高致病性豬藍耳病滅活疫苗和弱毒疫苗的免疫效果試驗

陳玉華

(杭州市畜牧獸醫(yī)局，浙江杭州310020)

高致病性豬藍耳病(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒變異株引起的一種急性高致死性傳染病，以懷孕母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎、早產(chǎn)、產(chǎn)弱仔等繁殖障礙和仔豬呼吸困難、高死亡率為特征。該病傳播速度快、發(fā)病面廣，仔豬發(fā)病率可達100% ，死亡率可達40%以上，母豬流產(chǎn)率可達35%以上，生長豬和育肥豬病情較為緩和，但感染率和死亡率仍然很高［1-3］。

近年來，國家有關部門全面推廣應用高致病性豬藍耳病疫苗免疫，目前在學術界和養(yǎng)豬行業(yè)雖對PRRS 疫苗免疫問題存在較大爭議，但在臨床上PRRS 疫苗免疫對緩解臨床癥狀、控制該病疫情仍不失為主要應對措施之一［4-6］。為此，筆者以不同廠家生產(chǎn)的商品化PRRS 弱毒苗和滅活苗、不同劑量的PRRS 弱毒苗進行免疫效果試驗，以評價PRRS疫苗的安全性及免疫效果，以探討適合杭州地區(qū)PRRS 免疫的疫苗種類、免疫程序，降低免疫反應，完善免疫技術方案，為臨床防控高致病性豬藍耳病提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗 選擇杭州某獸用生物制品有限公司生產(chǎn)的高致病性豬藍耳病疫苗滅活苗NVDC-JXA1 株及北京某實業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的高致病性豬藍耳病弱毒疫苗JXA1-R 株、哈爾濱某生物技術開發(fā)公司生產(chǎn)的高致病性豬藍耳病弱毒疫苗CH-1R 株、上海某生物制品有限公司生產(chǎn)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征弱毒疫苗(HuN4-F112 株)進行免疫效果試驗。

1.2 試劑 藍耳病抗體監(jiān)測試劑盒購自美國愛德士(IDEXX)公司，生產(chǎn)批號為40959-V931，盒內(nèi)包括已包被好重組PRRS 抗原包被板，標準陰性、陽性對照血清，HRPO 標記抗豬IgG 抗體，樣品稀釋液，TMB 底物溶液，終止液、10x 濃縮洗液等。

1.3 試驗分組

1.3.1 高致病性豬藍耳病滅活苗和弱毒苗免疫效果比較 選用高致病性豬藍耳病疫苗滅活苗NVDC-JXA1 株、高致病性豬藍耳病弱毒苗JXA1-R株進行分組免疫試驗，免疫程序按疫苗說明書進行，滅活苗NVDC-JXA1 株于25日齡時首免，55日齡二免，弱毒疫苗CH-1R 株為對照樣品，免疫劑量均為1頭份。

1.3.2 不同廠家高致病性豬藍耳弱毒疫苗免疫效果比較 選用不同廠家生產(chǎn)的高致病性豬藍耳病弱毒疫苗JXA1-R 株(組1，組2，組3)進行免疫試驗，于仔豬25日齡進行免疫接種，劑量為1 頭份。

1.3.3 同一廠家高致病性豬藍耳病弱毒疫苗不同免疫劑量免疫效果比較 選用同一廠家生產(chǎn)的高致病性豬藍耳病弱毒疫苗JXA1-R 株進行分組試驗，組1 劑量為1 頭份，組2 為2 頭份，于仔豬25日齡時進行免疫接種。

1.4 血清樣品 上述各試驗組分別于免疫前、免疫后20 d、60 d、90 d 采集血樣，分離血清，分別編號，置－20℃冰箱中保存，抗體檢測備用。

1.5 PRRS 抗體檢測 將待檢樣品(血清)進行40倍稀釋，取100 μL 稀釋好樣品(血清)分別加入酶標板反應孔，各加陰陽性對照血清100 μL 兩孔，室溫培養(yǎng)30 min。用洗滌液洗滌3～5 次，甩盡孔內(nèi)液體，并在濾紙上拍干。每孔加入HRPO 標記抗豬IgG 抗體100 μL，室溫作用30 min，用洗滌液洗滌3～5 次，甩盡孔內(nèi)液體，并在濾紙上拍干。每孔加入100 μL 底物(TMP)溶液，室溫作用15 min，然后每孔加入100 μL 終止液，混勻，于BIO-RAD680 型酶標儀上650 nm 處讀數(shù)，利用XCHEK 軟件系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 高致病性豬藍耳病滅活苗和弱毒苗免疫效果比較 詳見表1，表2。

表2 乙豬場PRRS 弱毒苗和滅活苗免疫效果比較

由表1、表2可見，高致病性豬藍耳病滅活疫苗免疫后20 d 和60 d，甲豬場和乙豬場的PRRS 抗體均為陰性，免疫后90 d，PRRS 抗體水平開始轉(zhuǎn)陽，甲豬場有7 頭豬PRRS 抗體檢測為陽性，S/P 均值為1.78，乙豬場試驗豬的免疫抗體檢測均為陽性，S/P 均值為2.025。

采用高致病豬藍耳病弱毒疫苗免疫后，甲、乙兩豬場在免疫后20 d 豬群PRRS 抗體檢測均為陽性，甲豬場S/P 均值為2.0 以上，且持續(xù)到免疫后60 d以上，免疫后90 d S/P 均值有所下降;乙豬場S/P均值在1.1 以上，抗體水平均一性較好。

2.2 不同廠家生產(chǎn)的高致病性豬藍耳病弱毒苗免疫效果比較 詳見表3。

表3 不同廠家生產(chǎn)的PRRS 弱毒苗免疫效果比較

由表3可見，采用不同廠家生產(chǎn)的高致病性藍耳病弱毒疫苗進行分組免疫后20 d PRRS 抗體水平檢測均轉(zhuǎn)陽，免疫后90 d 抗體水平仍保持較高水平，免疫60 d 組1 S/P 均值明顯高于組2 和組3 水平，其中組2 免疫后20 d 豬群全部轉(zhuǎn)陽，S/P 均值均在1.1 以上，經(jīng)方差分析(P ＞0.5)，3 組組間差異不顯著。

2.3 同種疫苗不同免疫劑量的免疫效果比較 詳見表4。

表4 同種疫苗不同免疫劑量的免疫效果比較

由表4可見，采用不同劑量的PRRS 疫苗進行免疫，免疫后20 d 抗體水平均轉(zhuǎn)陽，且S/P 均值均大于1，至免疫后90 d 以上，其中組2 抗體水平明顯高于組1，標準差小，離散度均衡，t 檢驗，二者差異極顯著(P ＜0.01)。

3 小結(jié)與討論

本試驗表明，PRRS 弱毒疫苗的免疫效果明顯優(yōu)于滅活苗;不同廠家生產(chǎn)的弱毒疫苗，在使用相同免疫劑量的情況下，總體比較理想，且免疫安全性較好。經(jīng)不同劑量的PRRS 弱毒疫苗免疫效果比較，2頭份免疫劑量效果較1 頭份免疫劑量好，且抗體水平較均衡，離散度較小。與曹斌等(2010)［7］、母安雄等(2008)［8］對PRRS 進行進口弱毒疫苗、國產(chǎn)弱毒疫苗、普通滅活疫苗、滅活疫苗的免疫效果試驗比較，認為國產(chǎn)弱毒疫苗與進口弱毒疫苗均優(yōu)于滅活疫苗，可產(chǎn)生較高的抗體水平。目前市場上提供的PRRS 抗體檢測試劑盒雖對檢測不同PRRS 毒株的敏感性較高，但只能評估豬只是否感染PRRSV，無法區(qū)分是自然感染或人工免疫疫苗。因此在臨床實踐中，還需結(jié)合臨床觀察，包括發(fā)病死亡情況，特別是母豬繁殖障礙和早產(chǎn)、流產(chǎn)情況來確定PRRS 場內(nèi)控制情況。

PRRSV 屬披膜病毒科動脈炎病毒屬的RNA 病毒，新生仔豬肺泡巨噬細胞是PRRSV 最易感部位，通過感染組織巨噬細胞和單核細胞及局部淋巴組織向全身擴散，嚴重降低機體免疫機能，誘發(fā)各種形式(如細菌病或病毒病)的繼發(fā)感染，導致臨癥的復雜化［9］。從我國目前PRRS 流行情況看，適宜的高致病性豬藍耳病疫苗免疫，在預防該病發(fā)生和減輕臨床癥狀上具有一定作用，若堅持長期、科學、規(guī)范的免疫和抗體監(jiān)測，發(fā)生PRRS 疾病的幾率將大幅下降。因此，定期對PRRS 病毒感染情況進行監(jiān)測和免疫接種仍是控制該病流行的主要措施［10－11］。2007年開始農(nóng)業(yè)部把PRRS 納入國家強制免疫疫病范疇，同時逐步加大了對PRRS 疫病監(jiān)測和流行調(diào)查。目前，杭州市對所有豬場實施高致病性豬藍耳病疫苗強制免疫，效果明顯。

基于PRRS 弱毒疫苗較滅活苗具有免疫效果好、免疫期長等優(yōu)點，且目前杭州地區(qū)尚難找出PRRS 陰性場，選擇PRRS 弱毒苗進行免疫注射是可取的，同時有針對性的開展高致病性豬藍耳病的流行病學調(diào)查和疫苗免疫效果評價，尋找切合自身場戶的科學免疫程序及實施綜合防控措施才是預防和控制該病的重要手段。

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