高效液相色譜法測定婦炎舒膠囊中馬錢苷含量

楊慈海，楊春麗

(1.湖北省荊門市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，湖北 荊門 448124； 湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，湖北 荊門 448124)

婦炎舒膠囊由忍冬藤、大血藤、甘草、大青葉、蒲公英、赤芍、大黃(制)、丹參、虎杖、川楝子(制)、延胡索(制)等中藥組方，具有清熱涼血、活血止痛的功效，用于急、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎活動(dòng)期。本品原藥品標(biāo)準(zhǔn)中忍冬藤無鑒別也無含量測定項(xiàng)[1]，且處方中用量較大。為此，筆者參照2010年版《中國藥典(一部)》[2]及相關(guān)文獻(xiàn)[3]，建立了忍冬藤中馬錢苷含量的測定方法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000 pump，DIONEX UltiMate 3000 Diode Array Detector液相色譜儀。馬錢苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為111640-200503，供含量測定用，含量100%)；婦炎舒膠囊(楊凌東科麥迪森制藥有限公司，批號(hào)分別為120909，121005，130101，規(guī)格為每粒0.4 g)；水為純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agela Venusil MP C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相:甲醇-磷酸鹽緩沖溶液[0.05 mol/L的磷酸氫二鉀∶0.05 mol/L 的磷酸二氫鉀(80∶20)](23∶77)；流速:1.0 mL/min，檢測波長:236 nm；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按馬錢苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液制備

精密稱取馬錢苷對照品6.8 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇約30 mL，超聲使溶解，冷卻，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含0.136 mg的對照品貯備溶液。精密吸取對照品貯備溶液5 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得每1 mL含0.027 2 mg的對照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下本品(批號(hào)為121005)，混勻，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理(400 W，頻率50 kHz)45 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。按處方制備工藝制得不含忍冬藤的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，在對照品溶液色譜主峰處，供試品溶液有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對照品溶液則無此峰，說明樣品中其他成分對馬錢苷的測定無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取對照品溶液(0.027 2 mg/mL)2，4，8，16，32 μL，分別注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=2.041 3X-0.103 1，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在0.054 4～0.870 4 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果馬錢苷峰面積的 RSD為0.46%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一批(批號(hào)為120909)供試品溶液，避光放置，分別于 0，2，4，6，8，10，16，20，24 h 時(shí)進(jìn)樣測定。結(jié)果馬錢苷峰面積的 RSD為0.55%(n=9)，表明供試品溶液在避光條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):按擬訂的含量測定方法，取同一批(批號(hào)為120909)樣品6份，依法進(jìn)樣測定。結(jié)果馬錢苷含量的 RSD為1.05%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量(批號(hào)為121005，規(guī)格為每粒0.49 mg，平均裝量為0.4 g)的樣品適量，共9份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入馬錢苷對照品貯備溶液2.0，2.0，3.0，3.0，4.0，4.0 mL，依法制備供試品溶液并測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 馬錢苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.4 樣品含量測定

按擬訂的含量測定方法測定3批樣品，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為120909，121005，130101的婦炎舒膠囊中馬錢苷的含量分別為每粒 0.48，0.49，0.32 mg。

3 討論

婦炎舒膠囊具有清熱涼血，活血止痛之功效，方中忍冬藤具有清熱解毒、疏風(fēng)通絡(luò)的作用，屬君藥。原標(biāo)準(zhǔn)中忍冬藤無鑒別和含量測定，而處方用量大，對其進(jìn)行含量測定可以較好地控制該制劑質(zhì)量，故選擇測定忍冬藤中馬錢苷的含量。

以50%甲醇為溶劑，采用浸泡、超聲、回流3種提取方法提取樣品，結(jié)果超聲和加熱回流處理相差不大，浸泡較差，故選用比較簡單的超聲方法提取。

參考文獻(xiàn)：

[1]WS-10524(ZD-0524)-2002:303-304，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)·中成藥地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)部分(外科婦科分冊)[S].

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:179.

[3]周建良，陳 勇，蔣慧蓮，等.高效液相色譜法測定盆炎凈膠囊中馬錢苷含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32(2):255-257.