壤養(yǎng)分狀況[J].土壤與環(huán)境,2002,11(3),279-282.

    [4] 柴 強(qiáng),黃 鵬,黃商寶.間作對土壤微生物和酶活性的影響研究[J].草業(yè)學(xué)報(bào),2005,14(5): 105-110.

    [5] Whiting S N,De Souza M P,Terry N.Rhizosphere bacteria mobilize Zn for hyperaccumu1ation byThlaspicaerulescens[J].Environmental Science and Technology,2001,35(15): 3144-3l50.

    [6] Kennedy A C.Bacterial diversity in agroecosystems[J].Agriculture,Ecosystems and Environment,1999,74(1-3): 65-76.

    [7] 楊萬勤,王開運(yùn).土壤酶研究動(dòng)態(tài)與展望[J].應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào),2002,8(5): 564-570.

    [8] 姚槐應(yīng),黃昌勇.土壤微生物生態(tài)學(xué)及其實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京: 科學(xué)出版社,2006.

    [9] 劉恩科,趙秉強(qiáng),李秀英,等.長期施肥對土壤微生物量及土壤酶活性的影響[J].植物生態(tài)學(xué)報(bào),2008,32(1): 176-182.

    [10] 劉旭輝,覃 珊,覃勇榮.不同植被對石漠化地區(qū)土壤纖維素分解酶活性的影響[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2010,26(18): 335-340.

    [11] 嚴(yán)昶升.土壤肥力研究方法[M].北京: 農(nóng)業(yè)出版社,1988.

    [12] 張先蜿.土壤肥力研究進(jìn)展[M].見: 中國土壤學(xué)會(huì)第三屆土壤肥力學(xué)術(shù)討論會(huì)文集.北京: 中國科學(xué)技術(shù)出版社,1991.

    [13] 周世萍,段昌群,韓青輝,等.毒死蜱對土壤蔗糖酶活性的影響[J].生態(tài)環(huán)境,2005,14(5): 672-674.

    [14] 關(guān)松蔭.土壤酶及其研究法[M].北京: 農(nóng)業(yè)出版社,1986.

    [15] 中國科學(xué)院南京土壤研究所微生物室.土壤微生物研究法[M].北京: 北京科學(xué)出版社,1985.

    [16] 姚 健,楊永華,沈曉蓉,等.農(nóng)用化學(xué)品污染對土壤微生物群落DNA序列多樣性影響研究[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2000,20(6): 1021-1027.

    [17] 馬克平,劉玉明.生物群落多樣性的測度方法I α[J].生物多樣性,1994,2(4): 231-239.

    [18] 賈新民,于泉林,鄭玉龍,等.大豆連作土壤酶與土壤微生物和基礎(chǔ)肥力關(guān)系研究[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè),1995(10): 3l-32.

    [19] 何 川,劉國順,李祖良,等.連作對植煙土壤有機(jī)碳和酶活性的影響及其與土傳病害的關(guān)系[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2011,45(6):701-705.

    [20] 胡汝曉,趙松義,譚周進(jìn),等.煙草連作對稻田土壤微生物及酶的影響[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2007,21(5): 494-497.

    [21] 黎 寧,李華興,朱鳳嬌,等.菜園土壤微生物生態(tài)特征與土壤理化性質(zhì)的關(guān)系[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2006,17(2): 285-290.

    [22] 陳文新.土壤與環(huán)境微生物學(xué)[M].北京: 北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1990.

    [23] 劉芷宇.根際微域環(huán)境研究[J].土壤,1993,25(6): 225-230.

    [24] 馬云華,王秀峰,魏 珉,等.黃瓜連作土壤酸酚類物質(zhì)積累對土壤微生物和酶活性的影響[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào),2005,16(11): 2149-2153.

    [25] 胡元森,劉亞峰,吳 坤,等.黃瓜連作土壤微生物區(qū)系變化研究[J].土壤通報(bào),2006,37(1): 126-129.

    [26] 李仲強(qiáng),譚周進(jìn),夏海鰲.耕作制度對土壤微生物區(qū)系的影響[J].湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2001(2): 24-25.

    [27] 古戰(zhàn)朝,習(xí)向銀,劉紅杰,等.連作對烤煙根際土壤微生物數(shù)量和酶活性的動(dòng)態(tài)影響[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2011,45(5): 508-513.

    [28] 劉訓(xùn)理,王 超,吳 凡,等.煙草根際微生物研究[J].生態(tài)學(xué)報(bào),2006,26(2): 552-557.

    国产精品1区2区在线观看.| 大型黄色视频在线免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 成人av在线播放网站| 国产麻豆成人av免费视频| 91精品国产九色| 黄色欧美视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产老妇女一区| 久久热精品热| av中文乱码字幕在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久亚洲精品不卡| 少妇的逼好多水| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜激情福利司机影院| 精品日产1卡2卡| 久久国产精品人妻蜜桃| 男女那种视频在线观看| a级一级毛片免费在线观看| 日日夜夜操网爽| 韩国av一区二区三区四区| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 麻豆成人av在线观看| 全区人妻精品视频| 波野结衣二区三区在线| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 日韩欧美免费精品| 久久6这里有精品| 天美传媒精品一区二区| 亚洲国产精品成人综合色| 俺也久久电影网| 国产精品一区www在线观看 | 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲四区av| 国产日本99.免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲不卡免费看| 老女人水多毛片| 99精品在免费线老司机午夜| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美成人免费av一区二区三区| 日韩亚洲欧美综合| 人妻少妇偷人精品九色| 淫秽高清视频在线观看| 天美传媒精品一区二区| 久久久久久久午夜电影| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲av免费在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6 | 精品一区二区三区视频在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产av麻豆久久久久久久| 99视频精品全部免费 在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产精品,欧美在线| 欧美激情在线99| xxxwww97欧美| av专区在线播放| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 丰满的人妻完整版| 99九九线精品视频在线观看视频| 成人av在线播放网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久久久久久久中文| 成年女人看的毛片在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 露出奶头的视频| 成年人黄色毛片网站| 亚洲avbb在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩欧美国产在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| av天堂中文字幕网| 12—13女人毛片做爰片一| 精品福利观看| 久久久精品欧美日韩精品| 成年女人永久免费观看视频| 一夜夜www| 麻豆国产av国片精品| 中出人妻视频一区二区| 黄色欧美视频在线观看| 少妇高潮的动态图| ponron亚洲| 草草在线视频免费看| 综合色av麻豆| 亚洲va在线va天堂va国产| 干丝袜人妻中文字幕| 欧美潮喷喷水| 免费无遮挡裸体视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日韩欧美国产在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 欧美xxxx性猛交bbbb| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 精品一区二区免费观看| 国产精华一区二区三区| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲av中文av极速乱 | 亚洲经典国产精华液单| 91麻豆精品激情在线观看国产| 男插女下体视频免费在线播放| 国产色婷婷99| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美3d第一页| 亚洲经典国产精华液单| 免费高清视频大片| 很黄的视频免费| 搡老熟女国产l中国老女人| www日本黄色视频网| 91久久精品国产一区二区成人| 99久久成人亚洲精品观看| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品粉嫩美女一区| 午夜激情福利司机影院| 国产精品不卡视频一区二区| 97碰自拍视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 99视频精品全部免费 在线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 桃红色精品国产亚洲av| 99精品在免费线老司机午夜| 日本与韩国留学比较| 日本a在线网址| 日韩欧美在线二视频| 九九在线视频观看精品| 国产免费男女视频| 少妇丰满av| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲在线观看片| 国产免费一级a男人的天堂| 久久久久久大精品| 老司机福利观看| 国产高清不卡午夜福利| 国产一区二区在线av高清观看| 男人和女人高潮做爰伦理| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 国产精品久久久久久av不卡| 国产色爽女视频免费观看| ponron亚洲| 观看美女的网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国国产精品蜜臀av免费| 久久草成人影院| 国产精品国产高清国产av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 禁无遮挡网站| 91狼人影院| 成人国产麻豆网| 亚洲av免费高清在线观看| 在线国产一区二区在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 禁无遮挡网站| 国产精品亚洲美女久久久| 久久这里只有精品中国| 午夜精品久久久久久毛片777| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 又黄又爽又刺激的免费视频.| 又粗又爽又猛毛片免费看| 搡老妇女老女人老熟妇| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 嫩草影视91久久| 国产伦人伦偷精品视频| 国产精品久久久久久久久免| 国内精品美女久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久久国产成人精品二区| 又紧又爽又黄一区二区| 国产一区二区激情短视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 深夜精品福利| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品三级大全| 免费黄网站久久成人精品| 欧美区成人在线视频| 成人特级av手机在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产69精品久久久久777片| 免费av不卡在线播放| 有码 亚洲区| 欧美成人免费av一区二区三区| 成年女人看的毛片在线观看| 天美传媒精品一区二区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 村上凉子中文字幕在线| 午夜免费激情av| 国产亚洲精品av在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 久9热在线精品视频| 久久久久久久久久成人| 亚洲18禁久久av| 最新在线观看一区二区三区| 永久网站在线| 欧美激情在线99| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲国产色片| 精品福利观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩欧美在线二视频| 国产爱豆传媒在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 桃色一区二区三区在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产精品综合久久久久久久免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 人人妻人人看人人澡| 久久亚洲精品不卡| 欧美色欧美亚洲另类二区| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美一区二区亚洲| 亚洲在线自拍视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 欧美国产日韩亚洲一区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产成人影院久久av| 国产成人一区二区在线| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲不卡免费看| 国产三级中文精品| 最后的刺客免费高清国语| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲18禁久久av| 99久国产av精品| 12—13女人毛片做爰片一| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产不卡一卡二| 日韩 亚洲 欧美在线| 国语自产精品视频在线第100页| 五月玫瑰六月丁香| 婷婷丁香在线五月| 免费在线观看影片大全网站| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产av在哪里看| 亚洲va在线va天堂va国产| 特级一级黄色大片| 有码 亚洲区| 黄色丝袜av网址大全| 日本与韩国留学比较| 久久久色成人| 亚洲经典国产精华液单| 国产黄色小视频在线观看| 中文字幕久久专区| 久久久久久伊人网av| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品精品国产色婷婷| 久久久久久久亚洲中文字幕| 热99在线观看视频| 国产亚洲欧美98| 免费在线观看影片大全网站| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久久精品大字幕| 国产精品久久久久久精品电影| 性欧美人与动物交配| 久久久久久九九精品二区国产| 性插视频无遮挡在线免费观看| 日韩欧美在线乱码| 国产成人福利小说| 久久久久久久亚洲中文字幕| 丰满的人妻完整版| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产男靠女视频免费网站| 男人和女人高潮做爰伦理| 亚洲经典国产精华液单| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 尾随美女入室| 欧美一区二区国产精品久久精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 香蕉av资源在线| 一级av片app| 久久热精品热| 久久久国产成人免费| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久久久精品吃奶| 天天一区二区日本电影三级| 极品教师在线免费播放| 少妇的逼水好多| 亚洲精品成人久久久久久| 最近在线观看免费完整版| 在线观看66精品国产| 男女之事视频高清在线观看| 91狼人影院| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 免费电影在线观看免费观看| 在线播放国产精品三级| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产高潮美女av| 俺也久久电影网| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美日韩国产亚洲二区| 嫩草影院精品99| 天堂网av新在线| 欧美bdsm另类| 成人亚洲精品av一区二区| 国产av在哪里看| 精品久久久久久久末码| 看免费成人av毛片| 一夜夜www| 韩国av一区二区三区四区| 成年女人永久免费观看视频| 99久久精品一区二区三区| 深夜精品福利| 日韩欧美在线二视频| 亚洲精品日韩av片在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 国产男靠女视频免费网站| 国产麻豆成人av免费视频| av在线蜜桃| 国产精华一区二区三区| 亚洲电影在线观看av| 色精品久久人妻99蜜桃| 波野结衣二区三区在线| 一区二区三区免费毛片| 一级黄色大片毛片| 亚洲五月天丁香| 国产探花极品一区二区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜视频国产福利| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产探花在线观看一区二区| 变态另类丝袜制服| a级一级毛片免费在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 99精品在免费线老司机午夜| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产高清视频在线观看网站| 啦啦啦韩国在线观看视频| 88av欧美| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 高清日韩中文字幕在线| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99久久中文字幕三级久久日本| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品,欧美在线| 亚洲精品456在线播放app | 欧美成人一区二区免费高清观看| 国语自产精品视频在线第100页| 欧美性感艳星| 91在线观看av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 人妻久久中文字幕网| 午夜福利18| 精品无人区乱码1区二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产淫片久久久久久久久| 三级国产精品欧美在线观看| 最近在线观看免费完整版| 我的老师免费观看完整版| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产探花极品一区二区| 精品久久国产蜜桃| 真人做人爱边吃奶动态| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 欧美日本视频| 观看美女的网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久亚洲真实| 成人特级黄色片久久久久久久| 高清毛片免费观看视频网站| 两个人的视频大全免费| 三级毛片av免费| 亚洲精品亚洲一区二区| 成人鲁丝片一二三区免费| 人人妻人人澡欧美一区二区| 婷婷丁香在线五月| avwww免费| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久久久久久久久黄片| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲无线在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 嫩草影院新地址| 亚洲欧美日韩东京热| 91久久精品国产一区二区成人| h日本视频在线播放| 成人无遮挡网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲av免费高清在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 亚洲成人久久爱视频| 亚洲av中文av极速乱 | www.色视频.com| 国产 一区 欧美 日韩| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产在线精品亚洲第一网站| 床上黄色一级片| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 中文字幕熟女人妻在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 欧美日韩黄片免| 午夜爱爱视频在线播放| 日本与韩国留学比较| 极品教师在线视频| 国产精品一及| 国产精品野战在线观看| 国产精品女同一区二区软件 | 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产一级毛片七仙女欲春2| 麻豆成人午夜福利视频| 午夜影院日韩av| 精品日产1卡2卡| 色综合亚洲欧美另类图片| 如何舔出高潮| 国产私拍福利视频在线观看| av专区在线播放| 听说在线观看完整版免费高清| 成人永久免费在线观看视频| 久久亚洲真实| 色哟哟哟哟哟哟| 热99re8久久精品国产| 精品人妻视频免费看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品午夜福利在线看| 亚洲中文日韩欧美视频| 男人舔奶头视频| 久久精品国产亚洲网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 欧美成人性av电影在线观看| 精品福利观看| 亚洲第一电影网av| 丰满的人妻完整版| 可以在线观看毛片的网站| 色综合站精品国产| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 日本黄大片高清| 午夜激情欧美在线| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚州av有码| 亚洲中文日韩欧美视频| av视频在线观看入口| 久久香蕉精品热| 久99久视频精品免费| 亚洲成人精品中文字幕电影| 色尼玛亚洲综合影院| 国产成年人精品一区二区| 亚洲中文日韩欧美视频| 丝袜美腿在线中文| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产成人av教育| 亚洲成人中文字幕在线播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 成人国产麻豆网| 舔av片在线| 免费看光身美女| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日韩欧美 国产精品| 亚洲一区高清亚洲精品| 日日撸夜夜添| 在线国产一区二区在线| 毛片一级片免费看久久久久 | 欧美成人a在线观看| 精品一区二区三区人妻视频| 色视频www国产| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 免费在线观看日本一区| 男女之事视频高清在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 美女免费视频网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久国内精品自在自线图片| 欧美又色又爽又黄视频| 婷婷丁香在线五月| 精品乱码久久久久久99久播| 尾随美女入室| 97热精品久久久久久| 久久精品人妻少妇| 禁无遮挡网站| 村上凉子中文字幕在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 在线免费十八禁| 美女免费视频网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 观看美女的网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲欧美激情综合另类| 一进一出好大好爽视频| 日韩在线高清观看一区二区三区 | 久久久久久久久久成人| 桃红色精品国产亚洲av| 久久人人精品亚洲av| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲无线在线观看| 欧美最新免费一区二区三区| 国产麻豆成人av免费视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产探花在线观看一区二区| 日日干狠狠操夜夜爽| 色哟哟哟哟哟哟| 老司机午夜福利在线观看视频| 97超视频在线观看视频| 国产伦在线观看视频一区| 日韩高清综合在线| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 淫秽高清视频在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美xxxx性猛交bbbb| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 成人高潮视频无遮挡免费网站| 一本一本综合久久| 精品久久久久久久久亚洲 | 超碰av人人做人人爽久久| 成人特级黄色片久久久久久久| 色视频www国产| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲自拍偷在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 日本免费a在线| 全区人妻精品视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产成人一区二区在线| 午夜精品在线福利| 黄片wwwwww| 国产欧美日韩精品一区二区| 欧美成人a在线观看| 此物有八面人人有两片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 色综合站精品国产| 女同久久另类99精品国产91| 桃色一区二区三区在线观看| 深夜精品福利| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久99久视频精品免费| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜日韩欧美国产| 99riav亚洲国产免费| 日本与韩国留学比较| 天堂网av新在线| 男女边吃奶边做爰视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| xxxwww97欧美| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品久久电影中文字幕| a级毛片免费高清观看在线播放| 一级黄色大片毛片| 亚洲一区高清亚洲精品| АⅤ资源中文在线天堂| 白带黄色成豆腐渣| 国产日本99.免费观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国内精品久久久久精免费| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 大型黄色视频在线免费观看| 又爽又黄a免费视频| 观看美女的网站| 国产高清视频在线播放一区| 性欧美人与动物交配| 成人国产麻豆网| 成人精品一区二区免费| 性色avwww在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产精品一区二区免费欧美| 国产一区二区激情短视频| 国产高清不卡午夜福利| 麻豆成人午夜福利视频| 国产 一区精品| 日韩大尺度精品在线看网址| 欧美成人a在线观看| 久久人人精品亚洲av| 免费人成在线观看视频色| 一区二区三区免费毛片| 精品人妻视频免费看| a级一级毛片免费在线观看| 国产成人影院久久av| 日韩欧美精品v在线| 男女那种视频在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 97碰自拍视频| 亚洲在线自拍视频| 天天躁日日操中文字幕| 色在线成人网| 免费在线观看日本一区| 一夜夜www| 91午夜精品亚洲一区二区三区 |