5—氟尿嘧啶抑制人肺腺癌細胞生長的作用方式研究

摘要：目的 對5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549細胞生長的作用方式進行分析探討，為今后的研究工作提供理論依據(jù)。方法 采用不同濃度的5-氟尿嘧啶對體外培養(yǎng)的人肺癌A549細胞進行處理，對5-氟尿嘧啶對A549細胞的抑制率、細胞周期以及細胞凋亡的影響進行分析，并對比分析不同濃度5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞生長的抑制情況。結果 隨著藥物濃度的增加，5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞的抑制率發(fā)生逐漸升高（P<0.05）。結論 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞生長的抑制存在濃度依賴性，低濃度時會誘導細胞自噬，高濃度時會導致細胞死亡，值得關注。

關鍵詞：5-氟尿嘧啶；人肺腺癌A549細胞；抑制；作用方式；凋亡

5-氟尿嘧啶為臨床上常用的一種抗腫瘤化療藥物，研究證實，其能夠對腫瘤細胞的生長產(chǎn)生顯著的抑制效果，在直腸癌、乳腺癌、消化道癌、絨毛膜上皮癌等諸多惡性腫瘤的治療中發(fā)揮了重要作用[1]。5-氟尿嘧啶屬于一種嘧啶類似物，在細胞內科轉化成不同的細胞毒性代謝產(chǎn)物，在同DNA、RNA結合后，可對合成進行干擾，進而對腫瘤細胞的生長進行抑制[2]。本次研究中出于對5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549細胞生長的作用方式進行分析探討的目的，采取不同濃度的5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞進行了處理，并對細胞存活情況進行了對比分析，現(xiàn)匯報如下。

1資料與方法

1.1一般材料 試驗材料包括：人肺腺癌A549細胞，胎牛血清，H-DMEM培養(yǎng)基，MTT，0.25%胰蛋白酶，倒置顯微鏡，酶標儀，流式細胞儀。

1.2方法

1.2.1細胞培養(yǎng) 取人肺腺癌A549細胞在含有1%雙抗以及10%胎牛血清的H-DMEM培養(yǎng)基上在5%CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，溫度控制在37℃，3 d后以1∶3的比例傳代，取對數(shù)生長期細胞展開各項試驗。

1.2.2 MTT檢測 取上述培養(yǎng)對數(shù)期人肺腺癌A549細胞，采取濃度為0.25%的胰酶消化后經(jīng)H-DMEM培養(yǎng)基對細胞濃度調整至1×105個/mL，接種在96孔微量滴度板，每孔中加入0.2 mL的細胞混懸液，在37℃條件下放置在5%CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，24 h后每個藥物濃度設6個復孔，試驗重復操作3次，取平均值。經(jīng)藥物處理后培養(yǎng)48 h，每孔中加入5 mg/mL MTT試劑20 uL，孵育4 h，而后加入200 uL DMSO，震蕩處理10 min后，保證結晶充分溶解，經(jīng)酶標儀對每孔的A值進行測定，計算抑制率，抑制率=[1-（實驗組平均A值/對照組平均A值）]×100%。經(jīng)改良寇式法對各藥物的抑制濃度進行計算[3]。

1.2.3流式細胞儀測定細胞周期 將實驗細胞分成對照組（不加藥）和抑制組，在給藥48消失后對細胞進行手機，經(jīng)胰酶消化后制成單細胞混懸液，計數(shù)細胞超過106/ml，經(jīng)PBS洗滌后離心處理，加入2 mL 4℃預冷的濃度為70%的無水乙醇，固定4 h以上，離心處理將乙醇去除，加入DNA染色劑，加入200 uL的TritonX-100，避光孵育15 min后上機檢測。

1.2.4流式細胞儀測定細胞凋亡 實驗分組與給藥劑量與1.2.3相同，在給藥后48 h對細胞進行收集，經(jīng)胰酶消化后制成單細胞混懸液，計數(shù)細胞超過106/mL，經(jīng)PBS洗滌后離心處理，加入抗體后避光孵育15 min，加入200 uL的Buffer液后進行檢測。

1.3數(shù)據(jù)處理 研究中相關數(shù)據(jù)資料采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件處理，對比中計量資料的對比采取t檢驗，計數(shù)資料的對比則是采取χ2檢驗，在P<0.05時，視為差異存在統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞的抑制作用 經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，隨著濃度的升高，5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞的抑制率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢（P<0.05），見表1。

2.2 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞周期的影響 經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，對照組與給藥組細胞周期存在明顯差異（P<0.05），見表2。

2.3 5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞凋亡的影響 對照組早期凋亡率為（0.42±0.11）%，晚期凋亡率為（1.86±0.22）%，5-氟尿嘧啶組早期凋亡率為（6.38±0.35）%，晚期凋亡率為（8.72±0.31）%，顯然5-氟尿嘧啶組細胞凋亡率較對照組發(fā)生顯著升高（P<0.05）。

3討論

5-氟尿嘧啶屬于嘧啶拮抗劑，其為臨床上比較常用的一種對晚期實體瘤進行化療的藥物，經(jīng)臨床實踐發(fā)現(xiàn)，各種瘤細胞對5-氟尿嘧啶的耐藥性對化療效果產(chǎn)生了一定程度的影響。5-氟尿嘧啶通過對核酸的合成進行干擾而達到一致腫瘤細胞增生的效果[4]。本次研究中出于對5-氟尿嘧啶抑制人肺腺癌A549細胞生長的作用方式進行分析探討的目的，采用不同濃度的5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞進行了處理，統(tǒng)計結果發(fā)現(xiàn)，5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞存在明顯的抑制作用，且抑制率隨著給藥濃度的增加而呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢；5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞周期具有一定程度的影響，表現(xiàn)為5-氟尿嘧啶作用48小時后會將細胞阻滯在S期，G2期無細胞，G1期有少量細胞；5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞凋亡會產(chǎn)生顯著影響，表現(xiàn)為增加細胞早期和晚期凋亡率。這一結果與相關文獻報道結果一致，充分證實了5-氟尿嘧啶對人肺腺癌A549細胞生長的抑制存在濃度依賴性，低濃度時會誘導細胞自噬，高濃度時會導致細胞死亡，值得關注。

參考文獻：

[1]李文新.肺癌標志物的研究現(xiàn)狀與臨床應用評價[J].內蒙古醫(yī)學雜志，2010，42（11）：1329-1331.

[2]盛雅萍，郭偉健.5-氟尿嘧啶耐藥機制及其治療[J].國際腫瘤學雜志，2012，33（07）：502-505.

[3]張德海，張晴，張翠允，等.5-FU 對肺癌細胞生長抑制作用機制研究[J].濱洲醫(yī)學院學報，2009，32（94）：259-261.

[4]楊樹棟，廖園莉，何勝東.Prohibitin 對非小細胞肺癌細胞增殖和凋亡的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學進展，2010，10（15）：2859-2861. 編輯/肖慧