乙肝病毒感染者淋巴細(xì)胞亞群失衡與細(xì)胞免疫功能紊亂的臨床研究

劉朝陽(yáng)，李紅廣

河南省安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院(安陽(yáng)市肝病醫(yī)院)肝一科，河南安陽(yáng)455000

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)感染為肝硬化、肝癌的危險(xiǎn)因素，在我國(guó)HBV病毒慢性感染例數(shù)已達(dá)1.2億［1］，HBV為嗜肝 DNA病毒，在肝內(nèi)繁殖、復(fù)制，病毒對(duì)肝細(xì)胞的損傷主要源于宿主對(duì)HBV特異性的免疫應(yīng)答有關(guān)，病毒持續(xù)感染誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)感染形成持續(xù)免疫耐受，其中細(xì)胞免疫在免疫應(yīng)答過(guò)程中尤為關(guān)鍵，本研究對(duì)安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院HBV感染患者淋巴細(xì)胞亞群的變化情況進(jìn)行回顧性分析，旨在研究不同臨床類(lèi)型HBV感染患者淋巴細(xì)胞亞群變化特點(diǎn)及HBV感染與細(xì)胞免疫紊亂關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例選擇 364例HBV感染患者均來(lái)自2011年1月-2013年1月安陽(yáng)市第五人民醫(yī)院感染科門(mén)診及住院患者，其中男198例，女166例，年齡21～53歲，平均年齡(38.2±6.7)歲，急性乙型肝炎患者78例，慢性乙型肝炎患者244例，肝炎性肝硬化患者42例，對(duì)照組選擇同期健康體檢人員41例，其中男24名，女17名，年齡23～56歲，平均年齡(37.6±7.2)歲，兩組年齡、性別構(gòu)成差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，具有可比性。研究對(duì)象的選擇注意排除其他類(lèi)型(甲、丙、丁、戊型)肝炎、自身免疫性疾病、腫瘤及感染患者，研究對(duì)象3個(gè)月內(nèi)均無(wú)免疫抑制劑及抗病毒藥物的使用史。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 364例HBV感染患者均經(jīng)臨床實(shí)驗(yàn)室確診，急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、肝炎性肝硬化的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2010版《慢性乙型肝炎防治指南》［2］。以HBV DNA 載量檢測(cè)≥1.0×105copies/ml為HBV高載量組，以HBV-DNA載量檢測(cè)＜1.0×105copies/ml為HBV低載量組。

1.3 研究方法 比較急性乙型肝炎組、慢性乙型肝炎組、肝硬化組及對(duì)照組淋巴細(xì)胞亞群 CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞百分比，及CD4+/CD8+值;研究不同載量HBV-DNA(高載量組共104例，低載量組共260例)組別淋巴細(xì)胞亞群 CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞百分比及CD4+/CD8+情況。

1.4 儀器與試劑 T淋巴細(xì)胞亞群采用流氏細(xì)胞分析(FCM)檢測(cè)，儀器(Epics XL)購(gòu)自 BECKMANCOULTER公司，抗淋巴細(xì)胞單克隆抗體McAb購(gòu)自美國(guó)BD公司;淋巴細(xì)胞分離液由上海第二恒信化學(xué)試劑有限公司提供;HBV-DNA載量檢測(cè)采用熒光定量PCR檢測(cè);全自動(dòng)基因擴(kuò)增儀ABI7300購(gòu)自ABI公司，試劑采用中山大學(xué)達(dá)安基因生物有限公司產(chǎn)品，嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)設(shè)置操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，組間均值比較采用t檢驗(yàn)，方差不齊采用改良t檢驗(yàn)(t＇檢驗(yàn))，多組均值比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，構(gòu)成比、率比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組T淋巴細(xì)胞亞群比較 四組T淋巴細(xì)胞亞群經(jīng)方差分析差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，組間SNK法兩兩比較，對(duì)照組與急性肝炎組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)，急性肝炎組CD8+明顯升高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);慢性肝炎組、肝硬化組CD3+、CD4+、CD8+與急性肝炎組、對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05);慢性肝炎組、肝硬化組 CD3+、CD4+、CD8+均明顯降低，肝硬化組下降較為顯著，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);慢性肝炎組CD4+/CD8+明顯降低，與對(duì)照組和急性肝炎組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。

表1 四組T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)Tab1 Comparison of T lymphocyte subsets in four groups(±s)

表1 四組T淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)Tab1 Comparison of T lymphocyte subsets in four groups(±s)

注:與對(duì)照組比較，*P＜0.05;與急性肝炎組比較，#P＜0.05;與慢性肝炎組比較，▲P＜0.05。

組別 例數(shù) CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+對(duì)照組 41 65.56±5.97 41.98±5.23 27.16±3.17 1.45±0.47急性肝炎組 78 64.21±7.03 39.33±7.88 29.84±7.34* 1.42±0.39慢性肝炎組 244 61.37±9.12*# 32.67±8.12*# 24.12±6.76*# 1.26±0.33*#肝硬化組 42 54.43±11.34*#▲ 23.12±8.55*#▲ 17.42±7.68*#▲ 1.39±0.40▲F值14.56 54.90 34.20 6.66 P值0.000 0.000 0.000 0.002

2.2 不同HBV－DNA載量HBV感染患者淋巴細(xì)胞亞群比較 HBV-DNA高載量組與低載量組淋巴細(xì)胞亞群經(jīng)t檢驗(yàn)分析比較，兩組比較CD3+、CD4+差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，兩組比較，高載量組CD8+較高，CD4+/CD8+值較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，見(jiàn)表2)。

表2 不同HBV－DNA載量HBV感染患者淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)Tab2 Comparison of different loads of HBV－DNA lymphocyte subsets in patients with HBV infection( ± s)

表2 不同HBV－DNA載量HBV感染患者淋巴細(xì)胞亞群比較(±s)Tab2 Comparison of different loads of HBV－DNA lymphocyte subsets in patients with HBV infection( ± s)

HBV-DNA載量 例數(shù) CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+高載量組 104 61.87±9.33 36.83±8.96 25.16±7.18 1.49±0.44低載量組 260 63.56±7.92 38.07±6.18 22.84±9.44 1.61±0.48 t值1.75 1.51 2.53 2.28 P值0.082 0.13 0.011 0.023

3 討論

HBV感染其臨床類(lèi)型與患者自身免疫狀態(tài)關(guān)系密切，病毒感染過(guò)程中T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在HBV清除占據(jù)主導(dǎo)地位，其過(guò)程也與肝細(xì)胞的損傷息息相關(guān)，T細(xì)胞在免疫應(yīng)答過(guò)程中分為不同功能的細(xì)胞亞群:輔助/誘導(dǎo) T細(xì)胞(Helper T cells，Th)表面表達(dá)CD3+、CD4+，可識(shí)別與MHC-Ⅱ類(lèi)分子結(jié)合的病毒多肽，具有協(xié)助體液免疫和細(xì)胞免疫的功能，有較強(qiáng)的抗病毒效應(yīng)［3］，細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞(cytotoxic T cells，Tc)表達(dá)CD3+、CD8+，具有殺傷靶細(xì)胞的功能，對(duì)肝細(xì)胞的損傷起主要作用［4］;抑制性T細(xì)胞(Suppressor T cells，Ts)表達(dá)CD3+、CD8+，具有抑制細(xì)胞免疫及體液免疫的功能;CD3分子表達(dá)于全部T細(xì)胞上，為T(mén)細(xì)胞的重要標(biāo)記。

目前研究學(xué)者認(rèn)為HBV感染的慢性化與機(jī)體對(duì)病毒清除能力下降有關(guān)［5］，細(xì)胞免疫功能狀態(tài)影響HBV感染轉(zhuǎn)歸，T淋巴細(xì)胞亞群一定程度上反映患者細(xì)胞免疫功能狀態(tài)，在研究中我們對(duì)急性、慢性乙型肝炎及肝硬化患者T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行了分析比較，在慢性肝炎組及肝硬化組CD3+、CD4+及CD8+細(xì)胞比例均出現(xiàn)進(jìn)行性下降，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，肝硬化組下降尤為明顯，但相對(duì)與慢性肝炎組，CD8+細(xì)胞比例下降幅度較大，CD4+/CD8+比值反而出現(xiàn)上升，數(shù)據(jù)顯示，肝硬化組及慢性肝炎組均存在一定程度的免疫功能低下，T細(xì)胞數(shù)量減少(尤其CD4+細(xì)胞缺乏影響病毒抗原的識(shí)別及B細(xì)胞、Tc細(xì)胞的增殖分化，影響機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)病毒的清除［6］)，病毒清除減緩，感染遷延難愈，CD8+細(xì)胞比例在急性肝炎組中平均水平出現(xiàn)上升，提示急性肝炎中對(duì)細(xì)胞內(nèi)病毒的清除作用較為明顯，同時(shí)肝細(xì)胞損傷也較為嚴(yán)重，臨床表現(xiàn)為轉(zhuǎn)氨酶的大幅升高，患者臨床癥狀較為明顯，同時(shí)CD8+細(xì)胞平均比例的離散系數(shù)較大，提示患者的個(gè)體差異也較為明顯。慢性肝炎組及肝硬化組CD8+細(xì)胞比例下降與臨床其他研究相符［7-8］，在本項(xiàng)研究中，慢性肝炎組及肝硬化組患者HBV感染病程均較長(zhǎng)，CD8+細(xì)胞下降可能跟細(xì)胞免疫的長(zhǎng)期消耗有關(guān)。CD4+/CD8+比值作為反映機(jī)體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，可反映機(jī)體內(nèi)免疫功能紊亂情況，慢性肝炎組及肝硬化組均存在一定程度的免疫紊亂。

在所有研究的HBV感染患者中，HBV高載量組與低載量組淋巴細(xì)胞亞群比較，高載量組CD8+較高，CD4+/CD8+比值較低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，CD4+、CD3+均降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在高病毒載量CD8+細(xì)胞比例增加源于抑制性T細(xì)胞的增加，機(jī)體免疫呈現(xiàn)抑制狀態(tài)，病毒復(fù)制加劇，機(jī)體免疫功能低下［9］。

綜上所述，慢性肝炎及肝硬化均存在一定程度的細(xì)胞免疫功能低下，T淋巴亞群CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞均存在不同程度的降低，對(duì)患者淋巴細(xì)胞亞群的監(jiān)測(cè)對(duì)患者免疫功能評(píng)估有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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