α—硫辛酸對(duì)鎘致雌性大鼠生殖毒性的干預(yù)研究

趙敏 劉雪昕

【摘 要】 目的 探討α-硫辛酸（LA）對(duì)鎘致雌性大鼠生殖毒性損害的保護(hù)作用。方法 將40只成年雌性大鼠分為對(duì)照組、單純?nèi)炬k組、低劑量LA組、高劑量LA組，每組10只，給對(duì)照組大鼠腹腔注射生理鹽水，其余3組大鼠腹腔注射1.0mg/kg Cdcl2溶液，每天1次，每周5天，連續(xù)6周；在第7周、第8周對(duì)照組與單純?nèi)炬k組大鼠腹腔注射生理鹽水，低、高劑量LA組大鼠分別腹腔注射20mg/kg、100 mg/kg LA溶液，每周5次，染毒第20天起連續(xù)觀察記錄動(dòng)情周期，干預(yù)結(jié)束后心臟取血制備血清，測(cè)定FSH、LH、E2、P的含量。結(jié)果 高、低劑量LA組動(dòng)情周期、動(dòng)情間期異常率有所下降，但差異不明顯；其它動(dòng)情時(shí)期在各劑量組間無(wú)明顯差異；低劑量LA組血清中P含量升高，E2含量有所升高但差異不明顯，高劑量LA組血清中E2、P含量明顯升高；血清中FSH、LH含量各劑量組間無(wú)明顯差異。結(jié)論 LA可使大鼠動(dòng)情周期和動(dòng)情間期異常率下降；使血清中E2、P水平升高，進(jìn)一步證實(shí)了LA可拮抗鎘致大鼠的生殖毒性。

【關(guān)鍵詞】 α-硫辛酸；鎘；大鼠；雌性生殖毒性；拮抗作用

【中圖分類號(hào)】 R595.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

鎘是一種半衰期長(zhǎng)達(dá)10-30年、在環(huán)境中不能降解且廣泛存在的有毒重金屬，美國(guó)毒物管理委員會(huì)將其列為第六位危及人類健康的有毒物質(zhì)。經(jīng)研究證明，鎘可對(duì)多器官、多系統(tǒng)產(chǎn)生影響，其中對(duì)生殖系統(tǒng)的毒性較為敏感且影響深遠(yuǎn)。隨著研究的不斷深入，鎘接觸的防治問(wèn)題逐漸成為重點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)探討LA對(duì)鎘致雌性大鼠生殖系統(tǒng)損害的保護(hù)作用，為鎘中毒的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年的SD雌性大鼠40只，體重180-200g。

1.2 主要試劑 氯化鎘（Cdcl2）為上海亭新制藥廠產(chǎn)品；α-硫辛酸購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；FSH、LH、E2、P放免測(cè)定藥盒購(gòu)至北京北方東雅生物技術(shù)研究所。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 建立動(dòng)物模型 將40只成年雌性SD大鼠分為對(duì)照組、單純?nèi)炬k組、低劑量LA組、高劑量LA組，每組10只，給對(duì)照組大鼠腹腔注射生理鹽水，其余3組大鼠腹腔注射1.0mg/kg Cdcl2溶液，每天1次，每周5天，連續(xù)6周；在第7周、第8周對(duì)照組與單純?nèi)炬k組大鼠腹腔注射生理鹽水，低、高劑量LA組大鼠分別腹腔注射20mg/kg、100 mg/kg LA溶液，每周5次。

1.3.2 樣本取材 干預(yù)結(jié)束后心臟取血，制備血清測(cè)定FSH、LH、E2、P含量。

1.3.3 觀察動(dòng)情周期 染毒第20天起，每12小時(shí)將用生理鹽水潤(rùn)濕的棉簽輕輕插入動(dòng)物陰道內(nèi)；轉(zhuǎn)動(dòng)兩下后取出，在載玻片上均勻轉(zhuǎn)動(dòng)做成涂片，用堿性美藍(lán)染色，于低倍鏡下觀察陰道脫落細(xì)胞的變化，判斷動(dòng)情周期[1]。

1.3.4 血清激素測(cè)定 用放射免疫分析法（RIA）測(cè)定FSH、LH、E2、P的含量。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)分析 應(yīng)用SPSS12.0版軟件中的卡方檢驗(yàn)、Q檢驗(yàn)、方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 觀察大鼠的動(dòng)情周期 與對(duì)照組相比，單純?nèi)炬k組大鼠動(dòng)情周期、動(dòng)情間期異常率明顯升高（P<0.05）；與單純?nèi)炬k組相比，高、低劑量LA組大鼠動(dòng)情周期、動(dòng)情間期異常率有所下降，但差異不明顯（P>0.05），其它動(dòng)情時(shí)期在各劑量組間無(wú)明顯差異（P>0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 血清激素含量的測(cè)定

2.2.1 E2、P水平 單純?nèi)炬k組血清中E2、P含量明顯下降 （P<0.01）；高劑量LA組血清中E2、P含量明顯升高 （P<0.01），與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P>0.05）；低劑量LA組血清中P含量明顯上升（P<0.05），E2含量有所升高但差異不顯著（P>0.05），結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 FSH與LH水平 各組間血清中FSH、LH水平未見(jiàn)明顯差異（P>0.05），無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表2。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明鎘可使血清中E2、P含量明顯下降，LA可拮抗其作用，可明顯升高血清中E2、P含量，且存在明顯的劑量—反應(yīng)效應(yīng)，劑量越大效果越明顯，高劑量LA組可使血清中P含量恢復(fù)到接近正常水平，與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異（P>0.05）；未見(jiàn)鎘對(duì)血清中FSH、LH水平明顯影響，抑或存在一定程度的影響但尚能通過(guò)下丘腦-垂體-卵巢軸的反饋調(diào)節(jié)機(jī)制維持在正常水平范圍內(nèi)。

3 討論

鎘是一種有毒重金屬，廣泛存在于生活環(huán)境和作業(yè)場(chǎng)所中，可導(dǎo)致人體、動(dòng)物多組織及多系統(tǒng)的損害。隨著工業(yè)環(huán)境污染中鎘的含量逐年上升，人們吸入體內(nèi)的鎘也呈上升趨勢(shì)，鎘所致的女性生殖毒性尤為令人關(guān)注。大量研究表明鎘可使女性月經(jīng)周期紊亂[2]、原發(fā)性閉經(jīng)或40歲前絕經(jīng)[3]。不孕婦女減少體內(nèi)重金屬鎘的含量可增加自發(fā)懷孕的機(jī)會(huì)[4]。

迄今為止，尚未發(fā)現(xiàn)能有效的預(yù)防和治療鎘中毒的方法。目前的研究表明，鎘所致的毒性與其所致的氧化損傷相關(guān)；LA是一種天然抗氧化劑，具有很強(qiáng)的清除自由基和活性氧的功能，并能協(xié)同其他抗氧化劑，是已知的天然抗氧化劑中效果最強(qiáng)的，因此本實(shí)驗(yàn)選用其做為拮抗鎘毒性的拮抗劑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LA可使動(dòng)情周期和動(dòng)情間期異常率下降，血清中E2、P含量明顯升高，且表現(xiàn)出明顯的劑量—反應(yīng)效應(yīng)，由此可見(jiàn)LA對(duì)鎘所致的雌性性腺生殖毒性有明顯的拮抗作用，可應(yīng)用于從事與鎘元素接觸密切行業(yè)的女工，從而起到一定的防治作用。

綜上所述，LA可拮抗鎘所致的雌性性腺生殖毒性。在已知的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，尚無(wú)LA可致癌、致畸或致功能性、實(shí)驗(yàn)性的不良反應(yīng)的報(bào)導(dǎo)，即使長(zhǎng)期大劑量給藥，也無(wú)任何不良反應(yīng)，這為我們臨床用藥帶來(lái)新的啟示，但LA發(fā)揮保護(hù)作用的有效劑量以及在體內(nèi)的作用機(jī)制還有待于更進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)

[1] 施新.醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1981，141-143.

[2] 金亞平.鎘對(duì)哺乳動(dòng)物生殖系統(tǒng)及其子代發(fā)育的影響[J].國(guó)外醫(yī)學(xué)衛(wèi)生學(xué)分冊(cè)，1991，18（1）： 14-18.

[3] 劉卓寶，萬(wàn)福球.[J].中華勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病雜志，1995，13（6）：371-373.

[4] Gerhard-I，et al.Heavy metals and fertility published erratum appears in J Toxicol Environ[J].J-Toxicol-Environ-Health，1998，54（8）：593.

[5] Paksy-K，Varga-B，Lazar-P.Cadmium interferes with steroid biosynthesis in rat granulose and luteal cells in vitro[J]. Biometals，1992，5（4）：245-250.