安徽進(jìn)口雞群禽白血病感染狀況的調(diào)查

程寶艷 劉長(zhǎng)坤 黃金華 邵建明 胡曉苗 趙瑞宏 張丹俊*

（1.安徽出入境檢驗(yàn)檢疫局 安徽合肥 230022；2.安徽省農(nóng)科院）

1 前言

禽白血病(Avian leukosis,AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis visus，ALV)／肉瘤病毒群病毒（Rous sarcoma virus，RSV）引起的禽類多種良性和惡性腫瘤性疾病，臨床上多以免疫抑制、生長(zhǎng)抑制和多器官組織出現(xiàn)腫瘤等為主要特征[1]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)有關(guān)引進(jìn)品系（蛋雞和肉雞）及地方品種雞雞白血病的病例報(bào)告或研究報(bào)告的病例增多[2-6]，安徽省一些肉雞病例和蛋雞發(fā)病的病例以及一些蛋肉兼用型地方品種中雞白血病的病例報(bào)告

也逐漸增多[7-10]。為調(diào)查進(jìn)口祖代蛋雞和肉雞的雞白血病感染情況，本研究調(diào)查了安徽3家進(jìn)口祖代蛋雞和肉雞種雞場(chǎng)雞白血病的感染情況。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

（1）蛋雞為海蘭雞。安徽某雞場(chǎng)從美國(guó)引進(jìn)一批1日齡蛋用型海蘭祖代雞，在出機(jī)場(chǎng)放行后隨機(jī)選擇2個(gè)配套系（編號(hào)分別為C、D）各11只、22只，采集胎糞和抗凝血。到200日齡時(shí)采集抗凝血各20、40份，泄殖腔棉拭子各20、40份。海蘭父母代雞180日齡時(shí)采集抗凝血30只，泄殖腔棉拭子30份。

（2）肉雞。哈伯德祖代雞，147日齡，采集抗凝血母雞30份、公雞10份，泄殖腔棉拭子30、10份；AA祖代雞：54周、68周，血清各30份、蛋清各30份。

2.1.2 試劑

ALV-AB ELISA檢測(cè)試劑盒：美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：99-09257；ALV-J抗體ELISA檢測(cè)試劑盒：美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：99-09268。白血病病毒群特異性抗原p27：美國(guó)IDEXX公司，批號(hào)：99-09254。

2.2 方法

2.2.1 泄殖腔棉拭子樣品的p27抗原檢測(cè)

胎糞和棉拭子樣品加1mL樣品稀釋液，凍融后，取100μL上清用ALV-p27抗原酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒檢測(cè)禽白血病病毒群特異性抗原p27，具體檢測(cè)方法參見試劑盒說(shuō)明書。

2.2.2 AL特異性抗體的檢測(cè)

一日齡雛雞頸靜脈采集抗凝血，3000r/min離心5min；成年雞群用醫(yī)用采血管翅靜脈采集抗凝血，放冰箱過(guò)夜，自然分離血清，用ALV-AB ELISA檢測(cè)試劑盒、ALV-J抗體ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ALV-A/B亞型及J亞型2種抗體。具體檢測(cè)方法參見試劑盒說(shuō)明書。

2.2.3 種蛋p27抗原的檢測(cè)

海蘭祖代雞200日齡時(shí)C系和D系各收集種蛋30枚，父母代雞群30枚種蛋；哈伯德和AA雞祖代種蛋也各取30枚。每枚種蛋取1mL蛋清凍融后，用禽白血病病毒p27抗原ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ALV群特異性抗原p27。具體檢測(cè)方法參見試劑盒說(shuō)明書。

3 結(jié)果

3.1 泄殖腔棉拭子和蛋清p27抗原檢測(cè)結(jié)果

海蘭祖代雞群2次泄殖腔棉拭子p27抗原檢測(cè)結(jié)果顯示，產(chǎn)蛋高峰（200日齡）比剛引進(jìn)時(shí)（1日齡）陽(yáng)性率高。經(jīng)T檢驗(yàn)，2個(gè)配套系之間p27抗原的檢出率差異顯著；海蘭父母代雞群（180日齡）泄殖腔棉拭子與祖代雞群檢出率差異不顯著。海蘭祖代雞群與父母代雞群蛋清全部判定為陰性，檢出率為0%。在進(jìn)口祖代肉雞方面，p27抗原檢出率明顯低于祖代海蘭蛋雞，哈伯德檢出率為5%（147日齡），AA雞樣品6.7%（378日齡）和3.3%（476日齡），而蛋清也全部判定為陰性，檢出率為0%。見表1。

表1 雞群ALV泄殖腔棉拭子和蛋清p27抗原檢測(cè)結(jié)果

3.2 抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

在采集肛拭子同時(shí)雞翅靜脈采血，檢測(cè)ALVAB和ALV-J血清抗體。經(jīng)T檢驗(yàn)，海蘭祖代雞群ALV-AB兩次(1日齡和200日齡)抗體陽(yáng)性率差異不顯著，ALV-J兩次抗體陽(yáng)性率均為0%。海蘭父母代雞群ALV-AB抗體陽(yáng)性率與祖代雞群差異顯著，ALV-J抗體陽(yáng)性率也為0%。在進(jìn)口祖代肉雞方面，ALV-AB抗體陽(yáng)性率比祖代海蘭蛋雞普遍高，哈伯德為32.5%（147日齡），而AA雞更高達(dá)63.3%（378日齡）和80%（476日齡）；ALV-J抗體陽(yáng)性率方面，哈伯德為0%，只有AA雞有檢出率，兩個(gè)日齡均為20%。見表2。

表2 不同品種雞群ALV-AB、ALV-J抗體陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果

4 討論

（1）進(jìn)口祖代蛋雞方面，海蘭祖代雞2個(gè)配套系1日齡胎糞和200日齡棉拭子均有不同程度的陽(yáng)性率，其中200日齡陽(yáng)性率顯著高于1日齡；血清檢測(cè)方面，2個(gè)配套系A(chǔ)LV-AB有陽(yáng)性，而ALV-J全部為陰性。說(shuō)明進(jìn)口海蘭祖代雞ALV-J凈化效果良好，ALV-AB有20%的感染率。海蘭父母代雞群泄殖腔棉拭子p27抗原也有檢出率，血清抗體ALV-AB的檢出率比祖代高，而且種蛋蛋清的檢出率（10%）也比祖代雞群高（0%），說(shuō)明進(jìn)口雞群隨著在國(guó)內(nèi)飼養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng)，ALV的感染有增高趨勢(shì)。

（2）進(jìn)口祖代肉雞方面，哈伯德和AA雞棉拭子ALV群特異性p27抗原均有檢出率，哈伯德雞群ALV-J全部為陰性，ALV-AB抗體有較高的陽(yáng)性率。同樣說(shuō)明進(jìn)口哈伯德祖代雞ALV-J凈化效果良好，ALV-AB還有32.5%的感染率；AA雞ALV-AB陽(yáng)性率最高，ALV-J也有較高的陽(yáng)性率。種蛋方面，兩種進(jìn)口祖代肉雞蛋清的檢出率均為零。此次調(diào)查進(jìn)口祖代肉雞的日齡偏高，沒有檢測(cè)到1日齡的感染狀況，是不是在國(guó)內(nèi)感染或在國(guó)內(nèi)飼養(yǎng)時(shí)感染率增高，有待進(jìn)步一調(diào)研。

（3）ELISA方法適用于ALV大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查和生產(chǎn)凈化的檢測(cè)。盡管針對(duì)ALV保守p27抗原的ELISA方法無(wú)法區(qū)分內(nèi)外源ALV，但ALV是易發(fā)生突變的反轉(zhuǎn)錄病毒，其中ALV-J又是ALV中最易發(fā)生變異的一個(gè)亞群，特別是其gp85的高變區(qū)引起ALV-J持續(xù)不斷的抗原性變化[11]。人們推測(cè)ALV-J的出現(xiàn)及其不斷變異是一些外源性ALV病毒和內(nèi)源性ALV成分重組的結(jié)果[12]。為了防止病毒的不斷變異，各國(guó)研究人員試圖建立更多無(wú)內(nèi)源性ALV病毒污染的新品種改良雞系，進(jìn)而阻止新亞群病毒的出現(xiàn)[13]。作為進(jìn)口祖代雞，無(wú)內(nèi)源性ALV尤其重要，使用ELISA 法調(diào)查可以反映其感染情況。

5 結(jié)論

此次以禽白血病為目標(biāo)，以血清學(xué)調(diào)查和病原學(xué)檢測(cè)為主旨，最終了解安徽轄區(qū)引進(jìn)國(guó)外種雞的禽白血病感染狀況。調(diào)查結(jié)果可為制定相關(guān)雙邊動(dòng)物貿(mào)易條款提供參考依據(jù)，更大程度地拒疫病于國(guó)門之外，保護(hù)我國(guó)畜牧業(yè)健康發(fā)展。

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