G蛋白偶聯(lián)受體56基因敲除抑制少突膠質(zhì)前體細(xì)胞成熟*

鄧醫(yī)宇， 朱高峰， 方 明， 曾文新， 蔣文新， 曾紅科

(廣東省人民醫(yī)院，廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院急危重癥醫(yī)學(xué)部，廣東廣州 510080)

G蛋白偶聯(lián)受體56基因敲除抑制少突膠質(zhì)前體細(xì)胞成熟*

鄧醫(yī)宇， 朱高峰， 方 明， 曾文新， 蔣文新， 曾紅科△

(廣東省人民醫(yī)院，廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院急危重癥醫(yī)學(xué)部，廣東廣州 510080)

目的：探討G蛋白偶聯(lián)受體56(GPR56)基因敲除對小鼠腦胼胝體內(nèi)軸突髓鞘化和少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPCs)成熟的影響。方法：篩選出GPR56基因雜合型(GPR56+/-)和敲除型(GPR56-/-)小鼠36只，分為GPR56+/-和GPR56-/-組，每組18只。每組根據(jù)小鼠出生后時間分為出生后7 d(P7)、14 d(P14)、21 d(P21)和28 d(P28)4個亞組。應(yīng)用FluoroMyelin染色觀察P14、P21和P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠腦胼胝體內(nèi)髓鞘形成。用電鏡觀察P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)軸突髓鞘化，比較髓鞘的厚度。用熒光免疫組化染色觀察P7 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)血小板源性生長因子α受體陽性(PDGF-αR+)細(xì)胞(即OPCs)的數(shù)量。用原位雜交監(jiān)測P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)髓鞘蛋白脂質(zhì)蛋白陽性(PLP+)細(xì)胞數(shù)。用出生后1 d的GPR56+/-和GPR56-/-小鼠腦皮質(zhì)做體外OPCs培養(yǎng)并誘導(dǎo)其分化成熟，觀察pro-oligodendroblast、immature oligodendrocyte和mature oligodendrocyte階段 O4+細(xì)胞百分比。結(jié)果：與 GPR56+/-小鼠比較，在 P14、P21和 P28 GPR56-/-小鼠腦胼胝體中髓鞘的形成明顯減少。電鏡見P28 GPR56-/-小鼠腦胼胝體內(nèi)髓鞘化軸突的數(shù)量明顯減少，髓鞘g-ratio值變大，髓鞘厚度變薄。熒光免疫組化和原位雜交結(jié)果顯示P7 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)PDGF-aR+細(xì)胞數(shù)量無差異，但P28 GPR56+/-小鼠胼胝體內(nèi)PLP+細(xì)胞數(shù)明顯多于P28 GPR56-/-小鼠。體外細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果顯示在pro-oligodendroblast階段GPR56-/-O4+細(xì)胞百分比明顯多于GPR56+/-O4+細(xì)胞，在immature oligodendrocyte和mature oligodendrocyte階段 GPR56-/-O4+細(xì)胞百分比明顯少于 GPR56+/-O4+細(xì)胞。結(jié)論：GPR56蛋白可能參與了腦白質(zhì)軸突髓鞘化和OPCs的成熟。

G蛋白偶聯(lián)受體56;胼胝體;少突膠質(zhì)細(xì)胞;髓鞘化

軸突的髓鞘化是一個復(fù)雜的生理過程，需要大量的信號分子參與［1］。少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(oligodendrocyte precursor cells，OPCs)分化成熟、神經(jīng)元軸突發(fā)育、成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocytes，OLs)向目標(biāo)軸突的遷移和OLs突起黏附到神經(jīng)元軸突上發(fā)生相互作用均是軸突髓鞘化的重要環(huán)節(jié)［2］。近年來研究發(fā)現(xiàn)一些黏附性G蛋白偶聯(lián)受體(Adhesion G-protein-coupled receptors，adhesion GPRs)可能參與了軸突的髓鞘化過程［3-4］。有研究發(fā)現(xiàn)Gpr126突變可導(dǎo)致金魚軸突髓鞘化障礙［5］，Gpr126基因突變的老鼠也表現(xiàn)嚴(yán)重的低髓鞘化周圍神經(jīng)病變［6］。GPR17在少突膠質(zhì)細(xì)胞系特異地表達(dá)，但在軸突髓鞘化的高峰期和成熟的OLs中表達(dá)減少，Gpr17過度表達(dá)或敲除均會導(dǎo)致軸突髓鞘化異常［7-8］。

GPR56屬于黏附性G蛋白偶聯(lián)受體家族。既往報道表明:人GPR56基因發(fā)生突變會導(dǎo)致雙側(cè)大腦皮層多小腦溝回畸形和白質(zhì)發(fā)育缺陷［9］。GPR56基因突變所致的白質(zhì)萎縮和局灶MRI-T2強(qiáng)信號類似于多發(fā)性硬化的病理改變［10］，提示GPR56有可能參與了腦白質(zhì)的發(fā)育和軸突髓鞘化。為了證實(shí)GPR56蛋白是否參與神經(jīng)元軸突的發(fā)育和髓鞘化，本研究利用GPR56基因敲除(GPR56-/-)小鼠，用Fluoro-Myelin染色觀察不同年齡階段 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)髓鞘形成情況，用電鏡觀察成年GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)軸突髓鞘比例及髓鞘的厚度，從而證實(shí)GPR56基因敲除是否導(dǎo)致軸突髓鞘化障礙。同時，采用血小板源性生長因子 α受體(platelet-derived growth factor alpha receptor，PDGF-aR)免疫熒光染色、蛋白脂質(zhì)蛋白(proteolipid protein，PLP)原位雜交技術(shù)及體外OPCs培養(yǎng)進(jìn)一步證實(shí)GPR56基因敲除是否會導(dǎo)致OPCs分化成熟障礙，從而引起軸突低髓鞘化。

材料和方法

1 材料

GPR56基因敲除小鼠從美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬波士頓兒童醫(yī)院Piao Xianhua博士實(shí)驗(yàn)室贈獲。GPR56+/-和GPR56-/-小鼠在暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)條件下自然飲食。購買商業(yè)化抗體和試劑盒:兔抗PDGF-aR(Santa Cruz)、鼠抗O4 (Chemicon)和 FluoroMyelin試劑盒(Life Technologies)。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 將出生后小鼠進(jìn)行基因分型，分為GPR56+/-和GPR56-/-組。每組在出生后7 d(P7)、14d(P14)、21d(P21)和28d(P28)各取3只小鼠進(jìn)行灌流固定后行FluoroMyelin染色、免疫熒光組織化學(xué)染色或PLP原位雜交。每組在出生后28 d各取3只小鼠進(jìn)行電鏡檢測。各組動物數(shù)見表1。

表1 GPR56+/-和GPR56-/-組在不同時點(diǎn)使用小鼠的數(shù)量Table 1.Numbers of mice at various time points in GPR56+/-group and GPR56-/-group

2.2 FluoroMyelin染色 FluoroMyelin染色能夠快速和選擇性標(biāo)記冰凍腦切片內(nèi)髓鞘的分布。將腦切片放在室溫下用PBS漂洗20 min，同時將FluoroMyelin原液稀釋300倍，隨后將稀釋的FluoroMyelin染色液滴加到腦切片上，在室溫下染色20 min。染色完成后，用PBS漂洗3次，每次10 min。最后封片，在熒光顯微鏡下觀察腦胼胝體內(nèi)髓鞘的分布。

2.3 免疫組織化學(xué)染色 每組動物灌流、固定后移入30%蔗糖溶液過夜。冰凍切片機(jī)-20℃低溫取視交叉水平冠狀切片，片厚20 μm。正常工作血清封閉。用兔抗PDGF-aRⅠ抗4℃孵育過夜后，PBS清洗3次，每次10 min，滴加帶紅色熒光的Ⅱ抗工作液室溫下孵育1 h。PBS清洗3遍后用 mounting medium封片。在熒光顯微鏡(Olympus System Microscope Model BX53)下觀察結(jié)果。

2.4 PLP探針原位雜交 -70℃保存的切片在室溫下放置30 min，直至切片回到室溫，再放到50℃雜交爐中烤片烤20 min;DEPC-PBS洗片5 min;4% DEPC的多聚甲醛中前固定20 min，洗片;蛋白酶K緩沖液處理組織切片，洗片;后固定30 min;置于新配制的TEA緩沖液洗10 min;將切片浸在預(yù)雜交液中放入63～65℃的雜交爐中預(yù)雜交3～4 h;制備濕盒(干的雜交盒底部加用過的預(yù)雜交液)，將含8 ng/ 100 μL地高辛標(biāo)記PLP探針的雜交液加在切片上;放入65℃的雜交爐中雜交12～16 h;65℃，在預(yù)熱的0.2 mol/L SSC中洗掉蓋玻片;用PBT洗2次，每次20 min;10%血清(PBT稀釋)封閉30 min;倒去切片上的血清，不洗，加含1∶2 000的抗地高辛抗體的血清孵育3 h;PBT洗6次，每次10 min;堿性磷酸酶緩沖液洗2次，每次5 min;加顯色液，避光，顯色; PBS終止顯色反應(yīng);4%多聚甲醛固定1～2 h;PBS漂洗，甘油封片劑封片，室溫保存。

2.5 電鏡 出生后28 d GPR56+/-和GPR56-/-小鼠各3只用2%甲醛+3%戊二醛溶液灌流固定后，取大腦胼胝體制成1 mm×1 mm×1 mm組織塊。用振蕩切片機(jī)將組織塊切成80～100 μm的切片。0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液漂洗后，用1%四氧化鋨后固定2 h，脫水、樹脂包埋。切超薄切片，在Philips CM 120電鏡(FEI Company)下觀察。從每只動物胼胝體近中側(cè)取 4個非重疊視野，拍不同倍數(shù)的照片。用ImageJ軟件測量每個神經(jīng)纖維軸突和總神經(jīng)纖維(軸突+髓鞘)的直徑。用公式g-ratio=神經(jīng)纖維軸突直徑/總神經(jīng)纖維(軸突+髓鞘)的直徑計(jì)算g-ratio值。這個公式等同于神經(jīng)纖維軸突橫截面積除以總神經(jīng)纖維的橫截面積。比較 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠神經(jīng)纖維直徑的大小。

2.6 體外OPC培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化成熟及O4免疫組化染色 將新生 1 d小鼠進(jìn)行基因分型后分為GPR56+/-和GPR56-/-組，分別進(jìn)行少突膠質(zhì)前體細(xì)胞培養(yǎng)。將小鼠斷頭，分離鼠腦，置于PBS中，剝?nèi)パ苣X膜，分離皮質(zhì)，剪碎。胰酶消化15 min后吹散，篩網(wǎng)過濾。800 r/min離心2 min后棄上清，細(xì)胞沉淀用DMEM培養(yǎng)基懸浮，計(jì)數(shù)細(xì)胞密度，接種于25 cm2塑料培養(yǎng)瓶中，在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每隔3 d換液1次，培養(yǎng)至第7～10天，細(xì)胞融合。將培養(yǎng)瓶置于恒溫水平搖床上，37℃、120～150 r/min、1 h，以除去小膠質(zhì)細(xì)胞。丟棄細(xì)胞懸液，加入混合細(xì)胞培養(yǎng)基，再在恒溫水平搖床上，37℃、230～260 r/min、18～20 h。吸出懸液靜置于未涂多聚賴氨酸的培養(yǎng)瓶內(nèi)，37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置30 min，去除少量胞體較大的星形膠質(zhì)細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。吸取細(xì)胞懸液，1 500 r/min離心5 min，棄上清，加入OPCs培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，以1×104/cm2密度接種于賴氨酸包被的24孔板中，用OPC分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)OPCs分化成熟。培養(yǎng)5 d后用PBS漂洗，4%多聚甲醛固定30 min，按常規(guī)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法進(jìn)行O4染色。在熒光顯微鏡下隨意選取不同的視野拍照，根據(jù)O4+細(xì)胞特異性形態(tài)計(jì)算pro-oligodendroblast、immature oligodendrocyte和 mature oligodendrocyte階段O4+細(xì)胞百分比。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，兩組之間比較用t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)髓鞘形成和分布

FluoroMyelin染色顯示髓鞘主要分布在腦胼胝體內(nèi)。同時，與 GPR56+/-小鼠相比，髓鞘在 P14、P21和P28 GPR56-/-小鼠胼胝體中形成和分布明顯降低，見圖1。

2 電鏡觀察GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體中軸突髓鞘化

在低倍鏡下可以觀察到P28 GPR56-/-小鼠胼胝體中發(fā)生髓鞘化的軸突數(shù)目明顯減少，而在P28 GPR56+/-小鼠胼胝體中發(fā)生髓鞘化的軸突數(shù)目明顯增多。在P28 GPR56+/-小鼠胼胝體中軸突髓鞘在高倍電鏡下為明暗相間的同心圓板層排列，結(jié)構(gòu)完整，板層致密，邊緣光滑。在P28 GPR56-/-小鼠胼胝體中軸突髓鞘在高倍電鏡下可見髓鞘板層紊亂，髓鞘與軸索間隙增大，外形不規(guī)則，有空泡出現(xiàn);高倍鏡下顯示P28d GPR56-/-小鼠胼胝體中軸突髓鞘厚度明顯變薄。與P28 GPR56+/-小鼠軸突髓鞘相比，P28 GPR56-/-小鼠胼胝體中軸突髓鞘的g-ratio值明顯變大(P＜0.05)，見圖2。g-ratio值越大，軸突髓鞘越薄。這些結(jié)果進(jìn)一步表明GPR56基因敲除使軸突髓鞘變薄，軸突髓鞘化發(fā)生障礙。

Figure 1.Distribution of myelin sheath in the corpus callosum of P14，P21 and P28 GPR56+/-and GPR56-/-mice(FluoroMyelin staining，×100).圖1 髓鞘在GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)分布

Figure 2.Electron microscopy showing axonal myelination in the corpus callosum cross-sections collected from P28 GPR56-/-and littermate control GPR56+/-mice.Mean±SD.n=3.*P＜0.05 vs GPR56+/-.圖2 電鏡示P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體中軸突髓鞘化

3 GPR56基因敲除對OPCs成熟的影響

用PDGF-aR抗體特異染色發(fā)現(xiàn)，PDGF-aR陽性細(xì)胞主要分布在腦胼胝體內(nèi)，見圖3。細(xì)胞計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，在P7 GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)PDGF-aR+細(xì)胞數(shù)與P7 GPR56+/-小鼠，比較沒有顯著差異，見圖3。在低倍鏡下，原位雜交顯示在P28 GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)PLP+細(xì)胞數(shù)明顯少于P28 GPR56+/-小鼠，見圖4。在高倍鏡下，我們選不同的視野進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)在P28 GPR56+/-小鼠胼胝體內(nèi)PLP+細(xì)胞數(shù)明顯多于P28 GPR56-/-小鼠(P＜0.01)，見圖4。這些結(jié)果表明GPR56基因敲除不影響早期OPCs的生存，而抑制了OPCs分化成熟。

Figure 3.The numbers of PDGF-aR+cells in the corpus callosum of P7 GPR56+/-and GPR56-/-mice(immunofluorescence staining，×200).Mean±SD.n=3.圖3 P7 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)PDGF-aR+細(xì)胞數(shù)

4 Pro-oligodendroblast、immature oligodendrocyte和mature oligodendrocyte階段O4+細(xì)胞百分比

在pro-oligodendroblast階段O4+細(xì)胞形態(tài)有較少的突起，在immature oligodendrocyte階段O4+細(xì)胞有很多突起，相互交錯成網(wǎng)格狀，在mature oligodendrocyte階段O4+細(xì)胞有髓鞘形成，呈現(xiàn)地圖狀，見圖5A。在同等誘導(dǎo)成熟條件下，相同數(shù)目GPR56+/-和GPR56-/-OPCs在誘導(dǎo)分化成熟5 d后進(jìn)行O4染色發(fā)現(xiàn)，在pro-oligodendroblast階段GPR56-/-O4+細(xì)胞百分比明顯多于GPR56+/-O4+細(xì)胞，而在im-mature oligodendrocyte和 mature oligodendrocyte階段GPR56-/-O4+細(xì)胞百分比明顯少于GPR56+/-O4+細(xì)胞，見圖5B。這些結(jié)果進(jìn)一步在體外表明GPR56基因敲除可以抑制OPCs分化和成熟。

Figure 4.In situ hybridization showing the numbers of PLP+cells in the corpus callosum of P28 GPR56+/-and GPR56-/-mice.Mean±SD.n=3.＊＊P＜0.01 vs GPR56+/-.圖4 原位雜交示P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)PLP+細(xì)胞數(shù)

討論

FluoroMyelin染色是利用軸突髓鞘含脂量高進(jìn)行的一種親脂性染色［11］。與傳統(tǒng)的髓鞘染色方法相比FluoroMyelin染色步驟簡短，耗時短，只需20 min就可以顯示出軸突髓鞘的定位和含量［11］。另外，特異性好，它對細(xì)胞膜的脂質(zhì)親和力低，對髓鞘內(nèi)脂質(zhì)的親和力高，因此能夠特異地顯示軸突髓鞘［11］。目前很多研究者采用此方法研究軸突髓鞘［12］。我們的研究結(jié)果顯示:GPR56基因敲除后在小鼠胼胝體內(nèi)軸突髓鞘形成明顯減少。電鏡結(jié)果發(fā)現(xiàn):在 P28 GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)髓鞘化軸突的數(shù)目明顯減少，髓鞘的厚度變薄。電鏡發(fā)現(xiàn)與FluoroMyelin染色結(jié)果一致，進(jìn)一步證實(shí)了GPR56基因參與了軸突的髓鞘化過程。

Figure 5.O4 staining showing GPR56+/-and GPR56-/-OPCs differentiation in vitro.A:schematic diagram of the morphology of O4+oligodendrocytes at different stages;B:O4 immunostaining of the primary oligodendrocytes(×200).The red arrows represent OPCs at pro-oligo-dendroblast stage.The white arrows represent OPCs at immature oligodendrocyte stage.The red arrow heads represent OPCs at mature oligodendrocyte stage.Mean±SD.n=3.*P＜0.05，＊＊P＜0.01 vs GPR56+/-.圖5 O4染色顯示GPR56+/-和GPR56-/-少突膠質(zhì)細(xì)胞體外分化情況

軸突的髓鞘化是成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞突起纏繞軸突形成的多層脂質(zhì)髓鞘，此過程包括3個方面:(1) OPCs分化成熟;(2)神經(jīng)元軸突成熟;(3)成熟OLs向目標(biāo)軸突的遷移、OLs突起黏附到神經(jīng)元軸突上和OLs突起纏繞軸突形成髓鞘［13］。OPCs的分化和成熟在軸突髓鞘化中起著關(guān)鍵作用。成熟的OLs來源于OPCs。OPCs分化為成熟的OLs要經(jīng)歷Pre-O-2A、O-2A progenitor、pro-oligodendroblast、immature oligodendrocyte和 mature oligodendrocyte 5個發(fā)育階段［14］。有很多基因參與OPCs上述的分化成熟的調(diào)控［15-16］。那么，GPR56基因是否參與了OPCs分化成熟的調(diào)控?為了證實(shí)這一點(diǎn)，我們對P7 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體進(jìn)行PDGF-aR免疫染色，對P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝體進(jìn)行PLP原位雜交染色，然后進(jìn)行PDGF-aR+和PLP+細(xì)胞計(jì)數(shù)，比較兩者差異。PDGF-aR+細(xì)胞是OPCs發(fā)育早期階段的細(xì)胞，PLP+細(xì)胞是成熟的OLs。我們研究發(fā)現(xiàn):P7 GPR56+/-和 GPR56-/-小鼠胼胝體內(nèi)PDGF-aR+細(xì)胞數(shù)沒有明顯差別，但P28GPR56-/-小鼠胼胝體 PLP+細(xì)胞即成熟的 OLs明顯少于 P28 GPR56+/-小鼠。這表明 GPR56基因不影響早期OPCs生存，而影響OPCs分化成熟。為了進(jìn)一步證實(shí)這個結(jié)論，我們在體外進(jìn)行 GPR56+/-和GPR56-/-OPCs培養(yǎng)并誘導(dǎo)分化成熟，發(fā)現(xiàn)GPR56-/-OPCs分化成熟能力明顯降低。因此，體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。建立在這些實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之上，我們可以推測GPR56蛋白是OPCs分化成熟所必需，缺乏它會導(dǎo)致OPCs成熟障礙，從而也會導(dǎo)致腦白質(zhì)低髓鞘化。這一發(fā)現(xiàn)對于我們理解和治療軸突髓鞘化障礙相關(guān)性疾病有極其重要的意義。

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Knockout of GPR56 gene inhibits maturation of oligodendrocyte progenitor cells

DENG Yi-yu，ZHU Gao-feng，F(xiàn)ANG Ming，ZENG Wen-xin，JIANG Wen-xin，ZENG Hong-ke
(Emergency and Critical Care Department，Guangdong General Hospital，Guangdong Academy of Medical Sciences，Guangzhou 510080，China.E-mail:zenghongke@vip.163.com)

AIM:To explore the effect of G-protein-coupled protein 56(GPR56)gene knockout on axonal myelination and the maturation of oligodendrocyte progenitor cells(OPCs)in the corpus callosum of mouse brain.METHODS:Thirty-six GPR56+/-and GPR56-/-mice were selected and divided into GPR56+/-group and GPR56-/-group (18 mice in each group).According to the postnatal days，the mice in each group were further divided into P7，P14，P21 and P28 subgroups.Myelin formation in the corpus callosum of P14，P21 and P28 GPR56+/-and GPR56-/-mice was observed by FluoroMyelin staining.The number of myelinated axons and thickness of myelin sheaths were measured by electron microscopy.The numbers of platelet-derived growth factor alpha receptor-positive(PDGF-aR+)and proteolipid protein-positive(PLP+)cells in the corpus callosum of GPR56+/-and GPR56-/-mice were compared by the methods of immunofluorescence and in situ hybridization.GPR56+/-and GPR56-/-OPCs were cultured using P1 GPR56+/-and GPR56-/-mouse brain cortex and induced differentiation and maturation in vitro.The percentage of GPR56+/-and GPR56-/-O4+cells in pro-oligodendroblast，immature oligodendrocyte and mature oligodendrocyte stages was compared by O4 immunostaining.RESULTS:The myelin formation was obviously reduced in the corpus callosum of P14，P21 andP28 GPR56-/-mice as compared with GPR56+/-mice.The number of myelinated axons was obviously reduced and the gratio value was increased significantly in the corpus callosum of P28 GPR56-/-mice.No significant difference of the PDGF-aR+cell number in the corpus callosum between P7 d GPR56+/-and GPR56-/-mouse brains was observed.The number of PLP+cells was significantly decreased in the corpus callosum of P28 GPR56-/-mice as compared with GPR56+/-mice.The percentage of GPR56-/-O4+cells in pro-oligodendroblast stages was obviously higher than that of GPR56+/-O4+cells.On the contrary，the percentages of GPR56-/-O4+cells in immature oligodendrocyte and mature oligodendrocyte stages were significantly reduced.CONCLUSION:GPR56 may be involved in axonal myelination and OPCs maturation in the corpus callosum of mouse brain.

G-protein-coupled receptor 56;Corpus callosum;Oligodendrocytes;Myelination

R363

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2014.03.013

1000-4718(2014)03-0454-06

2013-11-06

2014-01-13

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81271329)

△通訊作者Tel:020-83837812-60228;E-mail:zenghongke@vip.163.com