陰道細菌臨床檢驗方法的分析與比較

摘要：目的 比較三種不同檢驗方法對陰道細菌的陽性檢出率。方法 采集本院收治的86例陰道疾病患者的陰道分泌物，分別采取細菌培養(yǎng)法、革蘭染色法及PCR法檢驗陰道分泌物，并將檢驗結(jié)果進行對比分析。結(jié)果 革蘭染色法檢驗總陽性檢出率為75%，PCR法檢驗總陽性檢出率為97.06%；PCR法檢驗結(jié)果與細菌培養(yǎng)法無統(tǒng)計學(xué)差異性，P>0.05；革蘭染色法檢驗結(jié)果與細菌培養(yǎng)法有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異，P<0.01；PCR法與革蘭染色法有統(tǒng)計學(xué)明顯性差異，P<0.05。結(jié)論 PCR檢驗法具有較高的陽性檢出率，且操作簡便快捷，能夠滿足臨床診斷需要，可于陰道細菌臨床檢驗工作中推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：陰道細菌；細菌培養(yǎng)；PCR；革蘭染色法

正常健康女性的陰道內(nèi)各定植菌群保持著相對平衡狀態(tài)，當(dāng)自身抵抗力下降或者陰道內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變時，各菌群數(shù)量隨之改變而出現(xiàn)比例失衡，從而導(dǎo)致陰道炎的發(fā)生[1]。陰道炎是婦科臨床中一種最為常見的感染性炎癥疾病，如炎癥上行感染可導(dǎo)致異位妊娠、急慢性盆腔炎及不孕癥等嚴重疾病[2]。我院對陰道疾病患者的分泌物以3種不同的檢驗方法進行檢驗，以分析出最具有臨床適用性的檢驗方法，現(xiàn)將詳細情況總結(jié)如下。

1資料與方法

1.1一般資料 以本院2013年1月～3月收治的86例陰道疾病患者作為本院研究資料。年齡為21～48歲，平均（28.63±4.26）歲；全部患者均有明顯陰道炎臨床表現(xiàn)，并伴有不同程度的陰道瘙癢，陰道內(nèi)均可見大量白帶分泌物。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采集全部患者的陰道分泌物后分別采取A-細菌培養(yǎng)法、B-革蘭染色法及C-PCR法進行檢驗。全部患者均取截石位，在無菌陰道鏡下顯示宮頸，于陰道后穹窿處，以無菌棉簽沾取分泌物，準(zhǔn)備好已置入無菌生理鹽水的檢驗試管，將取得的分泌物移入試管中。

1.2.2細菌培養(yǎng)方法 取出試管中的陰道分泌物樣本，于無菌條件下使用無菌接種環(huán)將其接種至細菌分離專用培養(yǎng)基上，置入二氧化碳培養(yǎng)箱，于35℃條件下孵育48 h，擇取光滑、半透明、灰色的滴露狀菌株依據(jù)生化鑒定標(biāo)準(zhǔn)行生化檢驗。

1.2.3革蘭染色方法 以95%乙醇溶液浸泡清潔玻片，拭干備用；取試管中的陰道分泌樣本均勻涂于玻片上，于醫(yī)用顯微鏡下對涂片進行檢驗分析。

1.2.4 PCR方法 提取500 μL試管中的陰道分泌物樣本放入至生理鹽水中，以12000 r/min速度離心 10 min后去清除上清液，加入帶有適當(dāng)堿性的裂解液，于98℃溫度下加熱10 min，以12000 r/min速度再次離心5 min，取上清液制備為DNA模板。進行PCR細菌檢驗陰性與陽性對比時，選取與陰道分泌物DNA模板相同的PCR試劑，將無添加物的DNA作為陰性組，添加了DNA模板后的PCR擴容作為陽性組。將兩組進行對比分析，檢查 PCR的產(chǎn)物與擴容情況，自總體積當(dāng)中取得25 μL引物、模板、緩沖液及離子水，以無菌石蠟油30μl將其覆蓋，進入至PCR循環(huán)，循環(huán)共32環(huán)[3]，PCR循環(huán)標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)為：95℃ 5 min、94℃ 1 min、58℃ 1 min、72℃ 1 min，最后一環(huán)于72℃條件下延伸5 min。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析法 3種檢驗方法的檢驗結(jié)果進行循環(huán)對比，采取χ2檢驗，使用SPSS 19.0軟件進行計算；以細菌培養(yǎng)法檢驗結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計算革蘭染色法與PCR法陽性檢出率。

2結(jié)果

2.1檢驗結(jié)果 以細菌培養(yǎng)法為檢驗金標(biāo)準(zhǔn)，革蘭染色法檢驗總陽性檢出率為75%，PCR法檢驗總陽性檢出率為97.06%，見表1。

2.2統(tǒng)計學(xué)結(jié)果 PCR法檢驗結(jié)果與細菌培養(yǎng)法無統(tǒng)計學(xué)差異性，P>0.05；革蘭染色法檢驗結(jié)果與細菌培養(yǎng)法有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異，P<0.01；PCR法與革蘭染色法有統(tǒng)計學(xué)明顯性差異，P<0.05；見表2。

3討論

細菌檢驗是臨床工作中的一項重要內(nèi)容，可為感染性疾病的診斷治療提供科學(xué)性指導(dǎo)，并且能夠提高疾病傳播的防控力度[4]。陰道炎的主要致病原因為陰道內(nèi)上皮細胞組織在陰道內(nèi)環(huán)境的作用下，致細菌侵潤其表層糖原，使陰道內(nèi)桿菌出現(xiàn)酸堿度改變經(jīng)，桿菌數(shù)量異常減少，致病菌異常增殖，從而引發(fā)陰道炎[5]。陰道炎病起較為緩慢，初期癥狀不嚴重，不易引起患者重視，因此明確致病菌對于疾病的有效治療至關(guān)重要。陰道細菌檢驗是陰道疾病臨床診斷的重要方法，檢驗的準(zhǔn)確度對疾病的診斷與致病菌的確定均具有重要作用。

目前臨床中常用的陰道細菌檢驗方法有細菌培養(yǎng)法、PCR法及革蘭染色法等。其中細菌培養(yǎng)法是臨床公認的陰道細菌檢驗金標(biāo)準(zhǔn)，但細菌培養(yǎng)法的檢驗過程較為復(fù)雜，對檢驗設(shè)備與環(huán)境的要求高，不易于基層醫(yī)療單位開展，從某種程度上說限制了其臨床應(yīng)用范圍。革蘭染色法具有操作簡便的優(yōu)勢，在臨床中應(yīng)用廣泛，但能夠影響檢驗結(jié)果的因素較多，導(dǎo)致革蘭染色法在檢驗過程中存在著一定的誤差。常見的誤差原因有：染色過程中的脫色不當(dāng)，脫色過度可致革蘭陽性菌于顯微鏡觀察下被確定為革蘭陰性菌，脫色不足則可致檢驗中將革蘭陰性菌判斷為革蘭陽性菌。因此革蘭染色法雖具有操作方面的優(yōu)勢，但其檢驗結(jié)果較不理想。PCR技術(shù)最早是由Khorana等于1971年提出的核酸體外擴增設(shè)想而逐步形成的。PCR檢測法將PCR技術(shù)的敏感性、雜交DNA的特異性以及光譜學(xué)精確度等優(yōu)點融合于一體，使得PCR檢測具有理想的準(zhǔn)確度同時操作也更加簡便易行。

本次研究中細菌培養(yǎng)法的陽性檢出率為79.07%，革蘭染色法為59.30%，PCR法為76.74%；以細菌培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)革蘭染色法準(zhǔn)確率為75%，而PCR法的準(zhǔn)確率高達97.06%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)卡方檢驗，細菌培養(yǎng)法檢驗結(jié)果與PCR無統(tǒng)計學(xué)差異性P>0.05，但與革蘭染色法具有統(tǒng)計學(xué)差異性P<0.01，同時PCR法檢驗結(jié)果明顯優(yōu)于革蘭染色法P<0.05。充分的說明了PCR法在陰道細菌檢驗中具有理想的陽性檢出率，同時由于其操作簡便，檢驗快捷，可于陰道細菌臨床檢驗中推廣應(yīng)用。

參考文獻：

[1]鐘里華.156例婦女陰道細菌臨床檢驗方法的比較分析[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（19）：553-554.

[2]史躍杰.99例陰道細菌的檢驗方法比較分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（14）：2815-2817.

[3]吳祥如.實驗室對陰道細菌的兩種檢驗方法對比[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2013，10（32）：18-18，20.

[4]武翠娥.細菌檢驗結(jié)果失誤的臨床分析[J].河北醫(yī)藥，2011，33（19）：3012-3013.

[5]嚴冬霞，樊尚榮.復(fù)發(fā)性細菌性陰道病的發(fā)病機制和治療[J].實用婦產(chǎn)科雜志，2010，26（2）：85-87.編輯/肖慧