瑞舒伐他汀對(duì)離體大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用及可能機(jī)制

晉月萍，蘇雪梅

他汀類(lèi)藥物是目前臨床最常用的調(diào)脂藥物，通過(guò)抑制膽固醇合成過(guò)程中的限速酶3－羥基－3－甲基戊二酰輔酶A（HMG－CoA）還原酶，而發(fā)揮其強(qiáng)大的調(diào)脂作用。瑞舒伐他汀可對(duì)心血管系統(tǒng)發(fā)揮有益影響［1］。瑞舒伐他汀具有抵制心肌梗死后心臟重構(gòu)，改善左室功能的作用［2］，改善冠狀動(dòng)脈血流緩慢的糖尿病患者冠狀動(dòng)脈血流儲(chǔ)備［3］?？梢允鎻埓笫箅x體主動(dòng)脈［4，5］，那么瑞舒伐他汀是否有可能通過(guò)舒張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流呢？目前有關(guān)瑞舒伐他汀對(duì)冠狀動(dòng)脈作用如何還未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究通過(guò)離體血管張力實(shí)驗(yàn)觀察瑞舒伐他汀對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈的作用及其可能的機(jī)制，為瑞舒伐他汀在臨床治療中的合理應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠，由山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)為醫(yī)動(dòng)字第070102。

1.2 試劑 瑞舒伐他汀，L－NAME，iberiotoxin，格列本脲，4－氨基吡啶和氯化鋇購(gòu)自Sigma公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)試劑純。1.2 生理性營(yíng)養(yǎng)液 正常生理鹽營(yíng)養(yǎng)液（PSS）成分為：NaCl 144mmol／L，KCl 5.8mmol／L，MgCl21.2mmol／L，CaCl22.5 mmol／L，Glucose 11.1mmol／L，HEPES 5。上述營(yíng)養(yǎng)液均用1 mmol／L NaOH 將pH 值調(diào)至7.4，預(yù)熱至37℃。實(shí)驗(yàn)中所述濃度均為浴管內(nèi)試劑的終濃度。

1.3 離體大鼠腎動(dòng)脈血管環(huán)的制備 大鼠擊頭致暈后，立即取出腎臟，浸入4 ℃的PSS液中。冠狀動(dòng)脈血管環(huán)的制備：用大頭針?lè)謩e固定心臟的心尖端和升主動(dòng)脈端于平皿，在左心耳下面尋找冠狀動(dòng)脈，順著冠狀動(dòng)脈的走向鈍性分離，在前降支處剪取2mm 的血管環(huán)。將兩根直徑為40μm 的鎢絲穿入管腔，固定血管環(huán)在Multi Myograph System－610M 浴槽內(nèi)傳感器上，浴槽內(nèi)含有溫度控制在37 ℃，持續(xù)通以100%O2的PSS 5 mL。標(biāo)本平衡穩(wěn)定60 min 后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，平衡期間每隔15 min 用37℃預(yù)熱的新鮮PSS更換浴槽內(nèi)液體一次。血管環(huán)的張力變化通過(guò)DMT 換能系統(tǒng)采集，并用Chart 5.3生物信號(hào)采集分析軟件記錄在計(jì)算機(jī)上。

1.4 瑞舒伐他汀對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用 在基礎(chǔ)狀態(tài)下，向浴槽內(nèi)加入苯腎上腺素（Phe，10－5mmol／L）。待血管環(huán)收縮穩(wěn)定，達(dá)到平臺(tái)后，向浴槽內(nèi)累積加入瑞舒伐他汀（10－7mmol／L～3×10－5mmol／L），使其在浴槽中的終濃度0.5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)倍增高，建立瑞舒伐他汀的累積對(duì)數(shù)濃度反應(yīng)曲線（LCCRC），觀察瑞舒伐他汀對(duì)Wistar大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用。

1.5 L－NAME和鉀通道阻斷劑對(duì)瑞舒伐他汀引起大鼠冠狀動(dòng)脈舒張的影響 在基礎(chǔ)狀態(tài)下，向浴槽內(nèi)加入苯腎上腺素（10－5mmol／L）。待血管環(huán)收縮穩(wěn)定，達(dá)到平臺(tái)后，向浴槽內(nèi)加入一氧化氮合酶（NOS）抑制劑L－NAME（100μmol／L）和不同鉀通道阻斷劑：iberiotoxin（100nmol／L），格列本脲（glibenclamide，0.1 mmol／L），4－氨 基 吡 啶（4－aminopyridine，1 mmol／L）和 氯 化 鋇（BaCl2，1mmol／L）。血管環(huán)活動(dòng)再次達(dá)到平臺(tái)后，向浴槽內(nèi)累積加 入 瑞 舒 伐 他 ?。?0－7mmol／L～10－5mmol／L），觀 察LNAME和不同鉀通道阻斷劑對(duì)瑞舒伐他汀引起大鼠冠狀動(dòng)脈舒張作用的影響。

2 結(jié) 果

2.1 瑞舒伐他汀對(duì)離體大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用 瑞舒伐他汀可濃度依賴性舒張苯腎上腺素預(yù)收縮的大鼠離體冠狀動(dòng)脈，其最大舒張效應(yīng)可達(dá)（64.31±3.44）%，見(jiàn)圖1。

2.2 L－NAME對(duì)瑞舒伐他汀舒張離體大鼠冠狀動(dòng)脈的影響

瑞舒伐他汀對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用可被NOS抑制劑L－NAME顯著抑制（P＜0.05，見(jiàn)圖1）。

圖1 L－NAME對(duì)瑞舒伐他汀舒張大鼠離體冠狀動(dòng)脈的影響

2.3 鉀通道阻斷劑對(duì)瑞舒伐他汀舒張離體大鼠冠狀動(dòng)脈的影響 為了觀察K＋通道是否參與瑞舒伐他汀的舒血管作用，使用不同亞型K＋通道阻斷劑：iberiotoxin（100nmol／L），格列本脲（0.1 mmol／L），4－氨基吡啶（1 mmol／L）和氯化鋇（BaCl2，1 mmol／L）。在此濃度，這些藥物分別可以特異性阻斷KCa通道，KATP通道，KV 通道及KIR 通道。結(jié)果顯示，iberiotoxin，格列本脲，4－氨基吡啶和BaCl2均可抑制瑞舒伐他汀對(duì)大鼠冠狀動(dòng)脈的舒張作用（P＜0.05，見(jiàn)圖2）。

圖2 鉀通道阻斷劑對(duì)瑞舒伐他汀舒張大鼠離體冠狀動(dòng)脈的影響

3 討 論

他汀類(lèi)藥物瑞舒伐他汀有直接的降壓作用［4］，并可舒張大鼠主動(dòng)脈［5，6］。而本研究結(jié)果顯示，瑞舒伐他汀還可舒張大鼠冠狀動(dòng)脈，并且其舒張作用與NO 及鉀通道有關(guān)。瑞舒伐他汀對(duì)離體冠狀動(dòng)脈的直接作用是舒張，且具有濃度依賴性。在沒(méi)有冠狀動(dòng)脈大血管病變的前提下，瑞舒伐他汀有可能通過(guò)調(diào)節(jié)冠狀動(dòng)脈微血管，改善冠狀動(dòng)脈血流量，增加心肌供血供氧。

NO 是體內(nèi)重要的舒血管物質(zhì)。NO 在內(nèi)皮NOS的作用下由左旋精氨酸轉(zhuǎn)化而來(lái)，通過(guò)激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，增加環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cGMP）含量，抑制細(xì)胞外Ca2＋內(nèi)流和抑制細(xì)胞內(nèi)Ca2＋釋放而使平滑肌舒張。許多藥物通過(guò)增加血管內(nèi)皮細(xì)胞NO 生成發(fā)揮舒血管作用［7］。本實(shí)驗(yàn)利用NOS抑制劑L－NAME，觀察瑞舒伐他汀舒張冠狀動(dòng)脈與NO 的關(guān)系。結(jié)果表明，瑞舒伐他汀對(duì)冠狀動(dòng)脈的舒張作用可被L－NAME明顯抑制，說(shuō)明瑞舒伐他汀對(duì)冠狀動(dòng)脈的舒張作用是NO 依賴的。

K＋通道在血管平滑肌上分布廣泛，是調(diào)節(jié)血管平滑肌張力的重要機(jī)制之一。K＋通道活性的改變可使動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞膜電位去極化或超極化，是參與動(dòng)脈血管舒縮調(diào)節(jié)的重要機(jī)制［8］。目前認(rèn)為血管平滑肌細(xì)胞上主要有四種K＋通道：①電壓依賴性鉀通道：膜去極化時(shí)活性升高，為平滑肌細(xì)胞膜電位的重要調(diào)節(jié)因素；②鈣激活鉀通道：與Ca2＋內(nèi)流相關(guān)，可調(diào)節(jié)膜電位，與小動(dòng)脈張力關(guān)系密切；③內(nèi)向整流鉀通道：調(diào)節(jié)多種類(lèi)型阻力血管平滑肌細(xì)胞的膜電位，與外部鉀誘導(dǎo)的血管舒張有關(guān)；④ATP 敏感性鉀通道（KATP）：與細(xì)胞代謝的變化相關(guān)，是多種藥物和內(nèi)源性血管活性物質(zhì)的作用靶點(diǎn)。4－氨基吡啶，iberiotoxin，BaCl2和格列本脲分別為它們的特異抑制劑。K＋通道開(kāi)放，K＋外流，細(xì)胞膜超極化，血管平滑肌張力下降，血管舒張。很多體內(nèi)主要的血管活性物質(zhì)、藥物可通過(guò)影響K＋通道而改變血管平滑肌張力［9］。K＋通道可能介導(dǎo)瑞舒伐他汀的舒血管作用。本研究采用離體血管張力實(shí)驗(yàn)探討不同鉀通道是否參與瑞舒伐他汀對(duì)冠狀動(dòng)脈的舒張作用。結(jié)果顯示，iberiotoxin（100 nmol／L）、格列本脲（0.1 mmol／L）、4－氨基吡啶（1 mmol／L）和BaCl2（1mmol／L）均可明顯抑制瑞舒伐他汀對(duì)腎動(dòng)脈的舒張作用。KATP通道、KCa通道、KV 通道、Kir通道可能與瑞舒伐他汀對(duì)冠狀動(dòng)脈的舒張作用有關(guān)。瑞舒伐他汀可舒張大鼠離體冠狀動(dòng)脈，其舒張作用可能與NO 和K＋通道有關(guān)。

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