ELISA檢測乙肝兩對半的影響因素

陳金圖

福建省泉州市第一醫(yī)院檢驗科 福建 泉州 362000

ELISA檢測乙肝兩對半的影響因素

陳金圖

福建省泉州市第一醫(yī)院檢驗科 福建 泉州 362000

目的:對Elisa法對乙肝兩對半的檢測產(chǎn)生的影響，做有關(guān)的分析。方法:分析了我院自2013年9月到2014年9月接收的乙肝兩對半檢測患者124例，根據(jù)其相關(guān)的資料分析Elisa對乙肝兩對半檢測產(chǎn)生的影響。結(jié)果:得出Elisa法檢測乙肝兩對半的影響因素有試劑盒對檢測結(jié)果的影響、檢測人員和采集的標本對檢測結(jié)果的影響、加樣過程中的影響、藥物的影響等。結(jié)論:對于乙肝兩對半的檢測，采用Elisa法檢測需要根據(jù)其具體的影響因素，排出對檢測結(jié)果的影響。

Elisa法乙肝兩對半影響因素處理方法

Elisa法由于其檢測方法的特異性比較強，較高的靈敏性，在操作時世紀較穩(wěn)定等特點被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)中對乙肝兩對半的檢測當(dāng)中，在現(xiàn)在醫(yī)學(xué)水平發(fā)展比較先進的時代，Elisa法檢測乙肝兩對半仍存在許多影響因素，比如實驗環(huán)境的差異，檢測操作人員的熟練程度以及所用試劑盒的質(zhì)量不同等等，這些因素的存在都對乙肝兩對半的檢測產(chǎn)生了影響，使得得到的檢測結(jié)果難以分辨出是否是假陽性的可能［1］，以下就對Elisa法對乙肝兩對半檢測的影響做有關(guān)分析。

1.資料和方法

1.1 一般資料

對我院2013年9月到2014年9月接收的124例體檢患者進行分析，其中男性患者占60例，女性患者占64例，其年齡在22歲到85歲之間，其平均年齡為45.6±11.7歲。

1.2 方法

對于要檢測乙肝兩對半的患者要求需要10小時的空腹，抽取其肘正中靜脈血3.0毫升，自行凝固后，于專用抗凝管混勻，1h內(nèi)以3000r/min離心10min分離血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測乙肝免疫學(xué)標志物，包括表面抗原(HbsAg)、表面抗體(Hb－sAb)、e抗原(HbeAg)、e抗體(HbeAb)、核心抗體(HbcAb)。

2.結(jié)果

該組124例體檢患者當(dāng)中傳染性大三陽占3.4%，雙陽的人數(shù)占9.6%，小三陽的占10.5%，其檢測結(jié)果如下:

項目 HBsAg(+) HBsAb(+) HBeAg(+) HBeAb(+) HBcAb(+)例數(shù)647 3 2 2陽性率3.5 37.6 2.6 0.9 1.2

采用軟件SPSS 12.0建立數(shù)據(jù)庫進行統(tǒng)計學(xué)處理，通過X2檢驗和t檢驗分析，P＜0.05，表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3.討論

對檢測結(jié)果分析，使用Elisa法檢測乙肝兩對半結(jié)果的因素主要有以下幾種［2－3］:

(1)試劑盒對檢測結(jié)果的影響和如何處理。ELISA方法檢測乙肝兩對半中，試劑盒質(zhì)量是基本保證實驗結(jié)果的準確性，由于商家試劑盒的特異性，靈敏度、穩(wěn)定性和精度等，存在一定的差異，因此，為了避免對檢測結(jié)果的影響，應(yīng)采取下列方法的影響:工具包應(yīng)該實驗中使用的國家相關(guān)部門檢查產(chǎn)品，每個實驗室都可以根據(jù)自己的實際情況，盡量選擇好的靈敏度，特異性強，操作簡單的裝備，和符合質(zhì)量要求的有關(guān)部門，同時，設(shè)備保存在2℃－8℃的環(huán)境中，并使溫度記錄，測試時，應(yīng)該把包放在室溫下，平衡0.5h，以確保一致性和準確性的反應(yīng)時間。

(2)檢測人員和次啊及的標本對檢測結(jié)果的影響和處理方法。避免檢驗人員的影響，提高實驗?zāi)芰?，可以采取以下措?檢查人員做好培訓(xùn)，使檢驗人員能掌握ELISA方法，實驗原理的設(shè)備性能，正確應(yīng)用測量儀器和操作方法，熟悉質(zhì)量控制方法和控制的原則處理。紅細胞的樣品壞了，并且可以釋放產(chǎn)生的酶活性氧化物干擾物質(zhì)，和一定的顏色反應(yīng)顯色劑，使結(jié)果出現(xiàn)假陰性或假陽性，與此同時，ELISA方法，管的重復(fù)應(yīng)用，很容易造成交叉污染，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。因此，為了避免實驗標本的影響，可以采用以下方法:樣本收集，盡量避免溶血，不要應(yīng)用抗凝劑，特別是肝素抗凝不可用時，體外是最好的應(yīng)用抗凝一次性真空管，標本集后，離心機，避免纖維蛋白不能完全凍結(jié)，影響結(jié)果。未能實現(xiàn)相關(guān)的檢驗樣本，血液標本存儲時，應(yīng)該盡量保持在8℃溫度2℃的環(huán)境中，時間不超過1周，1周內(nèi)如果無法檢測血清分離，它可以存儲在一個溫度20℃，環(huán)境，節(jié)省時間1年，冷凍標本不能反復(fù)凍融的操作發(fā)生。

(3)加樣過程中的影響和處理方法。精度測試實驗，吸收數(shù)量和吸嘴清潔與否將直接影響測試結(jié)果，為了避免樣品的影響過程中，可以采用以下方法:添加使用吸管，嚴格按照相關(guān)程序來實現(xiàn)，當(dāng)添加標本反應(yīng)孔應(yīng)該吸點與孔壁的反應(yīng)達到了第三的位置，其他的反應(yīng)孔，不污染放入溫育箱之前，應(yīng)該使用振蕩器加上樣品混合超過0.5分鐘。

(4)藥物的影響和處理方法。乙肝兩對半試劑的敏感性和特異性，不同的廠商生產(chǎn)有一定差異，數(shù)據(jù)顯示，不同制造商試劑的特異性和敏感性分別為89.4% ～99.3%，78% ～89%存在較大差異。一些制造商酶標板孔之間的差異值大于15%;標志酶活性和穩(wěn)定性的顏色液體是不好的。使用的試劑不可避免地導(dǎo)致假陽性或假陰性，選擇高質(zhì)量的試劑的關(guān)鍵之一是保證結(jié)果的準確性。不同方法的檢測試劑，可以使兩對半一些不同的結(jié)果。例如:在ELISA檢測表面抗原陰性結(jié)果用于實際工作，和電化學(xué)測試呈陽性。除了靈敏度的方法，使用單一或多克隆抗體試劑阻力的差異。薄層電阻突變亞型抗原或乙型肝炎標志物檢測的差異，顯示制造商的代理準備亞型的類型和濃度應(yīng)考慮的問題。

(5)檢測結(jié)果讀取的影響和處理。測試結(jié)果判斷通常是在終止液添加10分鐘完成，防止洞結(jié)晶現(xiàn)象，從而影響酶標準儀器進行測試。同時，為了保證測試結(jié)果的準確性，操作員應(yīng)該高責(zé)任、試劑的有效性并確保質(zhì)量，如果審查后，異常的結(jié)果，處理樣本集合，然后給評論，整個實驗，應(yīng)該添加到外部質(zhì)量控制血清，嚴格控制質(zhì)量，為所有記錄的詳細審查。

［1］陳宏安，門自起，汪盈，蔣文娟.用ELISA評價膠體金測試卡檢測乙型肝炎病毒血清標志物兩對半的性能［J］.西南軍醫(yī).2009(05)

［2］解殿清，瞿靜.ELISA法乙肝兩對半定性檢測影響因素探討［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用.2010(11)

［3］吳麗娟.溶血標本對ELISA檢測乙肝表面抗原的影響［J］.赤峰學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版).2012(06)

R446.1

B

1009－6019(2014)11－0064－01