家鴿鑄型透明塑化標本的制作

摘要：目的 展示家鴿的呼吸系統(tǒng)（氣管、肺、氣囊）及全身骨標本的制作技術(shù)。方法 探討了將鑄型、透明、簡易塑化技術(shù)結(jié)合起來。結(jié)果 制作結(jié)果滿意。結(jié)論 利用鑄型、透明、簡易塑化技術(shù)制作的家鴿標本，兼有3種技術(shù)之長，為家鴿標本。

關(guān)鍵詞：標本；鑄型；透明；塑化

在解剖學的比較科研項目中，需要展示各類脊椎動物的呼吸系統(tǒng)，而鳥類的呼吸系統(tǒng)極為特殊，為便于觀察鳥類的呼吸系統(tǒng)，展現(xiàn)鳥類與人類等呼吸系統(tǒng)的不同，采用鑄型、透明、簡易塑化三者相結(jié)合的技術(shù)，制作出鳥的呼吸系統(tǒng)、全身骨的標本，制作過程如下。

1藥品與器材

1.1藥品 95%酒精、無水酒精、氫氧化鉀、雙氧水、甘油、自凝牙托水、自凝牙托粉、鄰苯二甲酸二丁酯、綠色油畫顏料、茜素紅、吡咯烷酮（PVP K30）、麝香草酚。

1.2器材 棉線、100 mL一次性注射器、手術(shù)刀、鑷子、量筒、大容量燒杯、干燥箱（自然通風可不備）、玻璃棒、天平、臺秤。

2實驗過程

2.1計算鑄型灌注材料的用量 先對家鴿編號，稱量家鴿體重并記錄。然后計算家鴿體重總和，將體重數(shù)據(jù)乘以17%（可依據(jù)氣囊體積17 mL/體重100 g計算）再除以75%（配制灌注材料時會自然損耗25%），所得數(shù)據(jù)即為此次試驗所需鑄型灌注材料的體積總量[1]。

2.2家鴿肺和氣囊的灌注

2.2.1配制鑄型材料 依據(jù)前面計算鑄型灌注材料的總量，配置的比例為：自凝牙托粉75 g，自凝牙托水100 mL，鄰苯二甲酸二丁酯44 mL[2]，配置方法：將少量的綠色油畫顏料、鄰苯二甲酸二丁酯加入自凝牙托水混合均勻，加入適量的自凝牙托粉充分攪拌即可。配置時應稍多勿少，略有剩余，且隨時配制隨時使用。

2.2.2灌注鑄型材料 選擇30d齡雄性幼鴿，處死排血后，小心拔除上頸部、腹部側(cè)面的羽毛，切開上頸部皮膚，分離出氣管，用一次性注射器吸取適量自凝牙托材料，將針頭穿入氣管，用棉線結(jié)扎氣管。將自凝牙托材料注入氣管，如腹部出現(xiàn)顏色，則表明灌注液已進入腹部的氣囊，如阻力加大，停止注射，提起家鴿頭部，鴿體下垂，拍打并震動鴿體再行注射，直至腹部顏色范圍不再擴大，充滿為止，整個灌注過程不可大力、過量、不然會導致氣囊壁破裂。灌注完成后，棉線結(jié)扎氣管，待灌注材料固化變硬后，再灌注余下氣管。灌注完成，清除口腔、鼻孔多余灌注材料，轉(zhuǎn)入下一步驟。

2.3透明標本 由于家鴿肌肉發(fā)達，采用氫氧化鉀溶液和甘油2次透明法，具體過程如下。

2.3.1固定 灌注材料固化后，除去標本羽毛、皮膚、腦、眼、食管、嗉囊，在肛前開口，小心去除內(nèi)臟，不要觸及肺和氣囊，然后浸入95%酒精溶液中，固定5～7 d，更換固定液1次/2 d，至標本充分硬化固定，乙醇還可起到脫脂作用，然后浸入清水中除去乙醇。

2.3.2漂白 用質(zhì)量分數(shù)3%的過氧化氫溶液浸泡固定后的標本數(shù)天，期間標本要經(jīng)常翻動，刮除趾部的皮膚，肌肉呈現(xiàn)乳白色時，即可停止漂白。

2.3.3初次透明 在肌肉發(fā)達處，用針刺形成密集孔道，同時注射5%的氫氧化鉀溶液，將上述處理過的標本，放入1%的氫氧化鉀溶液中浸泡數(shù)天，待肌肉半透明隱約可見骨骼時，透明完成。期間可更換透明液，可加速透明進程，也可使組織疏松，利于后續(xù)步驟各試劑的滲透。

2.3.4染色 茜素紅染色劑配制方法：在質(zhì)量分數(shù)95%的酒精中加入茜素紅，配制成飽和溶液，此飽和溶液可長期存放備用，取一份（體積）飽和溶液與9份（體積）70%的酒精混合，配制成稀釋溶液，然后取一份（體積）稀釋溶液，加入等份（體積）2%氫氧化鉀溶液，即配制成染色劑[2]。將標本放入染色劑中進行染色，至骨骼變?yōu)樽霞t色，即可停止染色。

2.3.5脫色 先用水洗去表面浮色，取1%的氫氧化鉀溶液一份（體積）與質(zhì)量分數(shù)50%甘油溶液一份（體積）配制成混合溶液，將標本放入混合溶液中，直至肌肉顏色退為淡紅色為止。

2.3.6再次透明 將標本依次浸入40%、50%、60%、80%的甘油各2d，然后浸入純甘油中，直至肌肉無色透明，突顯出鑄型的氣管、氣囊、肺和骨骼即可。如果肌肉發(fā)達透明效果不好，可往此處注射純甘油，使其透明。

2.4塑化保存 塑化劑選用聚乙烯吡咯烷酮，簡稱PVP，是一種高分子水溶性化合物，塑化劑選用黏著性適中，水溶液為酸性的PVPK30。

2.4.1 PVP溶液配制 PVPK30塑化劑的配制方法：先配制質(zhì)量分數(shù)0.5%的氫氧化鉀溶液作為母液，然后配制麝香草酚無水酒精溶液，并加入母液中，使母液中麝香草酚質(zhì)量分數(shù)約為2%，將母液加熱到60℃，向母液加入適量聚乙烯比咯烷酮，分別制成25%和50%的PVP液。

2.4.2塑化 使用濃度梯度脫水塑化法塑化標本。此法操作簡單，需要設備少，但塑化劑用量大，時間較長。將透明好的標本依次浸沒入25%的PVP溶液浸泡5～7 d，再轉(zhuǎn)入50%的PVP溶液浸泡5～7 d[3]。

2.4.3干燥、保存 將標本整形后，既可以選用自然通風干燥，也可將溫度控制在25℃，在干燥箱中對流干燥。干燥完成后，再將制作好的標本放入有機玻璃盒或標本瓶中，密閉保存，同時可在其中放少量干燥劑。

3討論

在制作標本過程中，應注意以下幾方面：①為使鑄型完整、飽滿，要使用新鮮幼體（約30 d內(nèi)）；②為使透明效果明顯，必須對標本排血；③灌注材料選用改良的自凝牙托材料，因為其配制簡單，便于操作，灌注后收縮率小，無需補注，一次成型；④從處死到鑄型灌注，時間越短灌注效果越好；⑤經(jīng)酒精防腐處理后，用茜素紅染色效果優(yōu)于用甲醛防腐固定。漂白可使透明效果更佳。使用氫氧化鉀溶液時，濃度宜小不宜大，以免標本的骨骼離散，在塑化標本時加入少量麝香草酚，可使保存效果更佳。

總之，利用鑄型、透明、簡易塑化技術(shù)制作的家鴿標本，兼有3種技術(shù)之長，也為今后制作人體器官標本開辟了一條新路。

參考文獻：

[1]劉代成，鄒鵬.介紹一種家鴿肺和氣囊鑄型標本的制作方法[J].山東師范大學學報：自然科學版，1992，7（1）：117-119.

[2]楊成杰，石瑾，李中華.解剖學特殊標本制作技術(shù)[M].香港：銀河出版社，2004：96.

[3]董代輝，唐安科.聚乙烯吡咯烷酮制作魚類透明骨骼標本的研究[J].生物學通報，2010，45（1）：45.編輯/肖慧