國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)測定依達拉奉注射液含量結(jié)果的對比研究

孫瑩 林大專 孫全樂 張凌贏

依達拉奉注射液是日本三菱東京制藥株式會社開發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)用藥, 于2001年在日本首次上市, 隨后國內(nèi)多家企業(yè)相繼上市仿制藥。在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測定項下, 國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)均采用高效液相色譜法, 但日本標(biāo)準(zhǔn)采用的是內(nèi)標(biāo)法,國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)采用的是外標(biāo)法, 為了比較國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)測定依達拉奉注射液中依達拉奉含量結(jié)果的一致性, 我們按照日本標(biāo)準(zhǔn)和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)分別對同一廠家的三批依達拉奉注射液中依達拉奉的含量進行了測定, 以其確定國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的可行性。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(Agilent 1200可變波長檢測器(VWD), Agilent 1200數(shù)據(jù)站, P/N-7725i手動進樣器, G1354A四元梯度泵及G1316A柱溫箱(美國Agilent公司產(chǎn)品)。

1.2 主要試藥 依達拉奉對照品(南通飛宇生物科技有限公司, 批號FY24810511, 規(guī)格：100mg, 含量≥99%)；依達拉奉注射液(吉林省某藥業(yè)股份有限公司：2013063001、2013063002、2013063003)；甲醇 (美國 Fisher公司 , 色譜純 )；醋酸銨(北京化工廠, 分析純)；乙腈(美國Fisher公司, 色譜純)；醋酸(北京化工廠, 分析純)；氨水(北京化工廠, 分析純)；對氨基苯甲酸乙酯(阿拉丁化學(xué)試劑上海有限公司,分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)［1］Kromasil5～C18 柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相為0.05 mol/L醋酸銨溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH=4.0±0.1)-乙腈(75:25)；流速1.0 ml/min；柱溫25℃；檢測波長 254 nm ；進樣量 20 μl。

對照品溶液的制備：取依達拉奉對照品適量, 精密稱定,加流動相溶解并稀釋制成每毫升中約含依達拉奉20 μg的溶液。

供試品溶液的制備：精密量取依達拉奉注射液0.70 ml,加流動相稀釋至50 ml。

2.1.2 日本標(biāo)準(zhǔn)［2］Kromasil5-C18 柱 (150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相為稀乙酸(1→100)-甲醇(3:1)加入氨試液調(diào)節(jié)pH至5.5；流速1.5 ml/min；柱溫50℃；檢測波長240 nm ；進樣量 20 μl。

對照品溶液的制備：取依達拉奉對照品適量, 精密稱定,加內(nèi)標(biāo)溶液2.50 ml, 用甲醇稀釋至50 ml。

供試品溶液的制備：精密量取依達拉奉注射液0.50 ml,加內(nèi)標(biāo)溶液2.50 ml, 用甲醇稀釋至50 ml。

內(nèi)標(biāo)溶液的制備：精密稱定氨基苯甲酸乙酯約0.5 g, 用甲醇稀釋至250 ml。

2.1.3 系統(tǒng)適用性試驗 在上述色譜條件下, 分別精密量取依達拉奉對照品和供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀, 理論板數(shù)以依達拉奉峰計算分別為2552(國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn))和5436(日本標(biāo)準(zhǔn) )。

2.2 含量測定方法

2.2.1 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn) 精密量取依達拉奉對照品及供試品溶液各20μl注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 按外標(biāo)法以峰面積計算依達拉奉注射液中依達拉奉的含量。

2.2.2 日本標(biāo)準(zhǔn) 取本品適量, 約相當(dāng)于依達拉奉3 mg, 精密加入對氨基苯甲酸乙酯溶液10 ml, 加甲醇稀釋至20 ml, 作為供試品溶液；取依達拉奉對照品75 mg, 精密稱定, 用甲醇定量稀釋至50 ml量瓶中, 精密量取2 ml, 精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 ml, 加甲醇稀釋至20 ml, 作為對照品溶液。取供試品和對照品溶液各2 μl, 注入液相色譜儀, 以峰面積計算。

2.3 結(jié)果

2.3.1 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)

2.3.1.1 線性試驗 精密稱定干燥至恒重的依達拉奉對照品適量, 加流動相制成990 μg/ml的貯備液, 分別精密量取上述貯備液 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml置 50 ml容量瓶中, 加流動相稀釋至刻度。精密量取上述溶液20 μl, 注入液相色譜儀, 記錄色譜圖及峰面積。以溶液濃度(X)為橫坐標(biāo), 相應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸, 得回歸方程Y=52.07x+50.59(r=0.9992)。依達拉奉在 11.88～27.72 μg/ml范圍內(nèi), 濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.1.2 精密度試驗 精密量取對照品溶液各20 μl, 連續(xù)進樣6次, 記錄各次測定的依達拉奉峰面積, 峰面積RSD值為0.74%。

2.3.1.3 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液, 分別于0、2、4、8、12 h依法測定, 峰面積RSD值為0.6%, 供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.1.4 重復(fù)性試驗 精密量取批號為2013063001樣品6份, 按供試品溶液制備方法制備, 依法測定, 結(jié)果六份樣品溶液的平均含量為96.8%, RSD值為0.7%。

2.3.1.5 回收率試驗 精密量取已知含量的供試品溶液9份, 每份0.6 ml, 置50 ml量瓶中, 分別精密加入對照品溶液(19.8 μg/ml)4.5、9.5、14.5 ml, 制成高、中、低三個濃度的溶液 ,各3份, 依法測定, 計算回收率, 平均回收率為100.3%, RSD為0.462%。

2.3.1.6 樣品測定 取本品三批樣品依法測定, 平均含量95.0%(占標(biāo)示量的100%)RSD為0.122%。

2.3.2 日本標(biāo)準(zhǔn)

2.3.2.1 線性試驗 精密稱定干燥至恒重的依達拉奉對照品適量, 加流動相制成990 μg/ml的貯備液, 分別精密量取上述貯備液0.56、0.65、0.46、0.85、0.95 ml置50 ml容量瓶中,分別加對氨基苯甲酸乙酯溶液2.5 ml, 加甲醇稀釋至刻度。精密量取上述溶液20 μl, 注入液相色譜儀, 記錄色譜圖及峰面積。以溶液濃度(X)為橫坐標(biāo), 相應(yīng)依達拉奉峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸, 得回歸方程Y=48.120x+14.080(r=0.9994)。依達拉奉在11.088～18.81μg/ml范圍內(nèi), 濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2.2 精密度試驗 精密量取對照品溶液(含內(nèi)標(biāo)液)各20 μl, 連續(xù)進樣6次, 記錄各次測定的依達拉奉峰面積, 峰面積RSD值為0.95%。

2.3.2.3 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液(含內(nèi)標(biāo)液),分別于0、2、4、8、12 h依法測定, 依達拉奉峰峰面積RSD值為0.7%, 供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.2.4 重復(fù)性試驗 精密量取批號為2013063001樣品6份, 按2.1.2日本標(biāo)準(zhǔn)供試品溶液制備方法制備, 依法測定,結(jié)果六份樣品溶液的平均含量為98.5%, RSD值為0.327%。

2.3.2.5 回收率試驗 精密量取已知含量的供試品溶液9份, 每份0.1 ml, 置50 ml量瓶中, 分別精密加入對照品溶液(990 μg/ml)0.5、0.6、0.7 ml, 制成高、中、低三個濃度的溶液,各3份, 再分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液(1→500)2.5 ml, 依法測定,計算回收率, 平均回收率為100.2%, RSD為0.526%。

2.3.2.6 樣品測定 取本品三批樣品依法測定, 平均含量(占標(biāo)示量的100%)為98.2%, RSD為0.305%,

2.3.3 結(jié)果分析與討論

3 討論

本項研究依據(jù)文獻比較了國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)測定含量結(jié)果的一致性, 通過F檢驗和t檢驗, 得出兩種方法的精密度和測定的依達拉奉含量平均值之間沒有顯著性差異, 說明作為含量測定方法二者可以互相代替, 尤其是日本標(biāo)準(zhǔn)(內(nèi)標(biāo)法)操作比較繁瑣、費時耗材高, 所以國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)(外標(biāo)法)完全可以替代日本原標(biāo)準(zhǔn)用于依達拉奉注射液中依達拉奉含量的控制。

［1］ 國家食品藥品監(jiān)督管理局.依達拉奉注射液標(biāo)準(zhǔn)(試行).YBH03182005.

［2］ 厚生省.日本藥局方.第 11 改正解說書 (一部) , 1986:56.

［3］ 古鐵波, 陳貴平.高效液相色譜法測定依達拉奉注射液中依達拉奉及有關(guān)物質(zhì)的含量.中國當(dāng)代醫(yī)藥, 2013, 20(21):61-65.

［4］ 齊瑩.HPLC法測定依達拉奉注射液的含量.黑龍江科技信息,2013(3):19.