美洛昔康口腔崩解片中美洛昔康含量測定方法研究

丁捷飛，馮定軍，胡黎鳳，俞 偉

（寧波立華制藥有限公司，浙江 寧波 315174）

美洛昔康（meloxicam）為新型非甾體抗炎藥（NSAIDs），臨床主要用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各類炎癥及疼痛的治療，止痛作用較強(qiáng)，同時可大幅度降低非甾體抗炎藥的胃腸和腎臟不良反應(yīng)，尤其能降低腸胃穿孔、潰瘍和出血的概率[1-2]。有關(guān)美洛昔康制劑的含量測定方法已有文獻(xiàn)報道[3-4]，但關(guān)于美洛昔康口腔崩解片中美洛昔康的含量測定尚未見文獻(xiàn)報道。為此，本試驗(yàn)中采用簡捷、方便的前處理方法，以反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定美洛昔康口腔崩解片中美洛昔康的含量，并對測定方法進(jìn)行了方法學(xué)考察?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent HP1100型高效液相色譜儀（四元泵VWD檢測器，真空脫氣機(jī)）；梅特勒AE240型電子分析天平。甲醇（色譜純，上海陸忠化學(xué)試劑廠）；醋酸銨（分析純，宜興市化學(xué)試劑三廠）；美洛昔康對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為100679-200401，供含量測定用）；美洛昔康口腔崩解片（寧波立華制藥有限公司，批號分別為 12091201，12091202，12091203，規(guī)格為每片含美洛昔康 7.5 mg）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；柱溫：室溫；流動相：0.1 mol/L 醋酸銨溶液 - 甲醇（50 ∶50）；流速：1.0 mL /min；檢測波長：271 nm。

2.2 溶液制備

精密稱取美洛昔康對照品10 mg，置100 mL容量瓶中，加入適量流動相，振搖使溶解，超聲助溶10 min，靜置待溶液恢復(fù)至室溫，用流動相稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為對照品溶液。取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取本品粉末適量（約含美洛昔康10 mg），置100 mL容量瓶中，加流動相適量，超聲助溶使充分溶解（約10 min），冷卻至室溫，用流動相稀釋至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對照品溶液及供試品溶液各20 μL，分別進(jìn)樣測定。結(jié)果在較短時間內(nèi)被測組分完全洗脫，理論板數(shù)為8 300，拖尾因子為1.03，對照品溶液和供試品溶液在擬訂色譜條件下均有較好的分離效果，見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

專屬性試驗(yàn)[5]：按處方量分別精密稱取全輔料、原料藥、試片各適量，用流動相稀釋成含主成分質(zhì)量濃度為100 μg/mL的全輔料貯備液、原料藥貯備液、試片貯備液（其中全輔料、試片需濾過，取續(xù)濾液作為貯備液）。精密量取以上貯備液各5 mL，置10 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，分別制得全輔料、原料藥及試片的供試品溶液。按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果溶劑、全輔料、原料藥、試片的雜峰個數(shù)分別為 1，3，1，3個，且美洛昔康主峰前后無其他雜質(zhì)峰干擾，溶劑峰和全輔料峰也都不干擾主峰的測定。

線性關(guān)系考察：分別精密量取對照品溶液 4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度。按擬訂色譜條件，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，以其峰面積與相對應(yīng)的質(zhì)量濃度作線性回歸，得回歸方程 Y＝34 321X+19 501，r＝0.999 8（n＝5）。結(jié)果表明，美洛昔康質(zhì)量濃度在40～60 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取樣品適量（相當(dāng)于含美洛昔康10 mg），依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣測定6次。結(jié)果平均峰面積為 1 763 034，RSD ＝0.22%（n＝6），表明方法重復(fù)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，8，24 h時進(jìn)樣。結(jié)果平均峰面積為 1 764 637，1 765 144，1 763 436，1 763 224，1 764 718，1 761 098，RSD ＝0.17% （n＝6），表明供試品溶液室溫下放置24 h以內(nèi)有較好的穩(wěn)定性。

回收率試驗(yàn)：精密稱 取 1.33倍處方量80%，100%，120%的原料藥，分別置100 mL容量瓶中，同時按處方加入適量的全輔料，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件平行測定3次，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 美洛昔康回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

2.4 樣品含量測定

取對照品溶液和供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積計算美洛昔康含量。結(jié)果批號為12091201，12091202，12091203 的 3 批樣品中每片含美洛昔康 7.5，7.6，7.5 mg。

3 討論

按照產(chǎn)品處方，分別用水配制質(zhì)量濃度（按美洛昔康計）為50 μg/mL的全輔料、原料藥及試片的供試品溶液，在200～400 nm波長內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果表明，全輔料在271 nm波長處有較大的紫外吸收，干擾主成分的分析，不能采用紫外分光光度法進(jìn)行含量分析。原料藥及試片在271 nm波長處均有最大吸收，故確定本品的檢測波長為271 nm。

參考2010年版《中國藥典（二部）》美洛昔康有關(guān)物質(zhì)測定方法[6-7]，精密稱取本品適量，用流動相制成質(zhì)量濃度為1 g/L的供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖。結(jié)果表明，該色譜條件下美洛昔康主峰保留時間為17.90 min，保留時間太長。調(diào)整流動相比例為 0.1 mol/L 醋酸銨溶液 - 甲醇（50 ∶50），將上述供試品溶液20 μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，調(diào)整比例后美洛昔康主峰保留時間為4.2 min，保留時間適宜，可以對該色譜條件進(jìn)行進(jìn)一步研究。

2010年版《中國藥典（二部）》采用滴定法測定美洛昔康原料藥的含量，在當(dāng)前國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)日趨嚴(yán)格的情況下，這種分析方法將逐漸為高效液相色譜法所取代。本試驗(yàn)結(jié)果可對美洛昔康原料藥及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究起到參考作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]魯統(tǒng)棟，張云良，程維國.非甾體抗炎新藥美洛昔康[J].中國藥業(yè)，1999，8(12)：56.

[2]Xu XC.COX-2 inhibitors in cancer treatment and prevention，a recent development[J].Anticancer Drugs，2002，13：127-137.

[3]馮新生，馮巧枝，劉富民.高效液相色譜法測定美洛昔康膠囊的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2003，23（4）：219-221.

[4]陳 雯.HPLC法測定美洛昔康分散片的含量[J].中國藥師，2009，12（6）：765-766.

[5]楊仲文，沈玲佳，劉 紅.美洛昔康中有關(guān)物質(zhì)的HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2003，34（11） ：575-576.

[6]楊岫巖，董 怡.非甾體類抗炎藥與環(huán)氧化酶異構(gòu)體[J].中華內(nèi)科雜志，1996，35(12)：834-835.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：448.