紅龍鎮(zhèn)痛片提取工藝的改進

姬 濤 李懷平 王 朔

山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，濟南 250101

紅龍鎮(zhèn)痛片為藏醫(yī)古驗方，由龍骨、印度獐牙菜、紅花等十五味藥組成，具有醒腦開竅、通絡止痛的功效，原方收載于云丹嘉措的《藏醫(yī)臨床札記》，一百多年的臨床應用證明，其對偏頭痛、血管性頭痛效果良好。對該藥品原工藝中小部分藥材進行提取，大部分藥材直接粉碎入藥，有效成分釋放緩慢，同時因為原藥材細粉入藥，也影響到衛(wèi)生學不合格的問題。本實驗根據配方中藥材所含化學成分的理化性質，選用不同的溶劑進行分開提取，保證藥材中的藥效成分能夠被充分的提取出來。本研究將紅龍鎮(zhèn)痛片制劑前工藝分為以下3個部分。①醇提部分：印度獐牙菜、紅花、金腰草、川西小黃菊、馬尿泡、波棱瓜子6味藥；②水提部分：鐵棒錘、唐古特烏頭、珍珠母、龍骨、泉華、石花、短穗兔耳草7味藥；③粉碎部分：安息香、熊膽粉2味藥。本研究著重對醇提兩部分進行了工藝研究，采用正交試驗，優(yōu)選了最佳提取工藝。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；高效液相色譜儀：日立L-2100泵，日立L-2400檢測器；島津AUW220D電子天平；HH-4數顯恒溫水浴鍋（常州榮冠試驗分析儀器廠）。

1.1.2 試藥 藥材由青海金珂藏藥股份有限公司提供；獐牙菜苦苷對照品（0785-200303）由中國食品藥品檢定研究院提供；水為純化水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 方法

本品原標準中以獐牙菜苦苷含量為含量測定項，因此本試驗以獐牙菜苦苷提取率作為指標之一，進行了醇提工藝的考察。

1.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.2%磷酸溶液（18∶82）為流動相；檢測波長235 nm；進樣量 5 μl；流速 1 ml/min，柱溫室溫[1]。

1.2.2 對照品溶液的制備 取獐牙菜苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含50 μg的溶液，搖勻，即得。

1.2.3 藥材溶液的制備 取印度獐牙菜藥材細粉約0.5 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲處理40 min，取出，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.4 供試品溶液的制備 取實驗制得樣品細粉約1.0 g，精密稱定，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲處理40 min，取出，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.5 醇濃度篩選 取印度獐牙菜20.1 g、紅花20.1 g、金腰草4.2 g、川西小黃菊20.1 g、馬尿泡4.05 g、波棱瓜子4.05 g，6味藥材混合共計72.6 g，共取4份，分別加入8倍量35%、55%、75%、95%乙醇回流提取2次，每次 2 h，濾過，濾液濃縮干燥，研細，按“1.2.4”項下制備供試品溶液，測定獐牙菜苦苷含量，計算提取率。

1.2.6 正交試驗 為進一步優(yōu)選醇提最佳工藝，選定加醇量、提取時間和提取次數作為考察的三個因素，各取三個水平，以獐牙菜苦苷提取率及干膏得率為指標綜合評分。正交試驗設計見表1。

表1 醇提正交試驗設計表

實驗室中的提取時間是由提取次數確定，提取時間由前往后依次進行。

稱取印度獐牙菜等6味藥材混合共計72.6 g，共取9份，按正交表順序進行工藝試驗，按“1.2.4”項下制備供試品溶液，測定獐牙菜苦苷含量，計算提取率。

2 結果

2.1 不同濃度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比較

不同濃度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比較具體結果見表2。結果表明，醇濃度越高，獐牙菜苦苷提取率越高，而75%乙醇和95%乙醇的提取效果差異較小，為保證藥物中有效成分能最大限度的提取出來，同時也能夠節(jié)約生產成本，確定采用濃度為75%乙醇進行提取。

表2 不同濃度乙醇獐牙菜苦苷提取率的比較

2.2 醇提正交試驗

醇提正交試驗直觀分析具體見表3，醇提正交試驗方差分析具體見表4。由方差分析結果看，三個因素對提取效果影響的作用次序為C>A>B，其中C因素對結果有顯著性影響，即提取次數影響最大，加醇量次之，提取時間影響最小，再結合直觀分析結果，確定醇提的最佳工藝參數為A2B1C3，即每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h。

表3 醇提正交試驗直觀分析

表4 醇提正交試驗方差分析

2.3 驗證試驗

按配方配比稱取醇提藥材共計363 g，共取3份，采用正交試驗優(yōu)選得到的條件進行醇提，測定獐牙菜苦苷提取率及干膏率，結果與正交試驗基本一致，說明提取工藝條件穩(wěn)定可行（表5）。

表5 醇提取驗證試驗結果

3 討論

方中金腰草、川西小黃菊中含黃酮類等有效成分[2-3]，馬尿泡中含有生物堿類等成分[4]，波棱瓜子中含有木質素及油脂類成分等[5]，這些成分在醇中都有很好的溶解度，同時也有報道，印度獐牙菜[6]、紅花[7]醇提效果也較好，因此本文將上述六味藥合并進行醇提取，優(yōu)選最佳提取方案。

本實驗參考原標準以獐牙菜苦苷含量為主要指標，同時以干膏得率為次要指標，兩者結合，綜合評價，可以比較客觀地反映各個因素及因素水平對提取工藝的影響。

本實驗以最大程度提取藥材中有效成分為原則，通過系統(tǒng)的研究得到最佳工藝為藥材每次加8倍量75%乙醇回流提取3次，第一次提取2 h，第二、三次各提取1 h，驗證結果表明此工藝穩(wěn)定可行，適用于工業(yè)生產。

對本方原工藝中小部分藥材進行提取，大部分藥材直接粉碎入藥，而傳統(tǒng)藏藥中很多成藥都以藥材粉末直接入藥，存在生產方式粗放、質量較難控制等缺點[8]，因此，怎樣將現代技術引入藏藥的二次開發(fā)中，成為目前制約藏藥發(fā)展的一個因素。通過本實驗的研究，希望能為其他藏藥品種的研發(fā)提供借鑒。

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