野波羅蜜根皮中總黃酮提取方法的比較研究

李海濱，胡曉旭，譚 偉，黃 薇，雷紅菲，王紅斌

（1.云南民族大學(xué)民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650500；

2.云南民族大學(xué)校醫(yī)院，云南昆明650500；3.大理市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)站，云南大理671000）

野波羅蜜根皮中總黃酮提取方法的比較研究

李海濱1，2，胡曉旭1，3，譚 偉1，黃 薇1，雷紅菲1，王紅斌1

（1.云南民族大學(xué)民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南昆明650500；

2.云南民族大學(xué)校醫(yī)院，云南昆明650500；3.大理市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)站，云南大理671000）

以乙醇-水為提取體系，分別采用回流法、超聲法、微波法，探究乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間等對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮提取的影響，確立最佳提取條件.結(jié)果表明，回流提取法、超聲提取法、微波提取法在最佳提取條件下總黃酮的提取率依次為9.43%、9.52%、9.96%.

野波羅蜜根皮；總黃酮；回流提??；超聲提?。晃⒉ㄌ崛?/p>

波羅蜜屬（Artocarpus）是?？浦参?，全世界有50多種，我國(guó)約15種，分布于南方各省.近年來研究發(fā)現(xiàn)波羅蜜屬植物多含黃酮類化合物，它們具有抗氧化、抗炎及抗病毒等多種生物活性，極具藥用及保健價(jià)值.

植物中黃酮類化合物的提取方法主要有浸漬法、回流提取法、超臨界二氧化碳提取法、超聲提取法、微波提取法等.傳統(tǒng)的提取方法是回流提取法；微波和超聲提取是傳統(tǒng)方法的一種改進(jìn).相比之下，超聲法具有安全性好、操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、效果好、保養(yǎng)方便等優(yōu)點(diǎn)；微波法具有效率高、節(jié)約時(shí)間、節(jié)省試劑、污染小等優(yōu)點(diǎn).

本研究以野波羅蜜根皮為研究對(duì)象，分別采用回流、超聲、微波3種方法提取總黃酮，并將提取液經(jīng)過D101大孔吸附樹脂進(jìn)行純化.以提取率為指標(biāo)，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色法對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮的含量進(jìn)行吸光度測(cè)定.在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定其最佳提取工藝和方法，為野波羅蜜根皮中總黃酮提取的進(jìn)一步研究提供參考.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料、試劑與儀器

1.1.1 材料

野波羅蜜根皮采自云南省普洱市孟連縣.

1.1.2 主要試劑與儀器

蘆?。ā?5.0%）；無水乙醇，氫氧化鈉，硝酸鋁，亞硝酸鈉（以上均為分析純）.

WFJ7200型可見分光光度計(jì)（尤尼柯儀器有限公司）；AL204型電子天平（梅特勒托利多儀器有限公司）；OSB—2100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司）；AS10200AD型醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1）原料的預(yù)處理.野 波羅蜜根皮 →除雜 →水洗 →干燥 →粉碎 →過80目 篩 →備用.

2）野波羅蜜根皮中總黃酮的提取與測(cè)定方法.根據(jù)文獻(xiàn)11所建立的分析方法，以蘆丁為對(duì)照品，在510 nm處進(jìn)行比色測(cè)定.回歸方程：A＝9.839 3C＋0.002 1，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 8.同時(shí)為保證方法的準(zhǔn)確度和精密度，對(duì)樣品進(jìn)行了加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn).

3）野波羅蜜根皮中總黃酮提取的單因素實(shí)驗(yàn).本實(shí)驗(yàn)分別選擇回流、超聲、微波3種方法提取野波羅蜜根皮中的總黃酮.通過單因素實(shí)驗(yàn)研究，確定最佳提取工藝和方法.

1.2.1 回流法提取

1）不同乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮提取效果的影響.稱取80目的野波羅蜜根皮粉0.50 g于6個(gè)圓底燒瓶中，分別加入30%、50%、60%、70%、80%、95%的乙醇各20mL，在70℃下回流提取1 h，過濾，收集濾液旋蒸，接著加少量蒸餾水適當(dāng)稀釋，過D101大孔吸附樹脂柱，用70%乙醇洗脫，得到總黃酮溶液，最后定容至50 mL容量瓶中，測(cè)定總黃酮含量并計(jì)算總黃酮提取率.

2）不同料液比、不同溫度、不同時(shí)間對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮提取效果的影響.不同料液比：以1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60的不同料液比加入50%的乙醇；不同溫度：按1∶50的料液比加入50%的乙醇，分別在40、50、60、70、80、90℃不同溫度實(shí)驗(yàn)；不同時(shí)間：按1∶50的料液比加入50%的乙醇，在60℃下，分別回流提取0.5、1、1.5、2、2.5、3 h.均按上述1）的方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定總黃酮含量并計(jì)算提取率.

1.2.2 超聲法和微波法提取

超聲提取法、微波提取法是按照上述“回流提取”的方法，分別實(shí)驗(yàn)了不同乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間、提取功率對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮提取效果的影響.

1.3 3種提取方法的比較

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，取相同量的野波羅蜜根皮粉末，分別用每種方法的最佳工藝條件進(jìn)行提取，做3組平行實(shí)驗(yàn)，測(cè)定總黃酮含量并計(jì)算其提取率，求平均值.

2 結(jié)果與討論

2.1 加標(biāo)回收率

表1 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

由表中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知，樣品加標(biāo)回收率的平均值為101.94%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為4.49%，說明采用本方法對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮進(jìn)行定量分析是可行的.

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 回流提取法

由圖1可知，乙醇濃度為50%時(shí)，提取率最大，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)繼續(xù)增加，總黃酮的提取率開始下降，選擇50%乙醇作為總黃酮的提取溶劑.

由圖2可知，隨著料液比的增加，總黃酮的提取率基本變化不大，但當(dāng)料液比達(dá)到1∶50時(shí)，提取率相對(duì)較大，說明此時(shí)黃酮類化合物已大部分溶出，選用料液比為1∶50.

由圖3可知，溫度的不同對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮提取率影響較大，隨著提取溫度的升高，總黃酮提取率先增后減.60℃時(shí)，總黃酮的提取率最高，故選擇60℃作為提取的最佳溫度.

由圖4可知，提取時(shí)間為60 min時(shí)，總黃酮的提取率最大，隨著提取時(shí)間的增加，提取率有所降低，并趨于穩(wěn)定，說明在60min時(shí)，提取已經(jīng)達(dá)到平衡，最佳提取時(shí)間選擇60min.

2.2.2 超聲提取法

由圖5中可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)增加，總黃酮提取率不斷提高，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)到70%時(shí)，黃酮類化合物提取率最高；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于70%以后，總黃酮的提取率反而下降，因此選用70%的乙醇作為提取溶劑.

由圖6可知，隨著料液比的增加，總黃酮的提取率也隨之增大，但當(dāng)料液比達(dá)到一定值后，提取率趨于穩(wěn)定，說明此時(shí)黃酮類化合物已全部溶出，從節(jié)省溶劑和環(huán)保的角度考慮，選用料液比為1∶50.

數(shù)據(jù)采集與傳輸?shù)目偝绦蛟O(shè)計(jì)流程，如圖3所示。采集信息包括水分、鹽分和位置信息，經(jīng)濾波和放大后，由C8051F340進(jìn)行A/D轉(zhuǎn)換；然后通過串行異步收發(fā)器控制MC55進(jìn)行數(shù)據(jù)傳輸，波特率為9 600bps,8位數(shù)據(jù)位，1位停止位，無奇偶校驗(yàn)位。

從圖7可知，在提取時(shí)間低于30min時(shí)，總黃酮的提取率隨著提取時(shí)間的增加而增大，當(dāng)提取時(shí)間超過30min時(shí)，提取率趨于較穩(wěn)定.綜合考慮，最佳提取時(shí)間選擇30min.

由圖8可知，超聲功率對(duì)總黃酮提取的影響是隨著功率的增大，黃酮的提取率也緩慢增大，由于本實(shí)驗(yàn)所使用的超聲儀最大功率為320W，所以超聲功率選擇為320W.

2.2.3 微波提取法

由圖9可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的提高，總黃酮提取率先增加，乙醇體積分?jǐn)?shù)提高到60%后，總黃酮提取率逐漸下降，故選用60%乙醇作為提取溶劑.

從圖10可知，隨著料液比的增大，總黃酮的提取率也逐漸增大，當(dāng)料液比達(dá)到1∶50時(shí)達(dá)到最大值，隨著料液比再增加，提取率反而有所下降，因此，選用料液比為1∶50.

由圖11可知，隨著微波功率增大，總黃酮提取率先增后減，在中高火時(shí)，總黃酮的提取率最高，因此，最佳微波功率選擇中高火.

由圖12可知，提取時(shí)間為1min時(shí)，提取率最大，提取時(shí)間超過1 min后，提取率反而下降，綜合考慮，最佳提取時(shí)間選擇1min.

2.3 3種提取方法的比較

根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，3種提取方法最佳工藝條件下，回流和微波提取的料液比也為1∶50，3組平行實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2.

表2 3種提取方法的比較

由表2可知：3種方法中，微波法的總黃酮提取率和生產(chǎn)周期最好，其次是超聲法，最后是回流提取法.

3 結(jié)語

回收率實(shí)驗(yàn)表明了該方法的可行性和數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠性，之后分別采用回流、超聲、微波3種方法對(duì)野波羅蜜根皮中總黃酮的提取進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)研究，得出微波法的效率最高、且提取率最大，可達(dá)到9.96%.說明提取方法和單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)定的技術(shù)參數(shù)均適用于野波羅蜜根皮中總黃酮的提取.該方法和工藝參數(shù)具有較好的實(shí)用價(jià)值.

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（責(zé)任編輯 王 琳）

A comparative study of the extraction methods of the total flavonoids in wild jackfruit root barks

LI Hai-bin1，2，HU Xiao-xu1，3，TAN Wei1，HANG Wei1，LEI Hong-fei1，WANG Hong-bin1
（1.Key Laboratory of Chemistry in Ethnic Medicinal Resources，State Ethnic Affairs Commission and Ministry of Education，Yunnan University of Nationalities，Kunming 650500，China；2.School Hospital，Yunnan University of Nationalities，Kunming 650500，China；3.Agricultural Products Quality and Safety Inspection Station of Dali，Dali671000，China）

With ethanol-water as the extraction medium，the reflow，ultrasonic and microwave methods were used in the extraction of the total flavonoids in wild jackfruit root barks.By exploring the ethanol concentration，solidliquid ratio，extraction time，etc.，the optimum extraction conditions were obtained as follows：9.43%，9.52%，and 9.96%respectively for the reflow，ultrasonic and microwave methods.

wild jackfruit root barks；total flavonoids；reflow extraction；ultrasonic extraction；microwave extraction

R284.2

：A

：1672-8513（2014）01-0039-05

2013-06-21.

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2009CD100）；民族藥資源化學(xué)國(guó)家民委-教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金（MZY1122）；2012年地方高校國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201210691001）.

李海濱（1968-），男，學(xué)士，副主任醫(yī)師.主要研究方向：臨床藥理作用與應(yīng)用.

王紅斌（1966-），男，博士，教授，碩士生導(dǎo)師.主要研究方向：環(huán)境化學(xué)與分離分析技術(shù).