金黃色葡萄球菌對紅霉素及克林霉素的耐藥性的分析

路永生

每一種細(xì)菌都是有一定的耐藥性的, 隨著人類技術(shù)的不斷發(fā)展, 人們所發(fā)掘到的抗生素的種類越來越多, 這一成就有利也有弊, 抗菌藥物的廣泛的使用, 使得葡萄菌屬已經(jīng)成為了醫(yī)院和社區(qū)引起化膿感染的主要來源, 在臨床治療金黃色葡萄球菌屬的感染中, 作者大多選用林可酰胺類、大環(huán)內(nèi)酯類以及鏈陽菌素B類等抗菌藥物進(jìn)行治療, 需要特別注意的是克林霉素, 由于自身的滲透能力比較強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn), 所以被選為對與頭孢菌素以及青霉素過敏的首選的替代藥物, 而且隨著病原菌的耐藥性的不斷增加, 現(xiàn)有的抗菌藥物已經(jīng)呈現(xiàn)出比較高的耐藥性, 除此之外, 紅霉素的應(yīng)用還能誘導(dǎo)出現(xiàn)克林霉素耐藥的現(xiàn)象, 減少治療的效果［1］。所以在現(xiàn)在的醫(yī)療體系當(dāng)中, 誘導(dǎo)型克林霉素耐藥已經(jīng)引起了許多人的關(guān)注,所以, 本文中主要分析了金黃色葡萄球菌屬對于紅霉素以及克林霉素的耐藥性, 使醫(yī)務(wù)工作人員更加合理的使用抗菌藥物, 更加徹底的治療細(xì)菌的感染。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗(yàn)中所采用的菌株均為本院在2012年6月～2013年4月臨床送檢的各類標(biāo)本中分離出來的金黃色葡萄球菌160株(其中mecA基因陽性菌株為132株), 凝固酶陰性金黃色葡萄球菌180株(其中mecA基因陽性菌株為115株)。在采取的所有菌株均需經(jīng)過ATB Expression細(xì)菌分析儀鑒定和確認(rèn)。

1.2 儀器與試劑 35℃恒溫箱, ATB Expression細(xì)菌分析儀,ID32 STAPH細(xì)菌鑒定卡, 克林霉素藥敏紙片(2 μg), 紅霉素藥敏紙片(15 μg), M-H瓊脂。

1.3 藥敏紙片與藥敏試驗(yàn) 血漿凝固酶膠乳試劑是法國生物梅里埃公司的產(chǎn)品, 而頭孢西丁、克林霉素以及紅霉素紙片是英國Oxoid公司的產(chǎn)品。采用的紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)是按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)規(guī)程來對金黃色葡萄球菌以及里昂金黃色葡萄球菌來進(jìn)行操作的, 對于不同的藥物, 作用效果也是不同的, 頭孢西丁的抑制圈≤21 mm為耐藥、≥22 mm為敏感；其他凝固酶陰性金黃色葡萄球菌抑制圈≤24 mm為耐藥、≥25 mm為敏感。對于D-試驗(yàn)的操作, 需要將0.5麥?zhǔn)蠁挝粷舛鹊慕瘘S色葡萄球菌屬涂抹于M-H瓊脂板上面, 涂抹應(yīng)盡量均勻, 兩種紙片邊緣之間的距離為15 mm, 在35℃的恒溫箱中孵育16～18 h。對于結(jié)果的判讀應(yīng)該根據(jù)NCCLS進(jìn)行判斷, 標(biāo)準(zhǔn)是紅霉素為14～22 mm, 克林霉素則為15～20 mm。D-試驗(yàn)陽性或者說是紅霉素對克林霉素具有誘導(dǎo)耐藥性的現(xiàn)象是克林霉素紙片的抑菌環(huán)在靠近紅霉素紙片一側(cè)出現(xiàn)了平面截?cái)嗟默F(xiàn)象, 也就是克林霉素紙片的抑菌環(huán)看似一個(gè)大寫的D［2,3］。

1.4 基因的檢測 采用的均為聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法。進(jìn)行模板DNA的制作：將在血平板上培養(yǎng)了一夜的細(xì)菌菌落懸浮于2 ml 0.85%的NaCl溶液當(dāng)中, 濃度為5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝?。以速度?3000 r/min進(jìn)行1 min的離心, 取出沉淀, 懸于200 μl的裂解緩沖液當(dāng)中, 并在沸水中煮10 min左右, 然后在13000 r/min進(jìn)行2 min的離心, 最后取出上清液保存在-20℃?zhèn)溆谩?/p>

2 結(jié)果

2.1 耐藥的表型 340株金黃色葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素的耐藥表型情況, 見表1。

2.2 耐藥基因類型的分布 在具有誘導(dǎo)耐藥性的葡萄菌屬中檢測紅霉素核糖體甲基化酶基因, 見表2。

表1 金黃色葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素不同耐藥表型(n)

表2 89株D-試驗(yàn)陽性的葡萄菌屬中紅霉素耐藥基因類型分布構(gòu)成比(n, %)

3 討論

在最近幾年來, 大環(huán)內(nèi)酯類對葡萄菌屬的活性不斷降低,在本次試驗(yàn)中對6種耐藥基因進(jìn)行了檢測, 在數(shù)據(jù)中可以看出, 紅霉素核糖體甲基化酶基因ermC是誘導(dǎo)耐藥的主要基因, ermC基因主要見于MRCNS, ermA主要見于MRCNS, sat4見于MSSA和MRCNS, 而對于ermB來說是很少見的。

D-試驗(yàn)在臨床試驗(yàn)中主要是用于紅霉素對克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性的檢測, 目的在于避免在使用克林霉素治療時(shí)的失誤的現(xiàn)象, 影響治療的效果, 也浪費(fèi)了藥物。在現(xiàn)在的微量稀釋法以及機(jī)器法藥敏試驗(yàn)中, 對于此種誘導(dǎo)耐藥機(jī)制尚不能檢測出來, 所以需要進(jìn)行D-檢驗(yàn), 使藥物的耐藥范圍縮小, 得出的結(jié)果才有可信度［4］。因?yàn)槟退幮缘拇嬖? 為了避免在臨床上出現(xiàn)不合理使用克林霉素的現(xiàn)象, 所以需要在確定使用的藥物之前對藥物在臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行正規(guī)的D-試驗(yàn)的檢驗(yàn), 從而保證克林霉素的耐藥性能夠準(zhǔn)確的檢測出來,使醫(yī)生有具體的指導(dǎo)來使用抗菌藥物。

［1］ 魏緒廷, 楊霞.葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性研究.中華醫(yī)院感染雜志, 2008, 18(7):921-922.

［2］ 曲海霞.葡萄球菌對克林霉素誘導(dǎo)型耐藥的檢測與分析.中外健康文摘, 2010, 7(28):140.

［3］ 黃烈, 林廣城.葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素的誘導(dǎo)耐藥性研究.中外檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2007, 17(2):121-124.

［4］ 趙瑞珍.D試驗(yàn)檢測葡萄球菌屬中克林霉素誘導(dǎo)型耐藥.中外醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2006, 16(9):977-979.