沙門菌屬stn基因LAMP在食品衛(wèi)生檢驗中的應(yīng)用

王勝啟　馬艷艷　李靜等

[摘要] 目的 評價LAMP在食品衛(wèi)生沙門菌屬檢驗中的應(yīng)用效果。 方法 選擇145份食品標(biāo)本，采用LAMP方法和分離培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，比較兩種檢測方法的陽性率。 結(jié)果 LAMP陽性率為12.4%，分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。兩種方法的陽性符合率為77.8%，陰性符合率為91.9%。 結(jié)論LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗，具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點。

[關(guān)鍵詞] 沙門菌屬；環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增；分離培養(yǎng)；食品衛(wèi)生檢驗

[中圖分類號] R155.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）12-0114-02

[Abstract] Objective To evaluate application of salmonella LAMP in sanitary inspection of foodstuffs. Methods Selected 145 food samples were detected by LAMP and separated cultivation method. Positive rate was compared. Results Positive rate of LAMP was 12.4%， and that of separated cultivation method was 6.2%. There was significant difference （P < 0.05）. Positive coincidence rate of two methods was 77.8%， and negative coincidence rate was 91.9%. Conclusion Salmonella LAMP for sanitary inspection of foodstuffs shows rapid， convenience， high positive rate.

[Key words] Salmonella； LAMP； Sanitary inspection of foodstuffs

在世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首[1]。我國已發(fā)現(xiàn)的血清型有216個。傳統(tǒng)對沙門菌的檢測主要有分離培養(yǎng)方法，雖然準(zhǔn)確但是程序繁瑣，而免疫學(xué)方法的敏感度相對較低，PCR等敏感度和特異度均較高，但是設(shè)備要求較高，在基層不容易推廣應(yīng)用[2，3]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法（LAMP）是一種全新的核酸擴(kuò)增方法，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點[4]。本研究比較環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法檢測食品標(biāo)本沙門菌屬與分離培養(yǎng)法的一致性，探討其在食品衛(wèi)生檢驗中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

2013年6～8月選擇145份食品標(biāo)本，其中冷凍生肉20份，生鮮肉20份，熟肉20份，非發(fā)酵豆制品20份，速凍米面20份，生水產(chǎn)品10份，冰激凌10份，沙拉10份，鮮榨果汁10份，生食類蔬菜5份。陽性控制菌株：腸炎沙門菌。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本前增菌 將收集到的標(biāo)本取25 g，裝入無菌均質(zhì)袋中，拍擊式均質(zhì)器拍打2 min，37℃培養(yǎng)10 h。冷凍食品在45℃下解凍15 min。

1.2.2 分離培養(yǎng)法 將增菌后的145份標(biāo)本取1 mL，接種于10 mL的TTB增菌液中，42℃培養(yǎng)24 h。另取1 mL，接種于10 mL的SC增菌液中，37℃培養(yǎng)24 h。分別取增菌液1環(huán)，接種于BS平板和XLD平板，37℃培養(yǎng)24 h。取可疑菌落3個，接種于TSI、營養(yǎng)瓊脂平板和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h。對于生化反應(yīng)初步符合沙門菌特征的，從營養(yǎng)瓊脂平板上取可疑菌落，生理鹽水制成菌懸液，在微生物鑒定系統(tǒng)上進(jìn)行分析。如果BS平板及XLD平板上無可疑菌落，BS平板37℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h，如果仍無可疑菌落則為陰性。

1.2.3 LAMP檢測方法 取標(biāo)本前增菌液1 mL，離心，10 000 r/min，2 min，棄上清，提取核酸，另取1 μL上清液，制作待檢模板DNA。引物由百壹星辰（北京）生物科技有限公司提供。檢測145份標(biāo)本DNA。反應(yīng)結(jié)束后，肉眼觀察反應(yīng)液為綠色者為陽性，無色或者棕色者為陰性?；蛘卟捎秒娪痉椒ㄟM(jìn)行鑒定，電泳圖片顯示最小片段>100 bp的特征性梯狀為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同標(biāo)本兩種方法檢測陽性結(jié)果

見表1。LAMP陽性率為12.4%，分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

沙門菌病是指由各種類型沙門菌所引起的對人類、家畜及野生禽獸不同形式感染的總稱。感染沙門菌的人或帶菌者的糞便污染食品，可使人發(fā)生食物中毒[5，6]。細(xì)菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首，引起腸傷寒、腸胃炎和敗血癥，也可傳染人類以外的其他多種動物。沙門菌通過消化道傳染致病[7，8]。

環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)是2000年由日本榮研化學(xué)株式會社開發(fā)的一種新的恒溫核酸擴(kuò)增方法，其針對靶基因的6個區(qū)域設(shè)計4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶，在等溫條件下保溫30～60 min，完成擴(kuò)增反應(yīng)。與常規(guī)PCR相比，不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點。其靈敏度、特異性和檢測范圍等甚至優(yōu)于PCR技術(shù)，不依賴任何專門的儀器設(shè)備，可以現(xiàn)場高通量快速檢測，檢測成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR。袁發(fā)滸等[9]探討了腸炎沙門菌的LAMP檢測方法的建立，認(rèn)為LAMP法可快速特異地檢測出腸炎沙門菌，該方法反應(yīng)靈敏度高，可用于食品中腸炎沙門菌的快速檢測。黃金海等[10]探討LAMP快速檢測方法在食品中沙門菌檢測中的應(yīng)用，結(jié)果顯示該方法僅對沙門菌產(chǎn)生特異性擴(kuò)增，所建立的檢測沙門菌方法具有較高的特異性與靈敏性，操作簡單、快速，可用于沙門菌污染食品的快速檢測。李雪等[11]分別采用LAMP法、PCR和國標(biāo)法對市場上銷售的雞蛋蛋殼及內(nèi)容物進(jìn)行沙門菌的檢測，LAMP和PCR的沙門菌檢出率均高于國標(biāo)法，而LAMP法敏感性、特異性和符合率也均高于PCR法，因此，LAMP是一種快速、敏感和高度特異性的沙門菌檢測方法。田楨干等[12]探討了LAMP技術(shù)快速檢測沙門菌方法的建立及其應(yīng)用，沙門菌屬6種不同血清型菌株LAMP檢測都呈陽性，其他4種腸道細(xì)菌均為陰性；LAMP法的靈敏度與RT-PCR方法接近，達(dá)103 CFU/mL，是膠體金檢測法的100～1000倍；54株沙門菌臨床分離樣本實驗符合率達(dá)100%。

細(xì)菌分離培養(yǎng)是常用的一種檢測方法，但是其程序復(fù)雜，不能用于快速檢測，其得出陽性結(jié)果需要7 d時間，并且細(xì)菌分離需要將兩次增菌后再分離培養(yǎng)，其生化鑒定程序繁瑣，鑒定系統(tǒng)昂貴，不利于在基層推廣[9，10]。LAMP法對前增菌液進(jìn)行核酸提取后就可以進(jìn)行擴(kuò)增，在60 min就可以完成擴(kuò)增，在24 h內(nèi)就可以檢出沙門菌屬，具有更加快捷的優(yōu)點。并且在結(jié)果的判定中，可以肉眼觀察，更方便和直觀。本研究將LAMP方法與細(xì)菌分離培養(yǎng)方法進(jìn)行比較，對145份食品進(jìn)行沙門菌的檢測。結(jié)果顯示，兩種檢測方法的陽性率存在顯著差異，LAMP法的陽性率顯著高于細(xì)菌分離培養(yǎng)法，而以細(xì)胞分離培養(yǎng)做參照，對兩種檢測方法的陽性符合率和陰性符合率進(jìn)行分析，顯示兩種方法的陽性符合率為77.8%，而兩組的陰性符合率高達(dá)91.9%。

綜上所述，LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗，具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點，可以用于食品衛(wèi)生的初步檢驗，對于陽性結(jié)果的可進(jìn)一步通過細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行菌株分離及鑒定分型。endprint

[摘要] 目的 評價LAMP在食品衛(wèi)生沙門菌屬檢驗中的應(yīng)用效果。 方法 選擇145份食品標(biāo)本，采用LAMP方法和分離培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，比較兩種檢測方法的陽性率。 結(jié)果 LAMP陽性率為12.4%，分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。兩種方法的陽性符合率為77.8%，陰性符合率為91.9%。 結(jié)論LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗，具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點。

[關(guān)鍵詞] 沙門菌屬；環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增；分離培養(yǎng)；食品衛(wèi)生檢驗

[中圖分類號] R155.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）12-0114-02

[Abstract] Objective To evaluate application of salmonella LAMP in sanitary inspection of foodstuffs. Methods Selected 145 food samples were detected by LAMP and separated cultivation method. Positive rate was compared. Results Positive rate of LAMP was 12.4%， and that of separated cultivation method was 6.2%. There was significant difference （P < 0.05）. Positive coincidence rate of two methods was 77.8%， and negative coincidence rate was 91.9%. Conclusion Salmonella LAMP for sanitary inspection of foodstuffs shows rapid， convenience， high positive rate.

[Key words] Salmonella； LAMP； Sanitary inspection of foodstuffs

在世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首[1]。我國已發(fā)現(xiàn)的血清型有216個。傳統(tǒng)對沙門菌的檢測主要有分離培養(yǎng)方法，雖然準(zhǔn)確但是程序繁瑣，而免疫學(xué)方法的敏感度相對較低，PCR等敏感度和特異度均較高，但是設(shè)備要求較高，在基層不容易推廣應(yīng)用[2，3]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法（LAMP）是一種全新的核酸擴(kuò)增方法，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點[4]。本研究比較環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法檢測食品標(biāo)本沙門菌屬與分離培養(yǎng)法的一致性，探討其在食品衛(wèi)生檢驗中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

2013年6～8月選擇145份食品標(biāo)本，其中冷凍生肉20份，生鮮肉20份，熟肉20份，非發(fā)酵豆制品20份，速凍米面20份，生水產(chǎn)品10份，冰激凌10份，沙拉10份，鮮榨果汁10份，生食類蔬菜5份。陽性控制菌株：腸炎沙門菌。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本前增菌 將收集到的標(biāo)本取25 g，裝入無菌均質(zhì)袋中，拍擊式均質(zhì)器拍打2 min，37℃培養(yǎng)10 h。冷凍食品在45℃下解凍15 min。

1.2.2 分離培養(yǎng)法 將增菌后的145份標(biāo)本取1 mL，接種于10 mL的TTB增菌液中，42℃培養(yǎng)24 h。另取1 mL，接種于10 mL的SC增菌液中，37℃培養(yǎng)24 h。分別取增菌液1環(huán)，接種于BS平板和XLD平板，37℃培養(yǎng)24 h。取可疑菌落3個，接種于TSI、營養(yǎng)瓊脂平板和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h。對于生化反應(yīng)初步符合沙門菌特征的，從營養(yǎng)瓊脂平板上取可疑菌落，生理鹽水制成菌懸液，在微生物鑒定系統(tǒng)上進(jìn)行分析。如果BS平板及XLD平板上無可疑菌落，BS平板37℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h，如果仍無可疑菌落則為陰性。

1.2.3 LAMP檢測方法 取標(biāo)本前增菌液1 mL，離心，10 000 r/min，2 min，棄上清，提取核酸，另取1 μL上清液，制作待檢模板DNA。引物由百壹星辰（北京）生物科技有限公司提供。檢測145份標(biāo)本DNA。反應(yīng)結(jié)束后，肉眼觀察反應(yīng)液為綠色者為陽性，無色或者棕色者為陰性。或者采用電泳方法進(jìn)行鑒定，電泳圖片顯示最小片段>100 bp的特征性梯狀為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同標(biāo)本兩種方法檢測陽性結(jié)果

見表1。LAMP陽性率為12.4%，分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

沙門菌病是指由各種類型沙門菌所引起的對人類、家畜及野生禽獸不同形式感染的總稱。感染沙門菌的人或帶菌者的糞便污染食品，可使人發(fā)生食物中毒[5，6]。細(xì)菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首，引起腸傷寒、腸胃炎和敗血癥，也可傳染人類以外的其他多種動物。沙門菌通過消化道傳染致病[7，8]。

環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)是2000年由日本榮研化學(xué)株式會社開發(fā)的一種新的恒溫核酸擴(kuò)增方法，其針對靶基因的6個區(qū)域設(shè)計4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶，在等溫條件下保溫30～60 min，完成擴(kuò)增反應(yīng)。與常規(guī)PCR相比，不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點。其靈敏度、特異性和檢測范圍等甚至優(yōu)于PCR技術(shù)，不依賴任何專門的儀器設(shè)備，可以現(xiàn)場高通量快速檢測，檢測成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR。袁發(fā)滸等[9]探討了腸炎沙門菌的LAMP檢測方法的建立，認(rèn)為LAMP法可快速特異地檢測出腸炎沙門菌，該方法反應(yīng)靈敏度高，可用于食品中腸炎沙門菌的快速檢測。黃金海等[10]探討LAMP快速檢測方法在食品中沙門菌檢測中的應(yīng)用，結(jié)果顯示該方法僅對沙門菌產(chǎn)生特異性擴(kuò)增，所建立的檢測沙門菌方法具有較高的特異性與靈敏性，操作簡單、快速，可用于沙門菌污染食品的快速檢測。李雪等[11]分別采用LAMP法、PCR和國標(biāo)法對市場上銷售的雞蛋蛋殼及內(nèi)容物進(jìn)行沙門菌的檢測，LAMP和PCR的沙門菌檢出率均高于國標(biāo)法，而LAMP法敏感性、特異性和符合率也均高于PCR法，因此，LAMP是一種快速、敏感和高度特異性的沙門菌檢測方法。田楨干等[12]探討了LAMP技術(shù)快速檢測沙門菌方法的建立及其應(yīng)用，沙門菌屬6種不同血清型菌株LAMP檢測都呈陽性，其他4種腸道細(xì)菌均為陰性；LAMP法的靈敏度與RT-PCR方法接近，達(dá)103 CFU/mL，是膠體金檢測法的100～1000倍；54株沙門菌臨床分離樣本實驗符合率達(dá)100%。

細(xì)菌分離培養(yǎng)是常用的一種檢測方法，但是其程序復(fù)雜，不能用于快速檢測，其得出陽性結(jié)果需要7 d時間，并且細(xì)菌分離需要將兩次增菌后再分離培養(yǎng)，其生化鑒定程序繁瑣，鑒定系統(tǒng)昂貴，不利于在基層推廣[9，10]。LAMP法對前增菌液進(jìn)行核酸提取后就可以進(jìn)行擴(kuò)增，在60 min就可以完成擴(kuò)增，在24 h內(nèi)就可以檢出沙門菌屬，具有更加快捷的優(yōu)點。并且在結(jié)果的判定中，可以肉眼觀察，更方便和直觀。本研究將LAMP方法與細(xì)菌分離培養(yǎng)方法進(jìn)行比較，對145份食品進(jìn)行沙門菌的檢測。結(jié)果顯示，兩種檢測方法的陽性率存在顯著差異，LAMP法的陽性率顯著高于細(xì)菌分離培養(yǎng)法，而以細(xì)胞分離培養(yǎng)做參照，對兩種檢測方法的陽性符合率和陰性符合率進(jìn)行分析，顯示兩種方法的陽性符合率為77.8%，而兩組的陰性符合率高達(dá)91.9%。

綜上所述，LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗，具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點，可以用于食品衛(wèi)生的初步檢驗，對于陽性結(jié)果的可進(jìn)一步通過細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行菌株分離及鑒定分型。endprint

[摘要] 目的 評價LAMP在食品衛(wèi)生沙門菌屬檢驗中的應(yīng)用效果。 方法 選擇145份食品標(biāo)本，采用LAMP方法和分離培養(yǎng)法進(jìn)行檢測，比較兩種檢測方法的陽性率。 結(jié)果 LAMP陽性率為12.4%，分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。兩種方法的陽性符合率為77.8%，陰性符合率為91.9%。 結(jié)論LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗，具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點。

[關(guān)鍵詞] 沙門菌屬；環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增；分離培養(yǎng)；食品衛(wèi)生檢驗

[中圖分類號] R155.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）12-0114-02

[Abstract] Objective To evaluate application of salmonella LAMP in sanitary inspection of foodstuffs. Methods Selected 145 food samples were detected by LAMP and separated cultivation method. Positive rate was compared. Results Positive rate of LAMP was 12.4%， and that of separated cultivation method was 6.2%. There was significant difference （P < 0.05）. Positive coincidence rate of two methods was 77.8%， and negative coincidence rate was 91.9%. Conclusion Salmonella LAMP for sanitary inspection of foodstuffs shows rapid， convenience， high positive rate.

[Key words] Salmonella； LAMP； Sanitary inspection of foodstuffs

在世界各國的種類細(xì)菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首[1]。我國已發(fā)現(xiàn)的血清型有216個。傳統(tǒng)對沙門菌的檢測主要有分離培養(yǎng)方法，雖然準(zhǔn)確但是程序繁瑣，而免疫學(xué)方法的敏感度相對較低，PCR等敏感度和特異度均較高，但是設(shè)備要求較高，在基層不容易推廣應(yīng)用[2，3]。環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法（LAMP）是一種全新的核酸擴(kuò)增方法，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點[4]。本研究比較環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法檢測食品標(biāo)本沙門菌屬與分離培養(yǎng)法的一致性，探討其在食品衛(wèi)生檢驗中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

2013年6～8月選擇145份食品標(biāo)本，其中冷凍生肉20份，生鮮肉20份，熟肉20份，非發(fā)酵豆制品20份，速凍米面20份，生水產(chǎn)品10份，冰激凌10份，沙拉10份，鮮榨果汁10份，生食類蔬菜5份。陽性控制菌株：腸炎沙門菌。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本前增菌 將收集到的標(biāo)本取25 g，裝入無菌均質(zhì)袋中，拍擊式均質(zhì)器拍打2 min，37℃培養(yǎng)10 h。冷凍食品在45℃下解凍15 min。

1.2.2 分離培養(yǎng)法 將增菌后的145份標(biāo)本取1 mL，接種于10 mL的TTB增菌液中，42℃培養(yǎng)24 h。另取1 mL，接種于10 mL的SC增菌液中，37℃培養(yǎng)24 h。分別取增菌液1環(huán)，接種于BS平板和XLD平板，37℃培養(yǎng)24 h。取可疑菌落3個，接種于TSI、營養(yǎng)瓊脂平板和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24 h。對于生化反應(yīng)初步符合沙門菌特征的，從營養(yǎng)瓊脂平板上取可疑菌落，生理鹽水制成菌懸液，在微生物鑒定系統(tǒng)上進(jìn)行分析。如果BS平板及XLD平板上無可疑菌落，BS平板37℃繼續(xù)培養(yǎng)24 h，如果仍無可疑菌落則為陰性。

1.2.3 LAMP檢測方法 取標(biāo)本前增菌液1 mL，離心，10 000 r/min，2 min，棄上清，提取核酸，另取1 μL上清液，制作待檢模板DNA。引物由百壹星辰（北京）生物科技有限公司提供。檢測145份標(biāo)本DNA。反應(yīng)結(jié)束后，肉眼觀察反應(yīng)液為綠色者為陽性，無色或者棕色者為陰性?；蛘卟捎秒娪痉椒ㄟM(jìn)行鑒定，電泳圖片顯示最小片段>100 bp的特征性梯狀為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同標(biāo)本兩種方法檢測陽性結(jié)果

見表1。LAMP陽性率為12.4%，分離培養(yǎng)法陽性率為6.2%。兩種方法比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

沙門菌病是指由各種類型沙門菌所引起的對人類、家畜及野生禽獸不同形式感染的總稱。感染沙門菌的人或帶菌者的糞便污染食品，可使人發(fā)生食物中毒[5，6]。細(xì)菌性食物中毒中，沙門菌引起的食物中毒常列榜首，引起腸傷寒、腸胃炎和敗血癥，也可傳染人類以外的其他多種動物。沙門菌通過消化道傳染致病[7，8]。

環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)是2000年由日本榮研化學(xué)株式會社開發(fā)的一種新的恒溫核酸擴(kuò)增方法，其針對靶基因的6個區(qū)域設(shè)計4種特異引物，利用一種鏈置換DNA聚合酶，在等溫條件下保溫30～60 min，完成擴(kuò)增反應(yīng)。與常規(guī)PCR相比，不需要模板的熱變性、溫度循環(huán)、電泳及紫外觀察等，具有簡單、快速、特異性強(qiáng)的特點。其靈敏度、特異性和檢測范圍等甚至優(yōu)于PCR技術(shù)，不依賴任何專門的儀器設(shè)備，可以現(xiàn)場高通量快速檢測，檢測成本遠(yuǎn)低于熒光定量PCR。袁發(fā)滸等[9]探討了腸炎沙門菌的LAMP檢測方法的建立，認(rèn)為LAMP法可快速特異地檢測出腸炎沙門菌，該方法反應(yīng)靈敏度高，可用于食品中腸炎沙門菌的快速檢測。黃金海等[10]探討LAMP快速檢測方法在食品中沙門菌檢測中的應(yīng)用，結(jié)果顯示該方法僅對沙門菌產(chǎn)生特異性擴(kuò)增，所建立的檢測沙門菌方法具有較高的特異性與靈敏性，操作簡單、快速，可用于沙門菌污染食品的快速檢測。李雪等[11]分別采用LAMP法、PCR和國標(biāo)法對市場上銷售的雞蛋蛋殼及內(nèi)容物進(jìn)行沙門菌的檢測，LAMP和PCR的沙門菌檢出率均高于國標(biāo)法，而LAMP法敏感性、特異性和符合率也均高于PCR法，因此，LAMP是一種快速、敏感和高度特異性的沙門菌檢測方法。田楨干等[12]探討了LAMP技術(shù)快速檢測沙門菌方法的建立及其應(yīng)用，沙門菌屬6種不同血清型菌株LAMP檢測都呈陽性，其他4種腸道細(xì)菌均為陰性；LAMP法的靈敏度與RT-PCR方法接近，達(dá)103 CFU/mL，是膠體金檢測法的100～1000倍；54株沙門菌臨床分離樣本實驗符合率達(dá)100%。

細(xì)菌分離培養(yǎng)是常用的一種檢測方法，但是其程序復(fù)雜，不能用于快速檢測，其得出陽性結(jié)果需要7 d時間，并且細(xì)菌分離需要將兩次增菌后再分離培養(yǎng)，其生化鑒定程序繁瑣，鑒定系統(tǒng)昂貴，不利于在基層推廣[9，10]。LAMP法對前增菌液進(jìn)行核酸提取后就可以進(jìn)行擴(kuò)增，在60 min就可以完成擴(kuò)增，在24 h內(nèi)就可以檢出沙門菌屬，具有更加快捷的優(yōu)點。并且在結(jié)果的判定中，可以肉眼觀察，更方便和直觀。本研究將LAMP方法與細(xì)菌分離培養(yǎng)方法進(jìn)行比較，對145份食品進(jìn)行沙門菌的檢測。結(jié)果顯示，兩種檢測方法的陽性率存在顯著差異，LAMP法的陽性率顯著高于細(xì)菌分離培養(yǎng)法，而以細(xì)胞分離培養(yǎng)做參照，對兩種檢測方法的陽性符合率和陰性符合率進(jìn)行分析，顯示兩種方法的陽性符合率為77.8%，而兩組的陰性符合率高達(dá)91.9%。

綜上所述，LAMP法用于食品衛(wèi)生沙門菌屬的檢驗，具有快速、方便、陽性率高等優(yōu)點，可以用于食品衛(wèi)生的初步檢驗，對于陽性結(jié)果的可進(jìn)一步通過細(xì)菌培養(yǎng)法進(jìn)行菌株分離及鑒定分型。endprint