坎地沙坦酯氨氯地平片中降解產(chǎn)物的研究

靳茂禮 ，姚振江 ，申 磊 ，董珊紅

（1.河北省石家莊市食品藥品檢驗(yàn)所，河北 石家莊 050031；2.石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)＜石家莊＞有限公司，河北 石家莊 050091）

坎地沙坦酯氨氯地平片是由坎地沙坦酯和苯磺酸氨氯地平組成的復(fù)方制劑，為血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑和鈣離子拮抗劑的組合，雖然2個(gè)主要成分作用機(jī)制不同，但臨床療效確切、降壓平穩(wěn)，臨床耐受性和安全性良好。本試驗(yàn)中采用坎地沙坦酯片國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)方法[1]測(cè)定了坎地沙坦酯氨氯地平片的降解產(chǎn)物，采用液相色譜－質(zhì)譜/質(zhì)譜（LC－MS/MS）分析3種分析方法，測(cè)定降解產(chǎn)物峰面積與坎地沙坦酯峰面積的比值、降解產(chǎn)物的保留時(shí)間，確定了坎地沙坦酯氨氯地平片降解產(chǎn)物的來(lái)源?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

戴安U3000型高效液相色譜儀；LC－MS聯(lián)用系統(tǒng)；梅特勒AE－240型分析天平?？驳厣程辊グ甭鹊仄狡ㄈ毡疚涮锼幤饭I(yè)株式會(huì)社，批號(hào)為0007，規(guī)格為每片8mg∶5mg）；乙腈為色譜純，磷酸、醋酸等為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

對(duì)坎地沙坦酯氨氯地平片配制的供試品溶液進(jìn)行熱破壞，使其產(chǎn)生降解產(chǎn)物。取坎地沙坦酯氨氯地平片10片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉 1.625 g，加乙腈－水（3 ∶2）50 mL，超聲使溶解，溶液 98 ℃水浴2 h，放冷至室溫，過(guò)濾，量取續(xù)濾液適量，稀釋成每1 mL中含坎地沙坦酯0.4mg的溶液，作為供試品溶液。

2.2 檢測(cè)方法與條件

2.2.1 坎地沙坦酯氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)研究方法

色譜柱：菲羅門 C18柱 （250mm ×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：A 為磷酸鹽緩沖液（取8mmol/L磷酸二氫鉀溶液，用8mmol/L磷酸氫二鉀溶液調(diào)節(jié)pH至6.0），B為乙腈，按表1進(jìn)行線性梯度洗脫；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

2.2.2 坎地沙坦酯片國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)方法

色譜柱：菲羅門 C18柱（250mm ×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：A為乙腈－水－醋酸（57∶43∶1），B 為乙腈－水－醋酸（90∶10∶1），在30 min內(nèi)使流動(dòng)相A的比例由100%到0，流動(dòng)相B的比例由0到 100%，分析時(shí)間約為坎地沙坦酯峰保留時(shí)間的 2.5倍；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；進(jìn)樣量：20 μL。2.2.3 LC－MS/MS質(zhì)譜條件

質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子化（ESI）源；噴霧電壓IS為5 500 V；霧化溫度為 650 ℃ ；霧化氣 NEB（GAS 1）為 60 L/min；簾氣 CUR 為 25 L/min；輔助氣 AUX（GAS 2）為 60 L/min；檢測(cè)方式為正、負(fù)離子全掃描（Q1），解簇電壓分別為 50 V；掃描范圍為100～1 500 amu，圖譜顯示相對(duì)分子質(zhì)量范圍為100～1 100 amu；對(duì)主要色譜峰主要生成碎片進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜全掃描。

色譜條件：液相色譜柱為菲羅門C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相體系1為流動(dòng)相A甲酸－三乙胺緩沖液、流動(dòng)相B、乙腈；體系 2為流動(dòng)相 A 乙腈－水－甲酸（V∶V∶V，57∶43∶0.1）、流動(dòng)相 B 乙腈－水－甲酸（V∶V∶V，90∶10∶0.1）；柱溫為 35℃。

2.3 降解產(chǎn)物定性

2.3.1 利用相同波長(zhǎng)下降解產(chǎn)物與坎地沙坦酯峰面積之比

將 2.1 項(xiàng)下供試品溶液按 2.2.1 和 2.2.2 項(xiàng)下方法分別測(cè)定。色譜圖見(jiàn)圖1。各個(gè)降解產(chǎn)物峰面積與坎地沙坦酯峰面積比值見(jiàn)表2。暫將在2.2.1項(xiàng)下條件測(cè)得的雜質(zhì)峰與坎地沙坦酯峰保留時(shí)間比值約為 0.85，1.1，1.2，1.3，1.5 的雜質(zhì)分別定為雜質(zhì) 1、雜質(zhì)2、雜質(zhì) 3、雜質(zhì) 4、雜質(zhì)5。在同一波長(zhǎng)下，降解產(chǎn)物與坎地沙坦酯的吸收系數(shù)之比固定不變，上述2種色譜系統(tǒng)檢測(cè)波長(zhǎng)均為254 nm，故同一供試品溶液中降解產(chǎn)物峰面積與坎地沙坦酯峰面積的比值在上述2種色譜條件下應(yīng)相同。

2.3.2 利用雜質(zhì)保留時(shí)間

將在2.2.1項(xiàng)下色譜條件分離出的雜質(zhì)接出，得到雜質(zhì)1、雜質(zhì) 2、雜質(zhì) 3、雜質(zhì) 4、雜質(zhì) 5接出液。按照 2.2.2項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣雜質(zhì)接出液和供試品溶液。色譜圖見(jiàn)圖2和圖3，測(cè)得其保留時(shí)間見(jiàn)表 3。結(jié)果表明，雜質(zhì) 1、雜質(zhì) 2、雜質(zhì) 3、雜質(zhì)4、雜質(zhì)5分別對(duì)應(yīng)坎地沙坦酯有關(guān)物質(zhì)Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ。

圖1 不同色譜條件下供試品溶液的高效液相色譜圖

表2 降解產(chǎn)物與坎地沙坦酯峰的峰面積比值

表3 雜質(zhì)的保留時(shí)間

圖2 坎地沙坦酯氨氯地平片有關(guān)物質(zhì)高效液相色譜圖

圖3 供試品溶液有關(guān)物質(zhì)高效液相色譜圖

2.3.3 LC－MS/MS分析

將供試品溶液按照2.2.3項(xiàng)下質(zhì)譜條件檢測(cè)，進(jìn)行正離子的Q1全掃描。結(jié)果見(jiàn)圖4和圖5。在不同流動(dòng)相體系下，12.19 min及36.48 min色譜峰可確定為坎地沙坦酯色譜峰，其余雜質(zhì)峰相對(duì)分子質(zhì)量信息與其類似者暫無(wú)法確定其歸屬情況。在不同流動(dòng)相體系下，6.90 min及31.29 min色譜峰可確定為同一物質(zhì)來(lái)源化合物產(chǎn)生的質(zhì)譜信息，也就是說(shuō)2個(gè)色譜峰可判斷為同一雜質(zhì)成分產(chǎn)生。

圖4 正離子全掃描總離子流質(zhì)譜圖

圖5 色譜峰的正離子全掃描質(zhì)譜圖

3 討論

坎地沙坦酯氨氯地平片破壞性試驗(yàn)中，其中以熱破壞試驗(yàn)產(chǎn)生降解產(chǎn)物最多，故以熱破壞作為得到坎地沙坦酯氨氯地平片降解產(chǎn)物的方法。

采取了3種方法確定坎地沙坦酯氨氯地平片的降解產(chǎn)物，證實(shí)坎地沙坦酯氨氯地平片降解產(chǎn)物與坎地沙坦酯中有關(guān)物質(zhì)存在對(duì)應(yīng)關(guān)系，確定了坎地沙坦酯氨氯地平片降解產(chǎn)物的來(lái)源。

參考文獻(xiàn)：

[1] JX 20000248，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)·坎地沙坦酯片[S].