HE和雙酶染色對比觀察SD大鼠腎的血管淋巴管分布

郭海旺

(河南護(hù)理職業(yè)學(xué)院,河南安陽455000)

HE和雙酶染色對比觀察SD大鼠腎的血管淋巴管分布

郭海旺

(河南護(hù)理職業(yè)學(xué)院,河南安陽455000)

目的 觀察大鼠腎脈管系統(tǒng)的分布特點,為尿液形成和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)重吸收機(jī)制的分析及腎病的臨床治療提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。方法 通過HE染色和5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶酶組織化學(xué)雙重染色相對比,對大鼠腎組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行光鏡觀察。結(jié)果 觀察發(fā)現(xiàn)在腎小管周圍分布有大量毛細(xì)淋巴管。結(jié)論 推測腎小管液內(nèi)的蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì),可能通過淋巴管道重吸收。

腎臟;毛細(xì)血管;淋巴管;大鼠

器官內(nèi)的脈管系統(tǒng),在物質(zhì)轉(zhuǎn)運中起著重要作用。作者通過HE染色和5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶酶組織化學(xué)雙重染色,對SD大鼠腎組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行光鏡對比觀察,探討腎組織結(jié)構(gòu)特點及其功能意義,揭示腎脈管系統(tǒng)的構(gòu)筑特點,為尿液形成和蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)重吸收機(jī)制的分析及腎病的臨床治療,提供形態(tài)學(xué)方面的依據(jù)。

1 材料和方法

選取健康成年SD大鼠8只,麻醉后立即取出腎組織,做冷凍切片,進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE)染色,對相鄰切片進(jìn)行5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶(5′-Nase-ALPase)酶組織化學(xué)雙重染色,光鏡觀察腎組織的細(xì)微結(jié)構(gòu),重點觀察其脈管系統(tǒng)的構(gòu)筑特點。

2 觀察結(jié)果

2.1 HE染色切片的光鏡觀察

肉眼觀察切片,腎皮質(zhì)和腎髓質(zhì)分界明顯,大鼠的腎臟只有一個腎錐體[1]。在低倍鏡下觀察,腎臟表面為一薄層結(jié)締組織被膜,實質(zhì)與間質(zhì)結(jié)締組織分界不明顯;有髓放線,朝向髓質(zhì)方向逐漸增粗,無腎柱;淺表腎小體數(shù)量較多,體積較小,髓旁腎小體數(shù)量少,體積較大。腎小管橫斷面較多,管壁均由單層上皮圍成,各段腎小管的基膜厚度不同,遠(yuǎn)端小管處的常較厚,近端小管的次之。近端小管管壁為單層立方或錐形細(xì)胞,體積較大,細(xì)胞分界不清,胞質(zhì)強(qiáng)嗜酸性,細(xì)胞游離面有刷狀緣。細(xì)段管徑較細(xì),由單層扁平上皮細(xì)胞圍成,胞質(zhì)著色較淺,核扁圓形凸向管腔,無刷狀緣。遠(yuǎn)端小管在光鏡切片中斷面較少,管徑較大,管壁為單層立方上皮細(xì)胞,細(xì)胞體積較小,核圓近腔面,胞質(zhì)著色較淺,細(xì)胞分界較清晰。因制片原因,近曲小管管腔常呈星形,遠(yuǎn)曲小管很少。集合管上皮細(xì)胞胞質(zhì)清亮,境界清晰[2]。在腎皮質(zhì)內(nèi)的間質(zhì)較少,腎髓質(zhì)深部的間質(zhì)較多。在腎錐體的底部附近,沿腎皮質(zhì)和腎髓質(zhì)的交界線,可見到弓形血管,但數(shù)量較少;

圖2 大鼠腎組織蘇木精—伊紅染色(×100)A:弓形動脈;B:血管;G:毛細(xì)血管球。

2.2 酶組織化學(xué)雙染切片的光鏡觀察

觀察酶組織化學(xué)雙染的腎組織切片,發(fā)現(xiàn)血管呈弱陽性藍(lán)色反應(yīng),腎小囊壁層和淋巴管呈褐色反應(yīng),腎小管呈現(xiàn)強(qiáng)陽性藍(lán)色反應(yīng)。在腎的被膜下,可見到多個著色不一的管腔,但因該處組織多呈5′-核苷酸酶強(qiáng)陽性褐色反應(yīng),故脈管結(jié)構(gòu)難以確定,可能為被膜下淋巴叢和血管叢。在腎間質(zhì)結(jié)締組織較寬闊的部位,可見管腔較大的血管,管壁較厚,但未見淋巴管伴行。在腎實質(zhì)的腎小管間,可見到多個呈藍(lán)色反應(yīng)的血管,管腔與近端小管相似,但管壁較薄。在腎實質(zhì)內(nèi),毛細(xì)血管球分布稀疏,呈淺藍(lán)色反應(yīng),腎小囊腔不明顯,壁層均呈褐色。在延長酶染時間一倍的組織切片上進(jìn)行觀察,顯示遠(yuǎn)端小管的周圍,有豐富的顯藍(lán)色反應(yīng)的毛細(xì)血管,分布較均勻;在腎小球和近端小管周圍,多見疑似毛細(xì)淋巴管的褐色小管,管腔大小與遠(yuǎn)端小管周圍的毛細(xì)血管相似;可見到入球和出球微動脈,因顯色同腎小管,故不易區(qū)分;腎小管普遍呈強(qiáng)陽性藍(lán)色反應(yīng),尤其是近曲小管和遠(yuǎn)曲小管最為明顯。觀察外層髓質(zhì)經(jīng)延長酶染時間一倍的組織切片,顯示腎小管為極深藍(lán)色,可明顯地看到“U”形細(xì)在片中,還可看到血管和毛細(xì)血管球(圖1、圖2、圖3)。段;在腎小體和腎小管周圍的間質(zhì)內(nèi),可見到管腔大小不一的淋巴管,管腔較大,管壁較薄;若增加染色時間,可見到大量呈現(xiàn)出淺藍(lán)色著色的毛細(xì)血管,但未見管腔較大的血管(圖4、圖5、圖6)。

圖1 大鼠腎組織蘇木精—伊紅染色(×100)CA:被膜RC:腎小體D:腎小管。

圖3 大鼠腎組織蘇木精—伊紅染色(×100)A:弓形動脈;G:毛細(xì)血管球。

圖4 大鼠腎組織5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶酶組織化學(xué)雙重染色(×100)CA:被膜;B:血管;G:毛細(xì)血管球L:淋巴管。

圖5 大鼠腎組織5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶酶組織化學(xué)雙重染色(×100)A:弓形動脈;B:血管;G:毛細(xì)血管球;L:淋巴管。

圖6.大鼠腎組織5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶酶組織化學(xué)雙重染色(×100)A:弓形動脈;G:毛細(xì)血管球;T:細(xì)段;CAP:毛細(xì)血管。

3 討論

在血管和淋巴管內(nèi)皮中,因5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶含量不同,經(jīng)酶組織化學(xué)雙重染色的組織切片,血管顯示堿性磷酸酶強(qiáng)陽性藍(lán)色反應(yīng),淋巴管呈現(xiàn)5′-核苷酸酶強(qiáng)陽性褐色反應(yīng)[3]。因此依據(jù)內(nèi)皮細(xì)胞酶活性的差異,應(yīng)用5′-核苷酸酶和堿性磷酸酶酶組織化學(xué)雙重染色,可區(qū)分血管及淋巴管。部分切片與相鄰組織切片的HE染色對比觀察,從而區(qū)分和確定腎組織內(nèi)的血管和淋巴管分布。實驗結(jié)果顯示,血管呈弱陽性藍(lán)色反應(yīng),腎小囊壁層和淋巴管呈褐色反應(yīng),腎小管普遍呈現(xiàn)強(qiáng)陽性藍(lán)色反應(yīng)。在大鼠腎被膜下,可見到多個著色不一的管腔,但因該處組織多呈5′-核苷酸酶強(qiáng)陽性褐色反應(yīng),故脈管結(jié)構(gòu)不能確定,可能為被膜下淋巴管叢和血管叢。在腎間質(zhì)結(jié)締組織較寬闊的部位,可見管腔較大的血管,管壁較厚,但未見淋巴管伴行。在腎小管之間,可見到多個呈藍(lán)色反應(yīng)的血管,管腔與近端小管相似,但管壁較薄。實質(zhì)內(nèi)可見毛細(xì)血管球分布稀疏,腎小囊腔不明顯,壁層均呈褐色。遠(yuǎn)端腎小管周圍有豐富的呈現(xiàn)藍(lán)色反應(yīng)的毛細(xì)血管,分布較均勻。在腎小球和近端小管的周圍,多見疑似毛細(xì)淋巴管的褐色小管,管腔大小與遠(yuǎn)端小管周圍的毛細(xì)血管相似,可見到入球和出球微動脈,因顯色與腎小管相似,故不易區(qū)分。在腎髓質(zhì)的深層組織呈現(xiàn)5′-核苷酸酶強(qiáng)陽性褐色反應(yīng),可見褐色淋巴管,管腔較大,管壁較薄;若增加染色時間,可見到大量呈淺藍(lán)色的毛細(xì)血管,未見管腔較大的血管。大鼠腎組織中無腎柱,故不存在葉間動脈。在腎髓質(zhì)與皮質(zhì)交界處,有與腎表面平行走行的弓形動脈,弓形動脈以規(guī)則的間距發(fā)出分支,呈放射狀進(jìn)入皮質(zhì)迷路,與腎表面相垂直,行走在髓放線之間的皮質(zhì)迷路中,沿途不斷向周圍分出許多側(cè)支,形成入球動脈。腎內(nèi)的淋巴管分為兩組,一組為實質(zhì)內(nèi)淋巴管系,另一組為被膜淋巴管系。實質(zhì)內(nèi)淋巴管系起源于毛細(xì)淋巴管,分布在小葉間動脈周圍、腎小管或腎小體之間的動脈周圍間質(zhì)內(nèi),毛細(xì)淋巴管沿相應(yīng)的血管匯合成小葉間淋巴管、弓形淋巴管和葉間淋巴管,經(jīng)門淋巴管出腎門。被膜淋巴管系的毛細(xì)淋巴管也伴隨小葉間動脈分布,匯入被膜下淋巴管。被膜淋巴管系與實質(zhì)內(nèi)淋巴管系之間存在廣泛的吻合[4]。

4 結(jié)論

在大鼠腎小管周圍分布有毛細(xì)淋巴管,推測腎小管液內(nèi)的蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì),可能通過淋巴管道重吸收[5]。

[1]成令忠,鐘翠平,蔡文琴.現(xiàn)代組織學(xué)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2003:927-930.

[2]Lethias C,Auberrt-Foucher E,Dublet B,et al.Structure,molecular assembly and tissue distribution of FACIT collagen moiecules[J].Contrib Nephrol,2009,57(2): 107.

[3]Mundel P,Gilbert P,Kriz W,et al.Podocytes in glomerulus of rat kidney express a characteristic protein[J].Histoehem Cytoehem,2001,39(8):147.

[4]朱禧星.現(xiàn)代糖尿病學(xué)[M].上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社, 2005:22-57.

[5]趙玲輝,王云祥,徐玉東,等.胰淋巴管的微細(xì)分布[J].解剖學(xué)報,2008,29(2):216-219.

[責(zé)任編輯 姬 荷]

Observation on the architectural features of vascular system in the rat kidneys by sections were stained with H-E and 5′-Nase-ALPase

GUO Haiwang
（Henan Nursing Vocational Collagge，Anyang Henan，455000，China）

Objective To observe on structural characteristics and function of nephridial tissue in the rat，in order to discuss and study correlation at morphology between structural characteristics and functional significance，to reveal the architectural feature of its vascular system，to offer the morphological evidences for the the structural foundations of producting of the urine and reabsorption of the protein，or to treat the degenerative nephritis at the clinic.Methods The frozen sections of SD rats were stained with H-E and its adjacent sections with 5′-Nase-ALPase，we could observe the normal microstructure of the nephridial tissue by light microscope.Results There are many distributions of lymphatic capillaries around renal tubule.Conclusion Indicade that macromolecular substance as protein in renal tubule is probably reabsorbed by lymphatic vessels.

kidney；blood capillary；lymphatic vessel；rat

R322

A

1672-7606(2014)02-0126-03

2014-01-20

郭海旺(1970-),男,河南林州人,副教授,碩士,從事人體解剖學(xué)的教學(xué)和科研工作。