老年原發(fā)性高血壓患者外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化狀態(tài)的研究

王珍妮 馮杜金 邱蓮女

老年原發(fā)性高血壓患者外周血淋巴細(xì)胞亞群及活化狀態(tài)的研究

王珍妮 馮杜金 邱蓮女

目的探討老年原發(fā)性高血壓患者外周血淋巴細(xì)胞亞群活化狀態(tài)變化。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)65歲以上老年原發(fā)性高血壓患者（觀察組）170例和體檢健康者（對(duì)照組）50例外周血淋巴細(xì)胞亞群以及活化狀態(tài)。結(jié)果觀察組B淋巴細(xì)胞表達(dá)的CD3-CD19+高于對(duì)照組，T淋巴細(xì)胞活化表達(dá)的CD3+CD8+CD38+高于對(duì)照組,CD3+HLA-DR+, CD3+CD8+HLA-DR+以及NK細(xì)胞表達(dá)的CD16+CD56+高于對(duì)照組（均P＜0.05）。T淋巴細(xì)胞表達(dá)的CD3+低于對(duì)照組（均P＜0.05）。T細(xì)胞亞群表達(dá)的CD3+CD4+、CD3+CD8+比例下降,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD3+CD4+CD25+比例上升，但與對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。結(jié)論老年原發(fā)性高血壓患者B淋巴細(xì)胞、NK淋巴細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的活化能力顯著增加。

流式細(xì)胞術(shù)；活化淋巴細(xì)胞；原發(fā)性高血壓

老年原發(fā)性高血壓是一種常見病、多發(fā)病。臨床病程長(zhǎng)，對(duì)心、腦、腎等重要器官可造成嚴(yán)重?fù)p傷，長(zhǎng)期血壓增高可造成老年人腦血管意外的發(fā)生。其發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，常常是多系統(tǒng)、多因素綜合作用的結(jié)果，越來越多的研究表明高血壓常伴隨免疫功能的異常，高血壓并發(fā)癥常有免疫細(xì)胞的介入。為了進(jìn)一步探討老年原發(fā)性高血壓患者免疫細(xì)胞的狀態(tài)，本研究檢測(cè)了老年原發(fā)性高血壓Ⅰ期患者9項(xiàng)淋巴細(xì)胞亞群以及活化淋巴細(xì)胞的表型，為研究老年高血壓的發(fā)生、發(fā)展及臨床治療提供參考依據(jù)。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象選擇2010年1月至2013年6月在浙江省人民醫(yī)院望江療養(yǎng)院療養(yǎng)的65歲以上老年原發(fā)性高血壓患者170例為觀察組，其中男性90例，女性80例，年齡65～80（72±8）歲，參照WHO高血壓分類標(biāo)準(zhǔn)，確診為原發(fā)性高血壓，且均為Ⅰ期。對(duì)照組為我院健康體檢者50例，其中男性24例，女性26例，年齡63～82（72±10）歲，經(jīng)臨床檢測(cè)無高血壓，外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)正常，無糖尿病、感染、腫瘤、自身免疫性疾病等，肝、腎功能檢查亦無異常。兩組均空腹8h以上于清晨采集血液直接送檢。兩組性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 儀器和試劑流式細(xì)胞儀為美國Beckton Dickinson公司FACSCantoⅡ，淋巴標(biāo)記抗體CD3FITC/ CD16CD56PE/CD45PerCP-Cy/CD19-APC、CD4 FITC/CD25 PE/CD3 PerCP-Cy及CD8 FITC/ CD38 PE/CD3 PerCP/Anti-HLA-DR APC均購自美國Beckton Dickinson公司。

1.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)方法測(cè)定管分別加入20μl-CD3FITC/CD16CD56PE/CD45PerCP-Cy/CD19-APC，CD4 FITC/CD25 PE/CD3 PerCP-Cy及20μl CD8 FITC/CD38 PE/CD3 PerCP/Anti-HLA-DR APC標(biāo)記的鼠抗人單克隆抗體,加入100μl全血混勻,室溫避光放置15min后加入BD溶血素，測(cè)定前用質(zhì)控微球調(diào)校儀器，以保證其熒光檢測(cè)的CV值＜2%，然后流式細(xì)胞儀檢測(cè)。每個(gè)測(cè)定管收集10 000個(gè)以上細(xì)胞，記錄CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，CD3-CD19+，CD16+CD56+，CD3+HLA-DR+，CD3+CD4+CD25+，CD3+-CD8+CD38+，CD3+CD8+HLA-DR+的表達(dá)，結(jié)果以占淋巴細(xì)胞百分率（%）表示。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)比較見表1。

表1 兩組淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)比較（%）

由表1可見，觀察組T淋巴細(xì)胞表達(dá)的CD3+降低，NK細(xì)胞表達(dá)的CD16+CD56+、B淋巴細(xì)胞表達(dá)的CD3-CD19+升高，與正常組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義意義（均P＜0.05），觀察組T細(xì)胞表達(dá)的CD3+CD4+、CD3+CD8+較對(duì)照組降低，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.2 兩組外周血活化淋巴細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)比較見表2。

表2 兩組活化淋巴細(xì)胞及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)比較（%）

由表2可見，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD3+CD4+CD25+表達(dá)陽性率與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05），觀察組T細(xì)胞表達(dá)的CD3+HLA-DR+、CD3+CD8+CD38+以及CD3+CD8+HLA-DR+表達(dá)均高于對(duì)照組（均P＜0.05）。

3 討論

原發(fā)性高血壓病是一種以動(dòng)脈血壓升高為主要特征，可并發(fā)心臟、血管、腦、腎臟與眼底視網(wǎng)膜等靶器官損害以及代謝改變的全身系統(tǒng)疾病。發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，包括腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAS）及血管內(nèi)皮功能的異常等[1-2]。越來越多的研究顯示高血壓伴隨免疫功能的異常，免疫因素的介入加劇并發(fā)癥的發(fā)生，而人體的正常免疫功能狀態(tài)有賴于各種免疫細(xì)胞，特別是淋巴細(xì)胞亞群之間的相互協(xié)調(diào)，產(chǎn)生適度的免疫應(yīng)答。CD3+是所有T細(xì)胞表面標(biāo)志，是機(jī)體免疫的基礎(chǔ)。T淋巴細(xì)胞根據(jù)表面分子表達(dá)不同，可分為輔助性T細(xì)胞（CD4+）和細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CD8+），CD4+T淋巴細(xì)胞接受抗原刺激后分化為Th1和Th2細(xì)胞,分泌多種細(xì)胞因子輔助B細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞活化上調(diào)免疫功能。CD4/ CD8可直接反映宿主T淋巴細(xì)胞亞群的紊亂狀態(tài)，且在一定程度上可間接了解機(jī)體細(xì)胞免疫功能情況。而HLA-DR屬于HLA-Ⅱ類抗原,它主要分布在外周血B細(xì)胞、單核細(xì)胞及激活的T淋巴細(xì)胞上，是淋巴細(xì)胞活化的標(biāo)志，B淋巴細(xì)胞在抗原提呈細(xì)胞和Th細(xì)胞的輔助下成為活化B細(xì)胞，進(jìn)而分化為漿細(xì)胞，合成和分泌各類免疫球蛋白[3-6]。許多研究發(fā)現(xiàn)自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少，T淋巴細(xì)胞亞類比例失調(diào)等免疫功能異常，血管內(nèi)出現(xiàn)激活的T淋巴細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)中將正常胸腺移植到SHR體內(nèi)并重建其正常的免疫功能，能夠顯著降低SHR的動(dòng)脈血壓[7-8]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)原發(fā)性高血壓患者CD3+T淋巴細(xì)胞顯著下降，表型CD4+和CD8+比例沒有顯著改變，但T淋巴細(xì)胞活化狀態(tài)CD3+HLA-DR+、CD8+CD38+、CD3+CD8+HLA-DR+明顯增加，上述的免疫激活和B淋巴細(xì)胞功能的增加，進(jìn)而可能分泌產(chǎn)生IgG、IgM等抗體，導(dǎo)致形成抗原-抗體復(fù)合物，并且激活補(bǔ)體引起血管內(nèi)皮的損傷，而T淋巴細(xì)胞活化浸潤加速了血管炎癥反應(yīng)，從而加速原發(fā)性高血壓的產(chǎn)生[9]。同時(shí)在觀察組中NK細(xì)胞也明顯增加，NK細(xì)胞來源于骨髓淋巴樣造血干細(xì)胞，是細(xì)胞免疫中非特異成分，被激活后執(zhí)行效應(yīng)功能，在機(jī)體免疫調(diào)控中釋放淋巴因子如IFN-α、IL-2等，對(duì)機(jī)體免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)[10]。研究發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞參與了妊娠期高血壓的發(fā)生，NK細(xì)胞主要作用在于胚胎的植入和母胎界面免疫平衡的維持，過度的激發(fā)影響胎盤的發(fā)育和功能成熟，導(dǎo)致妊娠期高血壓的發(fā)生，因此提示NK細(xì)胞也可能參與老年性高血壓的發(fā)生、發(fā)展[11]。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是一組免疫抑制性功能的T淋巴亞群，CD4+CD25+Treg是其家族中最主要的一群，Barhoumi等[12]發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞通過抗炎作用抑制血管緊張素Ⅱ所介導(dǎo)的血管損害。Kassan M等[13-14]通過注射調(diào)節(jié)性T細(xì)胞至SHR模型中，發(fā)現(xiàn)顯著減少了巨噬細(xì)胞的活化和滲透，加強(qiáng)了冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮的緩和。本研究檢測(cè)了老年原發(fā)性高血壓Ⅰ期的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量沒有明顯的改變，而高血壓是處于不斷進(jìn)展?fàn)顟B(tài)的心血管綜合征，進(jìn)一步發(fā)展可以導(dǎo)致心臟和血管功能與結(jié)構(gòu)的改變。為降低高血壓并發(fā)癥及其發(fā)展，或許調(diào)節(jié)性T細(xì)胞可以提供一個(gè)新的思路。

本研究顯示，老年原發(fā)性高血壓患者存在細(xì)胞免疫與體液免疫功能紊亂，它們之間密切聯(lián)系，免疫紊亂使得老年人更加容易感染，加劇了疾病的發(fā)生。通過免疫機(jī)制的研究或許可以為我們防止老年原發(fā)性高血壓及并發(fā)癥提供一些新的思路。

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The study of activation state of peripheral lymphocyte subsets in elder with essential hypertension

WANG Zhenni,FENG Dujin,QIU Liannv.Department of Clinical Laboratory,Zhejiang Provincial People′s Hospital,Hangzhou 310014,China

QIU Liannv,E-mail:lab_qln@126.com

Objective To investigate the activation state of peripheral lymphocyte subsets in elder with essential hypertension.Methods Peripheral lymphocyte subsets and activation state were analyzed by flow cytometry in 170 elder with essential hypertension and 50 healthy people.Results The expressions of CD3-CD19+of B lymphocyte, CD3+CD8+CD38+of T lymphocyte,CD3+HLA-DR+,CD3+CD8+HLA-DR+and CD16+CD56+of NK cell were significantly higher in elder with hypertension than in healthy person(all P＜0.05).The CD3+CD8+，CD3+CD4+and CD3+CD4+CD25+of T lymphocyte were not different between them(all P＞0.05).Conclusion The activation of B lymphocyte cell,NK cell and CD8+T lymphocyte increases in elder with hypertension.

Lymphocyte subset;Activated lymphocyte;Essentialhypertension

2013-12-09）

（本文編輯：馬雯娜）

浙江省自然基金資助項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：LH12H16019）

310014杭州市浙江省人民醫(yī)院檢驗(yàn)中心

邱蓮女，E-mail:lab_qln@126.com