克拉霉素片含量不確定度的HPLC測量方法分析

麥煥章 旋桂香 李煒鳳 楊育輝

（番禺區(qū)中心醫(yī)院,廣東 廣州 511400）

克拉霉素片含量不確定度的HPLC測量方法分析

麥煥章 旋桂香 李煒鳳 楊育輝

（番禺區(qū)中心醫(yī)院,廣東 廣州 511400）

目的分析HPLC測量方法測定克拉霉素片含量不確定度的方法。方法評估和分析測定克拉霉素片各個(gè)環(huán)節(jié)的不確定度，指出影響不確定度的主要因素。結(jié)果得出影響測定環(huán)節(jié)各個(gè)變量不確定度，同時(shí)給出測定結(jié)果擴(kuò)展不確定度以及置信水平。結(jié)論HPLC法測定克拉霉素片含量不確定度大概為1.6%。

克拉霉素片；含量；不確定度；HPLC法

克拉霉素片多用于臨床鼻咽、呼吸道、宮頸炎、肺炎支原體和皮膚軟組織感染的治療中,臨床多采用HPLC外標(biāo)一點(diǎn)法測定克拉霉素片含量,本文分析評估了采用HPLC法測定克拉霉素片含量的不確定度,分析影響克拉霉素不確定度的相關(guān)因素,為臨床正確評價(jià)克拉霉素片不確定度提供參考意見。

1 測定方法

1.1 克拉霉素片含量不確定HPLC測量準(zhǔn)備條件

實(shí)驗(yàn)多采用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑,流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液-乙腈,柱溫為45 ℃,檢測波長210 nm,將克拉霉素峰值作為計(jì)算標(biāo)準(zhǔn),理論板數(shù)要＞3000,拖尾因子＜2.0,確保克拉霉素峰值、相鄰雜峰分離度與要求相符。

1.2 配置對照品溶液

克拉霉素作為對照品,適量,將其置于50 mL的量瓶中,流動(dòng)相溶解,定量稀釋,將其稀釋為0.35 mg/mL的溶液。

1.3 配置供試品溶液

取克拉霉素10片,0.25克/片,稱定,研磨,稱取適量研磨的細(xì)粉,將其置于100 mL的量瓶中,向量瓶中加入流動(dòng)相,搖晃溶解,加水稀釋,用力搖勻并濾過,該溶液即為供試品溶液。

1.4 克拉霉素片含量不確定度的測定方法及數(shù)據(jù)分析

分別取對照品溶液和供試品溶液各20 μL,將兩種溶液分別注入相色譜儀,密切觀察并記錄兩種溶液的峰面積,結(jié)果見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

計(jì)算公式如下:X=[（As×Vs×Wr×M×P） /（Ar×Ws×Vr×K ×10） ]×100%,其中,X為克拉霉素標(biāo)示量,As是供試品溶液峰面積,Vs是樣品稀釋倍數(shù),Wr是對照品稱樣量,M是10片克拉霉素重量,P是對照品純度,Ar是對照品溶液峰面積,Ws是供試品稱樣量, Vr是對照品稀釋倍數(shù),K標(biāo)示克拉霉素片劑標(biāo)示量（0.25 g）。

2 克拉霉素片含量不確定度的量化分析

2.1 對照品引起的不確定度

由對照品溶液純度造成的克拉霉素片相對不確定度屬于B類,中國藥品生物制品檢定所提供純度為97.9%的克拉霉素對照品,在使用該對照品之前無需干燥處理。

測量過程中,因?qū)φ掌贩Q量造成的克拉霉素片相對不確定度也是B類不確定度,使用雙量程電子分析稱,最大允許誤差為正負(fù)0.03 mg,所以,對照品稱量引起的相對不確定度為0.03/31/2=0.0173 mg。

由電子分析電平稱重復(fù)性引起的不確定度也是B類不確定度,電子分析天平允許誤差為正負(fù)0.05 mg,按照矩形分布,其不準(zhǔn)確度為0.05/31/2=0.0289 mg,單次稱量的不確定度為（0.01732+0.02892）1/2=0.0337 mg。整個(gè)稱量的過程根據(jù)減重的方法進(jìn)行稱量,最終得出不確定度為0.0477mg。

對照品稀釋造成的不確定度屬于B類不確定度,按照規(guī)定,A級50 mL容量瓶的體積允差加減0.05 mL,接下來可以依據(jù)三角分布相關(guān)性質(zhì)得到不確定度[1]。

由容量瓶體積重復(fù)性引起的克拉霉素片含量不確定度屬A類,將50 mL量瓶加水稀釋至刻度,重復(fù)10次稱量,得到不確定度。

溫度引起的不確定是B類不確定度,20 ℃溫度下校準(zhǔn)50 mL容量瓶,按照矩形分布,95%置信概率下,不確定度是6×2.1×10-4×50/（31/2×50）=7.27×10-4。

對照品溶液稀釋造成的不確定度由對照品稀釋、容量瓶體積重復(fù)性以及溫度引起的不確定共同絕對,計(jì)算所得的不確定為8.50×10-4。

2.2 供試品引起的不確定度

供試品引起的不確定主要包括供試品稱量引起的不確定度、供試品稀釋引起的不確定度、對照品溶液進(jìn)樣重現(xiàn)性的不確定度、供試品溶液進(jìn)樣重現(xiàn)性的不確定、平均片重稱量引起的不確定度引起的。其中,供試品稱量引起的不確定度包括電子分析天平校準(zhǔn)不確定度、電子分析電平稱量重復(fù)性不確定度以及供試品雙樣稱量的相對不確定度。供試品稀釋引起的相對不確定度包括容量瓶體積重復(fù)性不確定度、溫差引起的不確定度以及供試品溶液稀釋引起的相對不確定度共同決定。計(jì)算方法如上。引起克拉霉素片含量不確定的因素及分析結(jié)果見表2。

表2 不確定度各分量分析結(jié)果

3 討 論

任何完整的藥品檢驗(yàn)報(bào)告書中均應(yīng)包含不確定度評定,因?yàn)樵跈z驗(yàn)過程中,任何檢驗(yàn)防范都會(huì)引起不確定度,而不確定度很大程度影響著監(jiān)測結(jié)果[2]。通過本文不確定度的分析可知,利用HPLC法測定克拉霉素含片不確定度多來自稱量對照品、配置供試品溶液以及液相色譜儀等多個(gè)環(huán)節(jié),在上述影響因素中,對照品及供試品溶液的色譜分析進(jìn)樣環(huán)節(jié)不確定度在很大程度上影響著檢驗(yàn)不確定的結(jié)果。本文研究表明,利用HPLC方法測定克拉霉素片含量的時(shí)候,要保證被測藥品相關(guān)參數(shù)和液相色譜儀技術(shù)性能指標(biāo)項(xiàng)適合,并確保定期進(jìn)行相色譜儀計(jì)量檢定和核查工作,保證液相色譜儀處于穩(wěn)定狀態(tài)；另外,要選用精度較高的天平進(jìn)行稱量,從各方面確保降低操作及人為因素造成的不利結(jié)果[3-4]。

總之,利用HPLC測量方法測量克拉霉素含量不確定的時(shí)候,要保證液相色譜儀各項(xiàng)性能指標(biāo)正常,在測定過程中要核查各個(gè)環(huán)節(jié),確保液相色譜儀工作于最佳狀態(tài),以便確?？死顾仄繖z驗(yàn)結(jié)果的客觀正確性。不能為了節(jié)約成本或方便操作等目的降低對照品及供試品取樣量,應(yīng)從根本上杜絕人為因素或隨意操作等對克拉霉素片含量不確定度測量的影響,從而實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確無誤的測量。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:153.

[2] 邢以文.硫酸慶大霉素片含量測定的不確定度評估[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2011,2(12):67-68.

[3] 吳美芳.高效液相色譜法測定克拉霉素片的溶出度[J].中國藥師,2008,3(12):57-58.

[4] 饒毅,夏川川,周海濱,等.高效液相色譜法測定白芍總苷的不確定度分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,4(3):57-58.

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1671-8194（2014）25-0090-02