正交試驗(yàn)優(yōu)選羅勒子中總黃酮的提取工藝

謝 晶 孫 蓮*

（新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011）

正交試驗(yàn)優(yōu)選羅勒子中總黃酮的提取工藝

謝 晶 孫 蓮*

（新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011）

目的優(yōu)選羅勒子中總黃酮的提取工藝。方法以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，通過(guò)紫外分光光度法測(cè)定羅勒子中總黃酮含量，通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)考察不同因素和水平對(duì)提取工藝的影響。結(jié)果甲醇濃度對(duì)羅勒子中總黃酮含量影響最大，其他三個(gè)因素對(duì)樣品含量的影響大小依次是：料液比＞提取次數(shù)＞提取時(shí)間。結(jié)論最佳提取工藝條件為甲醇濃度80%，固液比1∶10，提取1 h，提取1次。

羅勒子；總黃酮；提取方法；正交試驗(yàn)

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明羅勒子具有抗癌、降血壓、避孕、利尿、治療心血管疾病等作用[1]。羅勒子的化學(xué)成分復(fù)雜，以揮發(fā)油、黃酮及其苷類、香豆素類為主[2]。但其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀與鑒別兩項(xiàng)，不僅不能有效控制羅勒子的內(nèi)在質(zhì)量，也制約了其運(yùn)用價(jià)值和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究。本文以羅勒子中總黃酮為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)與正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選出羅勒子中總黃酮的提取工藝。

1 材料與儀器

1.1 材料

羅勒子采自新疆和田地區(qū)，經(jīng)生藥教研室帕麗達(dá)教授鑒定為唇形科植物羅勒的果實(shí)。

1.2 試劑

石油醚、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、甲醇均為分析純（天津市富宇精細(xì)化工有限公司），蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

1.3 儀器

AK-1000A搖擺式中藥粉碎機(jī)(溫嶺市奧力中藥機(jī)械有限公司)，AL-204型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），紫外分光光度計(jì)（島津UV-2550），HWS26型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 單因素考察

2.1.1 不同的提取溶劑：觀察不同溶劑對(duì)樣品蘆丁含量的影響，選擇甲醇為提取溶劑。見(jiàn)表1。

2.1.2 不同的提取方法

表1 不同溶劑對(duì)樣品蘆丁含量的影響（蘆丁含量mg/mL）

不同方法對(duì)樣品蘆丁含量的影響見(jiàn)表2。①甲醇超聲：兩份脫脂后濾渣各加入甲醇30 mL，超聲提取30 min（T=30 ℃，100 Hz），濾液置于25 mL容量瓶中，甲醇定容。②甲醇回流：兩份脫脂后濾渣各加入甲醇30 mL，回流提取2次（T=85 ℃），每次1 h，濾液置于25 mL容量瓶中，甲醇定容。③精密吸取供試品儲(chǔ)備液0.5 mL置于10 mL容量瓶中，甲醇稀釋，測(cè)定吸光度，選擇回流法。

表2 不同方法對(duì)樣品蘆丁含量的影響（蘆丁含量mg/mL）

2.2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以測(cè)得的樣品蘆丁含量(mg/mL)為考察指標(biāo)，見(jiàn)表3。

表3 因素水平表

2.3 樣品提取

稱取2.0 g羅勒子粉末9份，石油醚脫脂后采用不同濃度甲醇以不同物料比回流提取不同時(shí)間不同次數(shù)，過(guò)濾置于25 mL容量瓶，精密吸取濾液0.5 mL置10 mL容量瓶，定容后即為供試品溶液。

2.4 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10 mg，以適量甲醇溶液溶解后置于50 mL容量瓶中并稀釋到刻度，搖勻，即得0.2 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

表5 L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表

2.5 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

選擇測(cè)定波長(zhǎng)為交叉吸收326 nm處。

2.6 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

蘆丁檢測(cè)濃度在0.01～0.05 mg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。見(jiàn)表4和圖1。

表4 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.7 正交試驗(yàn)及其結(jié)果

正交試驗(yàn)及其結(jié)果見(jiàn)表5，方差分析見(jiàn)表6。

2.8 試驗(yàn)驗(yàn)證

按照正交試驗(yàn)的最佳提取工藝條件A2B1C1D1進(jìn)行驗(yàn)證（n=3），蘆丁含量為0.0477 mg/mL，與正交試驗(yàn)各工藝結(jié)果的平均值比較含量較高，RSD值為0.98%，說(shuō)明該工藝條件穩(wěn)定可行。

表6 方差分析表

3 討 論

文獻(xiàn)報(bào)道的植物中總黃酮含量測(cè)定多采用比色法，而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蘆丁對(duì)照品溶液顯色后，在500 nm處有最大吸收，符合文獻(xiàn)記載；而羅勒子樣品溶液顯色后在500 nm處有多個(gè)最大吸收峰，無(wú)法進(jìn)行比較；而二者不顯色在326 nm處有交叉吸收現(xiàn)象。因此，本實(shí)驗(yàn)采用顯色法無(wú)法測(cè)定羅勒子樣品，只能采用紫外分光光度法直接測(cè)定樣品中蘆丁含量，測(cè)定波長(zhǎng)選定326 nm。

本研究通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)，以蘆丁為對(duì)照品，使用紫外分光光度法測(cè)定羅勒子中總黃酮含量，優(yōu)化工藝穩(wěn)定可靠。羅勒子總黃酮提取工藝的研究為羅勒子的深入開(kāi)發(fā)和研究提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] 曹維金,陳娜.羅勒子油脂提取工藝的比較研究及其脂肪酸組成的氣相色譜分析[J].油脂工程技術(shù),2011(6):48-51.

[2] 阿布都許庫(kù)爾·吐?tīng)栠d,孫蓮,哈及尼沙,等.GC-MS法分析新疆羅勒子揮發(fā)油的化學(xué)成分[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥,2013,22(6):21-23.

Optimization of Extract Technology of Total Favonoids in Seme Ocimum Basilicum by Orthogonal Experiment

XIE Jing, SUN Lian
(College of Pharmacy of Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, China)

ObjectiveTo optimize the extract technology of the total favonoids from the fruit of ocimum basilicum.MethodsDetermination of total favonoids in fruit of ocimum basilicum by UV, the content of favonoids was computed with rutin as standard substance, and the influence of different factors and levels on the extract technology were investigated by means of simple factor experiment and orthogonal experiment.ResultsMethanol concentration had great impact on the target. The order of the other 3 factors that affected the flavonoid extractions was amount of ethanol>number of extractions>extraction time.ConclusionThe optimum extraction technology was as follows: 80% Methanol concentration 10 times the weight of the dried material, reflux extracting total favonoids once, 1 h at each time.

The fruit of ocimum basilicum; Total favonoids; Extracttechnology; Orthogonal experiment

R9

B

1671-8194（2014）23-0004-02

新疆醫(yī)科大學(xué)創(chuàng)新基金——羅勒子脂溶性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究（基金編號(hào)：XJC201122）

*通訊作者