甜櫻桃褐斑病研究進(jìn)展

孫楊等

摘要：褐斑病是甜櫻桃生產(chǎn)中一種常見病害。系統(tǒng)介紹了甜櫻桃褐斑病的病原菌及其生物學(xué)特征、發(fā)病癥狀、流行規(guī)律和防治措施等，并對(duì)今后的研究進(jìn)行了展望。

關(guān)鍵詞：甜櫻桃；褐斑病；病原菌；病害循環(huán)

中圖分類號(hào)：S436.629；S662.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）04-0750-03

Advances on Leaf Brown Spot Disease of Sweet Cherry

SUN Yang，SUN Yu-gang，WEI Guo-qin

（Shandong Institute of Pomology， Taian 271000， Shandon， China）

Abstract： Leaf brown spot disease is a common disease in sweet cherry production. The pathogens， biological characteristics and symptoms of this disease and environmental factors affecting the occurrence of disease were summarized. Agricultural prevention and treatment of this disease was introduced. Further researches on sweet cherry production were prospected.

Key words： sweet cherry； brown spot disease； pathogen； disease cycle

褐斑病是甜櫻桃生產(chǎn)中一種常見病害，主要危害葉片，造成葉片出現(xiàn)褐斑、穿孔，提早脫落，影響樹勢和第二年果實(shí)產(chǎn)量，發(fā)病嚴(yán)重的樹體在8月份葉片全部落光，導(dǎo)致秋季開花和新葉的產(chǎn)生[1]。該病除危害甜櫻桃外，在桃、李、杏、梅等核果類果樹上也常有發(fā)生[2]。褐斑病由Saccardo[3]于1876年在意大利首次發(fā)現(xiàn)，隨后在歐洲、美國、加拿大等地的櫻桃園內(nèi)也相繼發(fā)現(xiàn)此病。亞洲最早有文獻(xiàn)記載褐斑病是1923年，由三宅忠一[4]在日本發(fā)現(xiàn)。中國褐斑病的發(fā)現(xiàn)是在20世紀(jì)80年代后期[5]。隨著櫻桃種植面積的不斷擴(kuò)大，該病在山東、陜西、四川等地均有不同程度的發(fā)生，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，病田率和病株率均超過90%[6-8]。

目前，對(duì)褐斑病的病原菌及發(fā)生規(guī)律等方面的研究多見于國外文獻(xiàn)報(bào)道，而國內(nèi)的研究報(bào)道主要集中于防治措施[8-10]。本文通過對(duì)褐斑病的發(fā)病癥狀、病原菌侵染過程、發(fā)生規(guī)律、防治措施等方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，對(duì)甜櫻桃栽培管理過程中防治該病具有重要意義。

1 發(fā)病癥狀及危害

褐斑病主要危害甜櫻桃葉片，也危害新梢和果實(shí)。發(fā)病初期，在葉片上形成針頭大小的紫色小斑點(diǎn)，病斑逐漸擴(kuò)大為圓形褐色斑，邊緣變厚呈紅褐色至紫紅色，直徑2～5 mm。病部逐漸干燥、皺縮，周緣產(chǎn)生離層，脫落形成孔洞。斑上具有黑色小粒點(diǎn)，即病菌的子囊殼或分生孢子梗，能產(chǎn)生分生孢子。感病的樹體容易造成樹勢衰弱，冬季更容易受到凍害；生長時(shí)期樹體生長緩慢[1]。

2 病原菌

已有的文獻(xiàn)報(bào)道中，引起褐斑病的病原菌為Cercospora circumscissa Sacc.、Pseudocercospora circumscissa（Sacc.）Y.L. Guo et X.J. Liu、Passalora circumscissa （Sacc.）U.Braun，分別屬于尾孢屬、假尾孢屬及釘孢屬，均為無性型樣式屬（Form genus），3個(gè)屬在分類上均屬于無性態(tài)真菌（Anamorphic fungi）絲孢綱（Hyphomycetes）絲孢目（Hyphomycetales），其有性型為子囊菌門球腔菌科（Mycosphaerellaceae）[11-13]。

Cercospora circumscissa Sacc.核果尾孢霉，屬半知菌亞門真菌。異名C. cerasella Sacc.、C.padi Bubak et Sereb.。有性世代Mycosphaerella cerasella Aderh.稱櫻桃球腔菌，屬子囊菌亞門真菌。分生孢子梗緊密排列在子座上，青黃色至淺青黃褐色，不分枝，有1～3個(gè)隔膜，有明顯膝狀屈曲，屈曲處膨大，向頂漸細(xì)，頂部圓錐形，大小（3～5） μm×（20～70）μm。分生孢子橄欖色，圓柱形至倒棍棒形，有1～7個(gè)隔膜，大?。?.7～5.0） μm×（28～118）μm。子座球形或扁球形，生于表皮上；子囊殼濃褐色，球形，多生于組織中，具短嘴喙；子囊圓筒形或棍棒形；子囊孢子紡錘形[14]。

Pseudocercospora circumscissa （Sacc.）Y.L. Guo et X. J. Liu 核果假尾孢，屬半知菌亞門真菌。有性態(tài)為櫻桃球腔菌Mycosphaerella cerasella Aderh，屬子囊菌亞門真菌。子囊座球形至扁球形，大小72 μm。子囊圓筒形，大小35.4μm×7.6 μm。子囊孢子紡錘形，雙細(xì)胞，無色，大小15.3 μm×3.1 μm。無性態(tài)子座生在葉表皮下，球形，暗褐色，大小20～55 μm。分生孢子梗緊密簇生在子座上，青黃色，寬度不規(guī)則，不分枝，有齒突，曲膝狀，直立或略彎曲，頂端圓錐形，0～2個(gè)隔膜。分生孢子圓柱形，近無色，直立至中度彎曲，頂端鈍，基部長倒圓錐形平截，3～9個(gè)隔膜，大?。?5～80） μm×（2～4）μm[5，6]。

Passalora circumscissa （Sacc.） U.Braun核果釘胞菌，屬絲孢目真菌，球形子座生長在病癥處的表皮下面，褐色至暗褐色，直徑18～52 μm。分生孢子梗青色至褐色，緊密簇生于子座上，直或微彎，不分枝，屈膝狀，頂端圓錐形，大小（6.2～34.7） μm×（1.9～3.9） μm；分生孢子多細(xì)胞，細(xì)長，呈倒棍棒狀，3～9個(gè)隔膜，大?。?1.7～78.6） μm×（1.9～3.9） μm[15]。

3 病害發(fā)生規(guī)律及循環(huán)

初侵染源主要來自病害落葉，病原菌主要以分生孢子器和菌絲體在病葉或枝梢病組織內(nèi)越冬。翌年隨著氣溫的回升和降雨，分生孢子借助風(fēng)雨傳播，從自然孔口或傷口侵入葉片、新梢[16]。不同葉齡的葉片其感病能力也有較大差別，一般病原菌多侵染老葉片，幼嫩葉片受害較輕。

溫暖、多雨、空氣濕度大容易引發(fā)病害發(fā)生。沈娟等[17]研究空氣濕度與褐斑病的發(fā)病關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)氣溫在20～30 ℃時(shí)，濕度是決定褐斑病發(fā)病程度的主要因素，發(fā)病程度與空氣濕度呈正相關(guān)。夏季雨水多時(shí)，種植密度大，排水不良的櫻桃園發(fā)病嚴(yán)重。病原孢子侵染葉片1周后，病癥開始出現(xiàn)。若環(huán)境條件適宜，病原菌可在葉片背面形成分生孢子盤，產(chǎn)生分生孢子，通過雨水和風(fēng)的傳播而形成二次侵染。

由于病害發(fā)生受氣候等生態(tài)因子的影響，各地在病害發(fā)生的始發(fā)期、進(jìn)入高峰期的時(shí)間及發(fā)病程度上都存在一定差異。劉保友等[15]通過監(jiān)測褐斑穿孔病田間流行動(dòng)態(tài)時(shí)發(fā)現(xiàn)，山東煙臺(tái)地區(qū)櫻桃褐斑病的初始發(fā)病時(shí)間為6月下旬或7月初，7月下旬進(jìn)入發(fā)病高峰；而張濤等[6]調(diào)查發(fā)現(xiàn)，褐斑病的初始發(fā)病時(shí)間在陜西西安地區(qū)為5～6月份，早于山東煙臺(tái)地區(qū)。邵云華等[7]在山東濰坊、淄博、泰安調(diào)查的發(fā)病時(shí)間也不相同。

4 病原菌的分離、純化與鑒定

4.1 分離與純化

褐斑病的病原菌分離純化較難，主要是因?yàn)槌四繕?biāo)病原菌外，發(fā)病的寄主組織還有內(nèi)生菌、腐生菌等雜菌，雜菌在人工培養(yǎng)基上生長快，用常規(guī)的病組織分離法分離病原菌常被雜菌污染，分離成功率非常低；即使用常規(guī)方法分離后的菌株生長緩慢而且很難產(chǎn)生孢子，國內(nèi)外的研究者多數(shù)采用單胞分離的方法對(duì)其進(jìn)行分離和純化。Sztejnberg[18]將田間收集的病葉，用滅菌的純凈水沖洗病斑，獲得孢子懸浮液，在玻璃板涂布后，挑取單胞，在CMA培養(yǎng)基上獲得單胞菌株。劉保友等[15]采集田間新鮮病葉樣本，將子實(shí)體的孢子配成懸浮液，然后涂布到水瓊脂玻片上，挑取單胞，轉(zhuǎn)移至PDA培養(yǎng)基上，從而分離純化出單胞菌株。董娟華等[19]采集新鮮病葉，用毛細(xì)管針直接挑取病斑表面的孢子，涂布到水瓊脂片上，待孢子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)入PDA培養(yǎng)。

4.2 鑒定

褐斑病與細(xì)菌性穿孔病的發(fā)病癥狀相似，都表現(xiàn)出葉片病斑，病斑處枯萎凋落直至穿孔的癥狀，所以發(fā)病時(shí)單純通過外表觀察較難區(qū)分。在初步診斷時(shí)，進(jìn)行表面消毒、病原菌分離培養(yǎng)，通過分生孢子、分生孢子梗形狀、顏色等形態(tài)特征鏡檢觀察，以準(zhǔn)確鑒定病原菌的種類。但由于目標(biāo)病原菌生長較慢，產(chǎn)孢較少且容易被雜菌污染，傳統(tǒng)鑒定方法的準(zhǔn)確率大大降低。而且成熟的子囊孢子在病斑和分離培養(yǎng)條件下很少產(chǎn)生。López-Carbonell等[20]利用掃描電鏡對(duì)新鮮的櫻桃葉面病組織進(jìn)行觀察，確定了引起細(xì)胞葉綠體的超微結(jié)構(gòu)變化的病原菌為Cercospora circumscissa。

目前，較為常用的真菌鑒定方法是利用PCR技術(shù)，根據(jù)真菌的保守序列設(shè)計(jì)的引物，最常用的靶基因是核糖體基因，其中包括18S、5.8S、28SrDNA之間包括有內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS，通常認(rèn)為ITS區(qū)有著更高的進(jìn)化率，可對(duì)真菌進(jìn)行較高水平上的鑒別，如種與種以上的分類水平的鑒定[21，22]。

5 防治措施

褐斑病的發(fā)病時(shí)間多在6月下旬，此時(shí)甜櫻桃的采收工作基本完成。很多果農(nóng)在甜櫻桃采收完后放松了其管理工作，導(dǎo)致褐斑病的發(fā)生，使葉片枯萎脫落，樹勢衰落，造成第二年產(chǎn)量大幅下降。

5.1 農(nóng)業(yè)防治

①加強(qiáng)管理，增強(qiáng)樹勢，提高樹體的抗病能力，重視增施有機(jī)肥和配方施肥，確保樹體營養(yǎng)平衡；②冬春季要徹底清除枝條和地面的病殘葉，集中焚燒，重視夏季修剪，剪除和燒毀重病葉和枯死葉，能有效清除病原的初侵染源和再侵染源，又使果園通風(fēng)透光、降低濕度，達(dá)到減輕病害危害的目的；③選擇種植紅燈、美早、拉賓斯等抗病性較強(qiáng)的品種。

5.2 藥劑防治

化學(xué)藥劑噴灑還是目前最為有效的防治手段。萌芽前，樹體噴灑1∶1∶200倍的波爾多液。謝花后到果實(shí)采收前，及采收后可噴施2～3次殺菌劑，可用的藥劑包括：70%代森錳鋅可濕性粉劑500倍稀釋液、50%多菌靈可濕性粉劑800倍稀釋液、70%百菌清可濕性粉劑800倍稀釋液、25%戊唑醇2 000倍稀釋液?？稍谟昵斑x擇保護(hù)性殺菌劑，雨后選擇內(nèi)吸性殺菌劑，以保證藥效。

6 展望

6.1 病害調(diào)查及病原菌鑒定

與其他果樹相比，櫻桃病害研究相對(duì)滯后，國內(nèi)的研究主要側(cè)重于防治藥劑的篩選，而對(duì)病害分布情況、病原菌鑒定、侵染規(guī)律等研究較少。病害防治工作的基礎(chǔ)是病害調(diào)查和病原菌鑒定，只有明確不同種植區(qū)的病害發(fā)生情況及病原菌種類，了解病原菌的生物學(xué)特性及侵染規(guī)律，才能有效防治病原菌的侵染及病害的發(fā)生。

6.2 開展抗性資源篩選和抗病育種

選育抗病蟲能力強(qiáng)的品種是櫻桃育種的重要目標(biāo)[23]。目前，針對(duì)特殊病害進(jìn)行的抗病育種仍處于起步階段，且主要病害的鑒定方法尚未完善和普及，以至于研究時(shí)缺乏用于進(jìn)行系統(tǒng)研究和利用的抗性資源，生產(chǎn)上缺乏抗性突出、綜合性狀優(yōu)良的新品種。因此，加大抗性資源的引進(jìn)、搜集與鑒定力度，篩選出具有不同抗性水平的櫻桃資源，研究櫻桃資源的抗病機(jī)制，通過不同抗性資源間的雜交或轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗病品種，豐富櫻桃種質(zhì)資源，從根本上解決櫻桃病害危害，提高櫻桃產(chǎn)量和品質(zhì)。

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