ER、PR和AR在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及其意義*

郭歡任藝婷李曉燕李兆艾

ER、PR和AR在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及其意義*

郭歡①任藝婷①李曉燕①李兆艾②

目的：研究ER、PR及AR在內(nèi)異癥異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜和正常對照子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，闡述性激素及其受體與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生機(jī)制的關(guān)系，探究治療EMs的新途徑。方法：利用免疫組織化學(xué)的方法檢測50例EMs患者異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及20例正常對照子宮內(nèi)膜組織中ER、PR及AR的表達(dá)情況。結(jié)果：ER在EMs患者在位子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)均明顯高于異位內(nèi)膜及正常對照子宮內(nèi)膜，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；PR在EMs患者異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)明顯低于在位內(nèi)膜及正常對照子宮內(nèi)膜，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AR在EMs患者異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)明顯低于在位內(nèi)膜及正常對照子宮內(nèi)膜，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：EMs患者異位內(nèi)膜PR及AR表達(dá)的相對增高可能在內(nèi)異癥的發(fā)生與發(fā)展中起著一定的作用。

子宮內(nèi)膜異位癥； 雌激素受體； 孕激素受體； 激素受體； 免疫組織化學(xué)

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是常見婦科疾患之一，其發(fā)病率有逐年增加的趨勢。其發(fā)病機(jī)制不清，治療效果不理想。子宮內(nèi)膜異位癥是一種雌激素依賴性疾病，其發(fā)病于育齡期，卵巢激素對它的發(fā)生發(fā)展有著重要的作用，子宮內(nèi)膜作為性激素的靶器官，存在著性激素的受體，性激素與其受體結(jié)合發(fā)揮作用。本研究采用免疫組織化學(xué)的方法檢測三種性激素受體在EMs患者的在位及異位內(nèi)膜的表達(dá)，以探討內(nèi)異癥的發(fā)病機(jī)理及激素治療等問題。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年6月-2013年8月在山西省婦幼保健院行手術(shù)治療的70例患者，經(jīng)過患者的知情同意，研究對象年齡在20～45歲之間。其中研究組50例為經(jīng)腹腔鏡檢查確診的子宮內(nèi)膜異位癥患者，標(biāo)本為腹腔鏡手術(shù)切除卵巢囊腫的囊皮及其在位子宮內(nèi)膜。按美國生育協(xié)會(huì)修正（r-AFS）的分期標(biāo)準(zhǔn)，均為Ⅲ～Ⅳ期子宮內(nèi)膜異位癥。對照組20例為因卵巢冠囊腫或子宮中隔行手術(shù)治療的非內(nèi)異癥患者，標(biāo)本為患者的子宮內(nèi)膜。所有術(shù)中取得組織立即用10%甲醛固定，常規(guī)脫水及石蠟包埋，置-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。所有患者月?jīng)周期規(guī)律，無其他內(nèi)分泌、免疫和代謝性疾病，術(shù)前常規(guī)化驗(yàn)肝、腎功能均正常，檢查腫瘤標(biāo)記物以排除惡性腫瘤，術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未接受激素治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測ER、PR及AR表達(dá)。操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。主要步驟：石蠟切片，常規(guī)脫蠟；滅活內(nèi)源性過氧化物酶；抗原修復(fù)；山羊血清孵育；滴加一抗，4 ℃過夜；滴加二抗，37 ℃孵育30 min；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37 ℃孵育30 min；DAB顯色；自來水充分沖洗，復(fù)染；脫水，封片。

1.3 檢測方法 由顯微攝像機(jī)將免疫組織化學(xué)取得的切片圖像輸入計(jì)算機(jī)，應(yīng)用BI-2000醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）對圖片進(jìn)行灰度定量分析。每個(gè)樣本隨機(jī)選取5個(gè)不重疊400倍視野進(jìn)行測量，計(jì)算每視野的ER、PR及AR的平均灰度值。利用平均灰度值代表ER、PR及AR在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)水平。指標(biāo)表達(dá)的強(qiáng)弱與灰度值呈負(fù)相關(guān)，灰度值越小則陽性表達(dá)越強(qiáng)，灰度值越大則陽性表達(dá)越弱。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 χ2檢驗(yàn)，采用LSD-t法進(jìn)行多重比較，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) EMs患者在位子宮內(nèi)膜ER的灰度值為（111.88±6.01），均明顯低于EMs患者的異位內(nèi)膜灰度值（137.88±3.73）及正常對照子宮內(nèi)膜灰度值（140.35±6.24），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。ER 在EMs患者的異位內(nèi)膜及正常對照子宮內(nèi)膜中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 PR在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) EMs患者異位子宮內(nèi)膜PR的灰度值為（154.12±5.77），高于EMs患者的在位內(nèi)膜灰度值（134.29±4.84）及正常對照子宮內(nèi)膜灰度值（132.40±4.01），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。PR 在EMs患者的在位內(nèi)膜及正常對照子宮內(nèi)膜中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 AR在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) EMs患者異位子宮內(nèi)膜AR的灰度值為（149.26±5.12），高于EMs患者的在位內(nèi)膜灰度值（132.88±2.89）及正常對照子宮內(nèi)膜灰度值（131.87±6.25），比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。AR 在EMs患者的在位內(nèi)膜及正常對照子宮內(nèi)膜中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

隨著分子生物學(xué)研究的進(jìn)展，筆者發(fā)現(xiàn)性激素及其受體可能在EMs的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。有研究顯示，EMs的發(fā)生可能與細(xì)胞凋亡的抑制而導(dǎo)致的腺體上皮過度增生存在相應(yīng)聯(lián)系，說明EMs是性激素依賴性疾病，提示其發(fā)生與雌激素和孕激素有關(guān)[1]。盡管異位與在位內(nèi)膜的結(jié)構(gòu)和功能基本相同，但激素調(diào)節(jié)水平不同，其變化的幅度不如正常內(nèi)膜明顯[2]。異位子宮內(nèi)膜病灶的纖維化及組織分化的程度不同，局部生長環(huán)境不良，激素異構(gòu)體的含量及其生物活性的不同以及腺體細(xì)胞中激素受體的變化等，造成了對激素反應(yīng)的差異[3]。

研究表明，雌激素可以直接刺激異位病灶的細(xì)胞增殖，還可刺激多種因子參與卵巢子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病過程[4]。ER分為ERα及ERβ兩種亞型。有學(xué)者認(rèn)為，卵巢子宮內(nèi)膜異位組織上ER的表達(dá)可能是局部內(nèi)異癥病灶種植和生長的必要條件。Matsuzaki等[5]運(yùn)用RT-PCR及原位雜交的方法檢測發(fā)現(xiàn)在位及異位內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞均有ER mRNA表達(dá)，異位內(nèi)膜中ER的表達(dá)率均低于在位內(nèi)膜。亦有研究顯示，子宮腺肌病患者在位內(nèi)膜ER表達(dá)高于肌層異位內(nèi)膜及對照組子宮內(nèi)膜，異位內(nèi)膜ER蛋白的表達(dá)高于對照組子宮內(nèi)膜[6]。與Mehasseb等[7]的研究結(jié)果一致。同一EMs患者取自不同部位的異位內(nèi)膜組織，其對雌激素的反應(yīng)性也不同，提示了在位內(nèi)膜特性的變化在某種程度上更能反映內(nèi)異癥的病因[8]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示在位內(nèi)膜中ER的表達(dá)，不僅顯著高于正常內(nèi)膜，而且高于異位內(nèi)膜。由此證明選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERM）的應(yīng)用可延緩EMs的發(fā)生發(fā)展。孕激素與雌激素有相互協(xié)同的作用，同時(shí)，孕激素對雌激素又有拮抗作用，雌激素促進(jìn)子宮內(nèi)膜增生和修復(fù)。而孕激素則限制子宮內(nèi)膜增生，并使增生的子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)化為分泌期，孕激素類藥物是治療EMs的經(jīng)典藥物，有研究推測其機(jī)制是通過使異位子宮內(nèi)膜發(fā)生蛻膜樣改變，進(jìn)而萎縮[9]。孕激素是通過孕激素受體（包括PRA和PRB）起作用的，PR的合成依賴于ER的合成通路。有研究顯示，在子宮內(nèi)膜的增殖期和分泌期，EMs患者在位內(nèi)膜PR表達(dá)均高于異位內(nèi)膜，這種改變減輕了體內(nèi)性激素周期性波動(dòng)對在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長的影響，使在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞能夠持續(xù)低水平增殖[10]。亦有學(xué)者認(rèn)為，腺肌病組ER、PR在腺肌病病灶的表達(dá)低于在位內(nèi)膜[11]。本研究顯示，異位內(nèi)膜中PR含量不僅低于在位內(nèi)膜，且低于正常對照子宮內(nèi)膜。相較于在位內(nèi)膜，異位內(nèi)膜上PR含量的相對減少，可能導(dǎo)致其降低或失去對雌激素控制的反應(yīng)性，對揭示EMs的發(fā)病機(jī)制及選擇更有效的藥物治療方案具有一定意義?，F(xiàn)階段孕激素受體調(diào)節(jié)劑（SPRM）如米非司酮在臨床上已得到很好的應(yīng)用。

大量研究表明，雄激素過多會(huì)對雌激素產(chǎn)生拮抗作用，可減緩子宮內(nèi)膜的生長和增值。對雄激素受體與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系研究較少，王姝等[12]通過檢測人類雄激素受體基因多態(tài)性，對內(nèi)異癥病灶的克隆特征進(jìn)行了深入的檢測分析，結(jié)果顯示，內(nèi)異癥病灶的腺上皮細(xì)胞具有單克隆性，從組織克隆性的角度佐證了內(nèi)異癥是一種干細(xì)胞疾病的假說。本研究結(jié)果顯示，異位內(nèi)膜中AR含量不僅低于在位內(nèi)膜，且低于正常對照子宮內(nèi)膜。推測增加EMs患者異位內(nèi)膜中AR的含量，可延緩異位病灶子宮內(nèi)膜的增長。

盡管EMs患者異位內(nèi)膜的播散及種植受多種因素的影響，通過檢測其在位、異位內(nèi)膜中三種性激素受體的表達(dá)，為探討其發(fā)病機(jī)制、選擇合理的治療方案提供了一種新的思路。

[1]李靜勉， 張小丹. 雌激素受體， 孕激素受體與凋亡基因蛋白在子宮腺肌癥中的表達(dá)[J]. 中國實(shí)用醫(yī)藥， 2009， 4（26）： 17-18.

[2] Jiang J， Wu R， Wang Z， et al. Effect of mifepristone on estrogen and progesterone receptors in human endometrial and endometriotic cells in vitro[J]. Fertility and sterility， 2002， 77（5）： 995-1000.

[3]黃堅(jiān)， 石一復(fù)， 周彩云. 芳香酶 P450 與雌激素受體在子宮內(nèi)膜異位癥患者在位及異位子宮內(nèi)膜中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志， 2005， 40（3）： 171-174.

[4] Lebovic D I， Mueller M D， Taylor R N. Immunobiology of endometriosis[J]. Fertility and Sterility， 2001， 75（1）： 1-10.

[5] Matsuzaki S， Murakami T， Uehara S， et al. Expression of estrogen receptor alpha and beta in peritoneal and ovarian endometriosis[J]. Fertility and Sterility， 2001， 75（6）： 1198-1205.

[6]李斌， 王璐， 范穎， 等. bcl-2， bax 和ER蛋白在子宮腺肌病患者病灶中的表達(dá)變化及意義[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志， 2012， 47（12）：923-927.

[7] Mehasseb M K， Panchal R， Taylor A H， et al. Estrogen and progesterone receptor isoform distribution through the menstrual cycle in uteri with and without adenomyosis[J]. Fertility and Sterility， 2011，95（7）： 2228-2235.

[8] Wang Q， Zhao H， Xiang Q， et al. Effect of yikun neiyi wan on the expression of aromatase P450， COX-2， and ER related receptor in endometrial cells in vitro from patients with endometriosis[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine， 2009， 29（4）： 296-300.

[9] Schroder A K， Diedrich K， Ludwig M. Medical management of endometriosis： a systematic review[J].The Investigational Drugs Journal， 2004， 7（5）： 451-463.

[10] Wang J，Li B，F(xiàn)an Y. Expression of PR and BcI-2，bax in ectopic and eutopic endometrium in patients with endometriosis[J]. Journal of Practical Obstetrics and Gynecology， 2010， 26（1）： 45-47.

[11]王瑾蔚， 蔣樹娟， 張羽. 雌， 孕激素受體在子宮肌瘤， 子宮腺肌病中的表達(dá)及其意義[J]. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)， 2009， 37（4）： 268-270.

[12]王姝， 郎景和， 章蓉婭. 人類雄激素受體基因檢測子宮內(nèi)膜異位癥病灶克隆性[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志， 2010， 45（8）： 593-597.

The Expression and Significance of ER， PR and AR in Endometriosis Tissues

GUO Huan，REN Yi-ting，LI Xiao-yan，et al.//Medical Innovation of China，2014，11（12）：039-041

Objective：To explore the expression of ER， PR and AR in endometriosis ectopic endometrium， eutopic endometrium and normal endometrium tissues， describe the relationship between sex hormones and their receptors， and pathogenesis of endometriosis， and explore the new ways of treatment to EMs.Method：Immunohistochemistry was used to detect the expression of ER， PR and AR of 50 cases of ectopic endometrium and eutopic endometrium of patients EMs and 20 cases of normal endometrial tissue.Result：ER expression in eutopic endometrial tissue of EMs patients were higher than the normal endometrium and ectopic endometrium of patients， the differences were statistically significant （P＜0.05）.PR expression in ectopic endometrium tissue in EMs patients was less than the eutopic and normal endometrium， the differences were statistically significant （P＜0.05）. AR expression in ectopic endometrium tissue in EMs patients was less than the eutopic and normal endometrium， the differences were statistically significant （P＜0.05）.Conclusion：The relatively higher expression of PR and AR in EMs patients ectopic endometrium may play a role in the occurrence and development of endometriosis.

Endometriosis； Estrogen receptor； Progesterone receptor； Hormone receptor； Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1674-4985.2014.12.014

2014-02-13） （本文編輯：黃新珍）

山西省衛(wèi)生廳科技攻關(guān)計(jì)劃資助項(xiàng)目（20100311102-2）

①山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 山西 太原 030001

②山西省婦幼保健院

李兆艾

First-author’s address：The Second Clinical Medical College of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China