潤(rùn)肺治纖湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠肺微血管和心臟影響的觀察

甘卉 王忠超 李偉 宋曉環(huán) 劉詩(shī)音 朱莉 胡金秋 王嵐

潤(rùn)肺治纖湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠肺微血管和心臟影響的觀察

甘卉 王忠超 李偉 宋曉環(huán) 劉詩(shī)音 朱莉 胡金秋 王嵐

目的 探討潤(rùn)肺治纖湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠的治療作用。方法 24只Wistar大鼠分為正常組、模型組、治療組各8只，給藥28d后做肺系數(shù)測(cè)定和肺組織羥脯氨酸（HYP）含量檢測(cè)，肺組織蘇木精-依紅（HE）染色觀察肺微血管變化并做心臟系數(shù)分析。結(jié)果 模型組肺系數(shù)和肺組織HYP含量較對(duì)照組顯著增加（P<0.05），肺組織肺纖維化病理變化明顯，肺泡間隔厚度較對(duì)照組顯著增加（P<0.05）；治療組肺系數(shù)、HYP含量、心臟系數(shù)與模型組比較顯著降低（P<0.05），肺組織微血管減少程度輕于模型組。結(jié)論 潤(rùn)肺治纖湯能夠減輕實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠肺組織微血管密度的進(jìn)行性減少，對(duì)心臟具有一定的保護(hù)作用。

肺纖維化；大鼠；肺微血管；心臟

肺纖維化是最常見的肺間質(zhì)疾病，主要病理變化為肺泡上皮損傷和成纖維細(xì)胞增殖，纖維組織增生，使肺泡間隔明顯增厚［1］，隨著肺纖維化的加重肺微血管密度進(jìn)行性減少［2］，肺呼吸功能進(jìn)行性降低，目前尚無(wú)良好治療方法。潤(rùn)肺治纖湯對(duì)博萊霉素所致肺纖維化大鼠肺組織SOD活性顯著升高，可使肺組織MDA含量顯著下降，對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性肺纖維化模型具有一定治療作用［3］。本文探討潤(rùn)肺治纖湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化模型大鼠肺組織微血管及其對(duì)心臟的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 體質(zhì)量（210±10）g Wistar大鼠 24 只，隨機(jī)分正常組、模型組、治療組各8只。動(dòng)物模型復(fù)制參見文獻(xiàn)[4-6]，造模第2d起治療組每天4ml藥物灌胃，正常組、模型組每天等量生理鹽水灌胃。

1.2 藥物 潤(rùn)肺治纖湯：由麥門冬、丹參、銀杏葉、黃芪等中藥組成；各組中草藥煎液、濃縮為每毫升相當(dāng)于原生藥材1g的藥液儲(chǔ)存冰箱備用［7］。

1.3 動(dòng)物處死與指標(biāo)檢測(cè) 造摸后28d處死動(dòng)物，心肺完整取出并分離，分別稱重計(jì)算心臟系數(shù)、肺系數(shù)；右心室重量分析:取出心臟,剪離右心室（RV）和左心室（LV）加室間隔（S）,用分析天平分別稱重后,計(jì)算心系數(shù)RV/BW，右心系數(shù)RV/(LV+S)的比值，BW為動(dòng)物體重［8］。左肺用多聚甲醛從支氣管注入后置于多聚甲醛固定，常規(guī)包埋、切片、HE染色、光鏡下觀察其肺血管病理改變。右肺組織Hyp含量檢測(cè)，方法按試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)計(jì)量資料用“±s”來(lái)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺組織勻漿液HYP含量變化 模型復(fù)制28d后治療組肺組織HYP的含量低于同期模型組（P<0.05，見圖1）。

2.2 肺系數(shù)與心臟系數(shù) (見圖2)

2.3 鏡下形態(tài)觀察 28d對(duì)照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)完整清晰；模型組大鼠肺結(jié)構(gòu)破壞明顯，肺泡間隔明顯增寬，肺泡間隔肺泡上皮和成纖維細(xì)胞數(shù)量增多，肺泡壁毛細(xì)血管幾乎見不到；治療組大鼠肺結(jié)構(gòu)較為完整，肺泡間隔增厚明顯減輕，肺纖維化病理變化較模型組明顯減輕，肺泡間隔增厚較模型組明顯減輕，可見肺泡壁毛細(xì)血管（見圖3）。

圖1 各組大鼠肺組織HYP含量的比較

圖2 各組大鼠肺系數(shù)與心臟系數(shù)比較

3 討論

肺纖維化是一種漸進(jìn)性的嚴(yán)重危害人類健康的疾病，是慢性非腫瘤疾病中預(yù)后較差的一種疾病，目前在歐洲和美國(guó)對(duì)肺纖維化還沒有被認(rèn)可的治療藥物[9]。本實(shí)驗(yàn)采用羥脯氨酸含量測(cè)定法評(píng)估肺纖維化程度，給藥28d后模型組大鼠肺系數(shù)、HYP顯著地高于正常組，表明肺纖維化動(dòng)物模型復(fù)制成功［1］。博萊霉素引發(fā)大鼠肺組織炎癥，受損組織修復(fù)的過程中，微血管增生是肺損傷早期的主要病理變化。在7～14d期間，與正常組比較，模型組大鼠肺血管生成活躍，血管的生成隨時(shí)間進(jìn)一步增加，14d后膠原纖維沉積隨時(shí)間推移逐漸增多而肺血管數(shù)量逐漸減少，給藥28d肺微血管少見，肺纖維化肺間質(zhì)微血管數(shù)量的顯著減少［2］。因潤(rùn)肺治纖湯中諸藥相伍有潤(rùn)肺、抗炎、提高免疫力、改善肺纖維化的作用，能非常顯著地提高肺組織SOD的活力［3］，改善氧化與抗氧化平衡，可抑制或減輕脂質(zhì)過氧化作用，從而保護(hù)組織細(xì)胞免受損傷。給藥28d后治療組大鼠肺系數(shù)、HYP顯著低于模型組，病理組織學(xué)顯示治療組大鼠肺結(jié)構(gòu)較為完整，肺泡間隔較模型組顯著減小，說明肺膠原纖維沉積較模型組明顯減輕肺泡間隔核數(shù)量較模型組顯著減小，說明肺泡壁成纖維細(xì)胞和肺泡上皮增殖明顯減輕。治療組心臟系數(shù)特別是右心系數(shù)顯著低于模型組，可能機(jī)制為肺血管阻力增加不明顯，右心負(fù)擔(dān)增大不明顯。綜上提示：潤(rùn)肺治纖湯對(duì)博萊霉素致肺纖維化大鼠可改善肺微循環(huán)，減輕肺循環(huán)阻力，從而減輕右心臟負(fù)擔(dān)的作用。

圖3 各組大鼠肺組織病理變化比較

[1] 金曉光，代華平，龐寶森，等.博萊霉素致大鼠肺纖維化模型肺組織的動(dòng)態(tài)病理變化及其發(fā)生機(jī)制[J].中國(guó)病理生理雜志，2009,25(4):708-714.

[2] 何彥俠，辛建保.實(shí)驗(yàn)性肺纖維化形成過程中肺組織血管生成的動(dòng)態(tài)變化[J].中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2005,14(1):89-93.

[3] 甘卉,劉大程,王嵐,等.潤(rùn)肺治纖湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺纖維化模型大鼠治療作用的研究[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2007,27(6):521-523.

[4] 王興盛，崔社懷，楊雪梅,等.肺組織血管生成變化與肺纖維化關(guān)系探討[J].中國(guó)呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志,2007,6(5):378-380.

[5] 謝莉，何振華，譚小武.匹伐他汀抑制實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠MMP-9和TIMP-1表達(dá)[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(26):6-7.

[6] 穆茂,程德云,聶莉阿，等.魏酸鈉對(duì)博來(lái)霉素肺纖維化大鼠肺組織TGFβRⅡmRNA表達(dá)的影響[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2010,16（27）:81-82.

[7] 柯雪帆，趙章忠，張玉萍,等.《傷寒論》和《金貴要略中的藥物劑量問題》[J].中國(guó)中藥雜志，1983，8(12):36-44.

[8] 盧傳義，王迪潯.不同食用油對(duì)大鼠肺血管反應(yīng)性和慢性低氧性肺動(dòng)脈高壓的影響[J].中國(guó)病理生理雜志，1992,8(3):234-237.

[9] 趙玉珂,趙銘山.秦靜吡非尼酮對(duì)特發(fā)性肺纖維化治療的研究進(jìn)展[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2013,19(9):12-13.

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.10.008

吉林省教育廳“十二五”科研項(xiàng)目［2012］第417號(hào)

吉林 130031 長(zhǎng)春醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校 （甘卉 王忠超 李偉宋曉環(huán) 劉詩(shī)音 朱莉 胡金秋 王嵐）